適用於(yu)昆蟲(chong)桿(gan)狀病毒Bac-to-Bac系統(tong)中(zhong)同源重組的(de)菌株，用於(yu)產生(sheng)重組Bacmid。
DH10BAC 感(gan)受態細(xi)胞(bao) 載(zai)體(ti)構建(jian)

NobleRyder C9268 DH10BAC 感(gan)受態細(xi)胞(bao)

產品貨號：C9268

產品名稱(cheng)：DH10BAC 感(gan)受態細(xi)胞(bao)

產品規(gui)格：20*100ul/10*100ul

DH10BAC 感(gan)受態細(xi)胞(bao) 載(zai)體(ti)構建(jian)

產品簡(jian)介：

儲(chu)存(cun)條件：-70℃

具體產品的(de)參數(shu)以收到產品說明書的(de)參數(shu)為準

NobleRyder C9268 DH10BAC 感(gan)受態細(xi)胞(bao)適用於(yu)昆蟲(chong)桿(gan)狀病毒Bac-to-Bac系統(tong)中(zhong)同源重組的(de)菌株，用於(yu)產生(sheng)重組Bacmid。DH10Bac細(xi)胞(bao)包(bao)含親本BacmidbMON14272和(he)輔(fu)助質(zhi)粒pMON7124 。親本Bacmid 包(bao)含壹(yi)個(ge)mini-F 復制子、卡(ka)na黴(mei)素抗(kang)性(xing)基(ji)因(yin)、attTn7位點(dian)和(he)lacZα-互補(bu)因(yin)子。輔(fu)助質(zhi)粒包(bao)含四(si)huan素抗(kang)性(xing)和(he)tnsABCD 區域(yu)，該(gai)區(qu)域提(ti)供了(le)mini-Tn7從(cong)供體(ti)質(zhi)粒插(cha)入(ru)親本Bacmid 靶位點(dian)所(suo)需要的(de)轉座蛋白(bai)。供(gong)體(ti)如 pFastBac 系列(lie)質(zhi)粒（pFastBac1，pFastBacDual等(deng)）含有(you)Tn7R和(he)Tn7L同源重組臂(bi)，Tn7R和(he)Tn7L之間包(bao)含慶(qing)da黴(mei)素抗(kang)性(xing)基(ji)因(yin)、昆(kun)蟲病毒多角(jiao)體基(ji)因(yin)啟(qi)動(dong)子、多(duo)克隆位點(dian)和(he)SV40 病毒的(de) PolyA 加尾(wei)信(xin)號。當含有(you)靶基(ji)因(yin) pFastBac 的(de)重組質(zhi)粒轉化(hua)到 DH10Bac 細(xi)胞(bao)後，發(fa)生(sheng)重組後就可產生(sheng)重組Bacmid，提(ti)取純化(hua)重組Bacmid轉染(ran)昆蟲細(xi)胞(bao)Sf9或Sf21就可以包(bao)裝(zhuang)產生(sheng)昆(kun)蟲(chong)病(bing)毒。此外，DH10Bac細(xi)胞(bao)中(zhong)的(de)Theφ80dlacZΔM15基因(yin)的(de)產物可以實(shi)現β-半(ban)乳(ru)糖苷酶的(de)α-互補(bu)現象(xiang)，用於(yu)重組Bacmid的(de)藍白(bai)斑(ban)篩選(xuan)。大(da)腸桿菌(jun)DH10Bac感受態細(xi)胞(bao)是經(jing)特(te)殊(shu)工(gong)藝(yi)制備，使用pUC19 質(zhi)粒檢測(ce)，轉化(hua)效(xiao)率(lv)可達107cfu/μg。

基(ji)因(yin)型(xing)：

F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ-rpsLnupG/pMON14272/pMON7124

操作(zuo)方(fang)法(fa)：（以(yi)下操作(zuo)均(jun)按無(wu)菌(jun)條件的(de)標準進(jin)行(xing)）

1. 取(qu)感(gan)受態細(xi)胞(bao)置於(yu)冰(bing)浴(yu)中(zhong)，如(ru)需分裝(zhuang)可將剛(gang)融(rong)化(hua)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液分(fen)裝(zhuang)到無(wu)菌(jun)預(yu)冷(leng)的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，置於(yu)冰(bing)浴(yu)中(zhong)。

2. 向(xiang)感(gan)受態細(xi)胞(bao)懸(xuan)液中(zhong)加(jia)入1-10ng重組質(zhi)粒，輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉離(li)心(xin)管以(yi)混勻(yun)內容(rong)物(wu)，在(zai)冰(bing)浴(yu)中(zhong)靜(jing)置30分(fen)鐘。

3. 將離(li)心(xin)管置於(yu)42℃水浴(yu)中(zhong)放置90秒鐘，然(ran)後快(kuai)速(su)將管(guan)轉移(yi)到冰(bing)浴(yu)中(zhong)，使細(xi)胞(bao)冷(leng)卻(que)2分鐘，該(gai)過(guo)程(cheng)不要(yao)搖動離(li)心(xin)管。

4. 向(xiang)每(mei)個(ge)離(li)心(xin)管中(zhong)加(jia)入900μL無(wu)菌(jun)的(de)SOC（不含抗(kang)生(sheng)素），混勻(yun)後置於(yu)37℃200rpm，搖床振(zhen)蕩(dang)培養(yang)4小時。

5. 用SOC培養(yang)基(ji)進(jin)行(xing)10倍(bei)梯(ti)度稀(xi)釋，如分成(cheng)3個(ge)稀(xi)釋梯度 10-1，10-2，10-3。

6. 取(qu)100μL 的(de)各個(ge)梯(ti)度的(de)培養(yang)物(wu)用於(yu)塗(tu)布。等(deng)平板中(zhong)的(de)液體(ti)wan全(quan)吸收(shou)後，倒置平(ping)板，37℃培養(yang) 24-48小時。

7. 保(bao)留(liu)剩(sheng)余的(de)菌液於(yu)4℃冰(bing)箱中(zhong)，視平(ping)板上(shang)菌落生(sheng)長(chang)情(qing)況決(jue)定(ding)去留(liu)。

註意(yi)事項：

1．感(gan)受態細(xi)胞(bao)應保(bao)存(cun)在-70℃，不(bu)可反(fan)復凍融，否則(ze)其(qi)轉化(hua)效(xiao)率(lv)將會(hui)降(jiang)低。

2．實(shi)驗過程(cheng)中(zhong)應(ying)嚴格無(wu)菌(jun)操作(zuo)，防止(zhi)其(qi)它(ta)DNA或雜菌(jun)的(de)汙(wu)染(ran)，避免為(wei)以後的(de)篩選(xuan)、鑒(jian)定(ding)帶來影(ying)響。

3．轉化(hua)時，轉化(hua)效(xiao)率(lv)與(yu)外(wai)源(yuan)DNA的(de)濃(nong)度在壹(yi)定範圍(wei)內成(cheng)正比，但(dan)當(dang)加(jia)入的(de)外源(yuan)DNA量(liang)過(guo)多或(huo)體(ti)積(ji)過大反(fan)而(er)會降(jiang)低(di)轉化(hua)效(xiao)率(lv)。轉化(hua)時DNA體(ti)積(ji)要小於(yu)感受態細(xi)胞(bao)體積(ji)的(de)十分(fen)之壹(yi)。

4．轉化(hua)率(lv)的(de)計算(suan)：轉化(hua)率(lv)＝產生(sheng)菌(jun)落(luo)的(de)總數(shu)/鋪(pu)板DNA總量(liang)。

5．為(wei)防止(zhi)轉化(hua)實(shi)驗不成(cheng)功，可以保(bao)留(liu)部分(fen)連(lian)接產物，以(yi)重新轉化(hua)，將損(sun)失(shi)降到最(zui)di。

DH10BAC 感(gan)受態細(xi)胞(bao) 載(zai)體(ti)構建(jian) 

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C9268 DH10BAC 感(gan)受態細(xi)胞(bao)  20*100ul/10*100ul