是(shi)采(cai)用(yong)大腸桿菌Turbo菌株經特殊工藝(yi)處(chu)理(li)得到的感受(shou)態細胞。
Turbo感受(shou)態細胞 載體構建(jian)

NobleRyder C9118 Turbo感受(shou)態細胞

產品(pin)貨號：C9118

產品(pin)名稱(cheng)：Turbo 感受(shou)態細胞

產品(pin)規(gui)格：10*100μl

Turbo感受(shou)態細胞 載體構建(jian)

產品(pin)簡介(jie)：

儲存條件：-70℃

具體產品(pin)的參(can)數以(yi)收(shou)到產品(pin)說(shuo)明書(shu)的參(can)數為準

NobleRyder C9118 Turbo 感受(shou)態細胞

是采(cai)用(yong)大腸桿菌Turbo菌株經特殊工藝(yi)處(chu)理(li)得到的感受(shou)態細胞。Turbo 菌株是生(sheng)長(chang)最(zui)快(kuai)的大腸(chang)桿菌菌株，菌株平(ping)板(ban)上(shang)6.5小時(shi)可見克隆，搖菌4-6小時(shi)可提取(qu)質粒(li)。核(he)酸(suan)內(nei)切酶(mei) (endA1)基因(yin)的缺(que)失有(you)利(li)於提高質粒(li)DNA的產量(liang)和質(zhi)量(liang)。菌株的LacIq基因(yin)的表達受(shou)到嚴(yan)格控制，可克隆毒性基(ji)因。ΔlacZM15基因的存在(zai)可用(yong)於藍(lan)白(bai)斑(ban)篩選。菌株還(hai)具有(you)抗T1噬菌體感染的特點。Turbo感受(shou)態細胞經特殊工藝(yi)制作(zuo)，pUC19質粒(li)檢(jian)測(ce)轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)大(da)於109cfu/μgDNA。

基因(yin)型:

F'proA+B+lacIqΔlacZM15/fhuA2Δ(lac-proAB)glnVgalK16galE15R(zgb-210::Tn10)TetSendA1thi-1Δ(hsdSmcrB)5

菌株抗性: 對(dui)氨芐qing黴素、氯(lv)mei素、卡na黴(mei)素、壯觀mei素、鏈mei素、四huan素敏(min)感。

操作(zuo)方(fang)法：（以下(xia)操作(zuo)均(jun)按(an)無菌條件的標準(zhun)進行(xing)）

1.將(jiang)感受(shou)態細胞置於冰水浴(yu)中化凍。待細胞剛(gang)化凍後(hou)，加(jia)入(ru)質(zhi)粒(li)DNA或5-10μL連接產物(wu)到細胞中，用(yong)手指撥da管底(di)，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻。

2.冰水(shui)浴(yu)中靜(jing)置30分(fen)鐘(zhong)。

3.42℃熱擊(ji)60秒鐘(zhong)，不要(yao)晃動。

4.冰水(shui)浴(yu)中靜(jing)置2分(fen)鐘(zhong)。

5.加(jia)入(ru)500μL 的室溫(wen)的SOC或LB培(pei)養(yang)基(ji)。

6.置於37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復蘇(su)培(pei)養60分(fen)鐘(zhong)。

7.取(qu) 50-100μL 菌液塗(tu)布在含(han)有抗(kang)性的LB平(ping)板(ban)上(shang)。待液體吸幹後(hou)，倒置平(ping)板(ban)，37℃過夜(ye)培(pei)養(yang)。

（平(ping)板(ban)劃線(xian)分(fen)離(li)法：復蘇(su)培(pei)養結(jie)束後(hou)，12000rpm 離(li)心(xin)30秒鐘(zhong)，棄(qi)掉上(shang)清，留(liu)100μL左(zuo)右的液體，用(yong)200μL 吸頭輕(qing)輕(qing)吹打散(san)菌塊(kuai)，取(qu)10μL重(zhong)懸的菌液分(fen)多點(dian)滴在平(ping)板(ban)上(shang)，傾(qing)斜吸頭，用(yong)吸頭頭(tou)部的側(ce)面將(jiang)滴在平(ping)板(ban)上(shang)的液體來回劃線(xian)。這(zhe)個方(fang)法可以(yi)獲得(de)更(geng)大的單克隆菌落。此方(fang)法主要(yao)適(shi)用(yong)於質粒轉(zhuan)化，連接產物(wu)轉(zhuan)化最好用(yong)塗(tu)布法。）

（質粒(li)快(kuai)速轉(zhuan)化步驟：對(dui)於氨芐青mei素抗性的質粒(li)，將(jiang)步驟2的時(shi)間縮(suo)短到5分(fen)鐘(zhong)，完成(cheng)步驟4後(hou)，可直接塗(tu)布或劃線(xian)於含(han)氨芐qing黴素抗性的LB平(ping)板(ban)上(shang)。其(qi)它抗性的質粒(li)仍需60分(fen)鐘(zhong)的復蘇(su)培(pei)養。）

註意(yi)事項：

1．感受(shou)態細胞應(ying)保(bao)存在(zai)-70℃，不可反復凍(dong)融(rong)，否則(ze)其(qi)轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)將(jiang)會降(jiang)低。

2．實(shi)驗過(guo)程(cheng)中應(ying)嚴(yan)格無(wu)菌操作(zuo)，防止其(qi)它DNA或雜(za)菌的汙(wu)染，避(bi)免為以後(hou)的篩選、鑒定(ding)帶(dai)來(lai)影響。

3．轉(zhuan)化時(shi)，轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)與(yu)外源(yuan)DNA的濃度在(zai)壹定(ding)範(fan)圍內(nei)成(cheng)正比，但(dan)當加(jia)入(ru)的外源(yuan)DNA量(liang)過多或體積過大(da)反而(er)會降(jiang)低轉(zhuan)化效(xiao)率(lv)。轉(zhuan)化時(shi)DNA體積要(yao)小於感受(shou)態細胞體積的十分(fen)之(zhi)壹(yi)。

4．轉(zhuan)化率(lv)的計算(suan)：轉(zhuan)化率(lv)＝產(chan)生(sheng)菌落的總(zong)數/鋪(pu)板(ban)DNA總(zong)量(liang)。

5．為防止轉(zhuan)化實(shi)驗不成(cheng)功，可(ke)以(yi)保(bao)留(liu)部(bu)分(fen)連接產物(wu)，以重(zhong)新轉(zhuan)化，將(jiang)損(sun)失降(jiang)到最di。

Turbo感受(shou)態細胞 載體構建(jian) 

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C9118 Turbo 感受(shou)態細胞  10*100μl