來源(yuan)於Stbl2 菌(jun)株（Stbl2為JM109衍生菌(jun)株），用(yong)於(yu)克(ke)隆(long)不(bu)穩定序(xu)列(lie)（如重復(fu)序列(lie)，逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)病毒序(xu)列(lie)等）和(he)甲基化(hua)的(de)DNA序列(lie)，特別(bie)適(shi)合構(gou)建重(zhong)組逆轉錄(lu)病毒或(huo)慢病(bing)毒質(zhi)粒。
Stbl4感(gan)受態細(xi)胞(bao) 載體構(gou)建

NobleRyder C9348 Stbl4感(gan)受態細(xi)胞(bao)

產(chan)品貨(huo)號(hao)：C9348

產(chan)品名(ming)稱：Stbl4感(gan)受態細(xi)胞(bao)

產(chan)品規(gui)格：20×100μl

Stbl4感(gan)受態細(xi)胞(bao) 載體構(gou)建

產(chan)品簡(jian)介(jie)：

儲(chu)存條(tiao)件(jian)：-70℃

具(ju)體產(chan)品的(de)參(can)數以收到產品說(shuo)明(ming)書的(de)參(can)數為準

NobleRyder C9348 Stbl4感(gan)受態細(xi)胞(bao)來(lai)源於(yu)Stbl2 菌(jun)株（Stbl2為JM109衍生菌(jun)株），用(yong)於(yu)克(ke)隆(long)不(bu)穩定序(xu)列(lie)（如重復(fu)序列(lie)，逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)病毒序(xu)列(lie)等）和(he)甲基化(hua)的(de)DNA序列(lie)，特別(bie)適(shi)合構(gou)建重(zhong)組逆轉錄(lu)病毒或(huo)慢病(bing)毒質(zhi)粒。可(ke)用(yong)於(yu)大(da)質(zhi)粒的(de)構(gou)建和(he)擴增(zeng)，適(shi)用(yong)於(yu)構(gou)建和(he)擴增(zeng)質(zhi)粒 cDNA 文(wen)庫(ku)。區(qu)別(bie)於(yu)Stbl2 菌(jun)株，Stbl4 菌(jun)株在(zai) IPTG和X-gal 存在(zai)的(de)條件(jian)下(xia)，可(ke)進(jin)行α互(hu)補原理的(de)藍白斑(ban)篩(shai)選(xuan)實驗(yan)。感(gan)受態細(xi)胞(bao)經特殊(shu)工(gong)藝制作，pUC19質(zhi)粒檢(jian)測(ce)轉(zhuan)化(hua)效率(lv)大(da)於(yu)108cfu/μg。

基(ji)因型:

mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal-thi-1supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)

菌(jun)株抗(kang)性：對(dui)氨芐qing黴(mei)素，卡na黴(mei)素，壯(zhuang)guan黴(mei)素敏(min)感(gan)；對(dui)四huan素(su)有抗性。

操(cao)作方(fang)法(fa)：（以(yi)下(xia)操作均(jun)按(an)無菌(jun)條(tiao)件(jian)的(de)標準進(jin)行）

1. 將(jiang)感(gan)受態細(xi)胞(bao)置(zhi)於(yu)冰(bing)水浴(yu)中化(hua)凍。待(dai)細(xi)胞(bao)剛化(hua)凍後(hou)，加入(ru)質(zhi)粒DNA 或(huo)5-10μL連接(jie)產(chan)物到細(xi)胞(bao)中，用(yong)手(shou)指撥(bo)da管(guan)底，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻；

2. 冰(bing)水浴(yu)中放(fang)置15-30分鐘(zhong)，不(bu)要晃動；

3. 42℃熱擊(ji)60秒鐘(zhong)，不(bu)要晃動；

4. 冰(bing)水浴(yu)中放(fang)置2分鐘(zhong)，不(bu)要晃動；

5. 加入(ru)500μL無菌(jun)的(de)SOC或(huo)LB培(pei)養基；

6. 置(zhi)於37℃搖(yao)床中，150-200rpm 震(zhen)蕩(dang)復(fu)蘇培(pei)養60分鐘(zhong)；

7. 取(qu)50-100μL 菌(jun)液(ye)塗(tu)布在(zai)含(han)有抗性的(de) LB 平板(ban)上(shang)。待液(ye)體吸(xi)幹(gan)後(hou)，倒(dao)置(zhi)平板(ban)，37℃培(pei)養12-16小時(shi)。

（當(dang)克(ke)隆不(bu)穩定片(pian)段時(shi)，為了(le)降低重組(zu)錯誤(wu)率(lv)，復(fu)蘇培(pei)養和塗(tu)布培(pei)養最好(hao)采(cai)用(yong) 30℃的(de)培(pei)養條件(jian)，平板(ban)在(zai)30℃培(pei)養時(shi)需(xu)要24小(xiao)時(shi)左右(you)。）

（平板(ban)劃(hua)線分離法(fa)：復(fu)蘇培(pei)養結束後(hou)，12000rpm 離(li)心(xin) 30 秒鐘(zhong)，棄(qi)掉上(shang)清(qing)，留(liu) 100μl 左右(you)的(de)液(ye)體，用(yong) 200μL吸(xi)頭輕(qing)輕(qing)吹(chui)打(da)散(san)菌(jun)塊(kuai)，取10μL重(zhong)懸的(de)菌(jun)液(ye)分多點(dian)滴在(zai)抗(kang)性(xing)LB平板(ban)上(shang)，傾(qing)斜吸頭，用(yong)吸(xi)頭頭部(bu)的(de)側(ce)面將滴(di)在(zai)平板(ban)上(shang)的(de)液(ye)體來(lai)回劃線。37℃培(pei)養過夜。這(zhe)個(ge)方(fang)法(fa)可(ke)以(yi)獲得更多更大(da)的(de)單(dan)克(ke)隆(long)菌(jun)落(luo)。）

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

1．感(gan)受態細(xi)胞(bao)應(ying)保存在(zai)-70℃，不(bu)可(ke)反(fan)復(fu)凍融，否則(ze)其(qi)轉化(hua)效率(lv)將(jiang)會(hui)降低。

2．實(shi)驗過(guo)程(cheng)中應(ying)嚴格無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)，防止(zhi)其(qi)它DNA或(huo)雜(za)菌(jun)的(de)汙染，避免(mian)為以(yi)後(hou)的(de)篩(shai)選(xuan)、鑒定帶(dai)來(lai)影(ying)響(xiang)。

3．轉(zhuan)化(hua)時(shi)，轉化(hua)效率(lv)與(yu)外(wai)源(yuan)DNA的(de)濃度(du)在(zai)壹定範圍(wei)內(nei)成(cheng)正比(bi)，但當(dang)加入(ru)的(de)外源(yuan)DNA量過(guo)多或(huo)體積(ji)過大(da)反(fan)而會(hui)降低轉化(hua)效率(lv)。轉(zhuan)化(hua)時(shi)DNA體積(ji)要小(xiao)於(yu)感(gan)受態細(xi)胞(bao)體積(ji)的(de)十(shi)分之(zhi)壹。

4．轉(zhuan)化(hua)率(lv)的(de)計(ji)算：轉(zhuan)化(hua)率(lv)＝產(chan)生菌(jun)落(luo)的(de)總數/鋪板(ban)DNA總量。

5．為防(fang)止(zhi)轉化(hua)實驗(yan)不(bu)成(cheng)功，可(ke)以(yi)保留部分連接(jie)產(chan)物(wu)，以(yi)重新轉(zhuan)化(hua)，將損失降到最di。

Stbl4感(gan)受態細(xi)胞(bao) 載體構(gou)建 

產(chan)品訂(ding)購信息(xi)：

C9348 Stbl4感(gan)受態細(xi)胞(bao)  20×100μl