是參與細胞雕(diao)亡(wang)過程(cheng)的蛋(dan)白酶家(jia)族，包含(han)I0多個(ge)成(cheng)員(yuan)。Caspase-3 是(shi)雕(diao)亡(wang)過程(cheng)中(zhong)最主(zhu)要(yao)的終末(mo)蛋(dan)白酶,也(ye)是研(yan)究最多 caspase;它(ta)激活 pro-caspase-2,6,7,9特(te)異水(shui)解(jie)多種(zhong)關(guan)鍵雕(diao)亡(wang)蛋(dan)白如(ru)PARP，介(jie)導(dao)染色(se)質固縮、雕(diao)亡(wang)小(xiao)體生成(cheng)、核 DNA 斷(duan)裂。
Caspase-3活(huo)性(xing)檢測(ce)試劑盒 細胞雕(diao)亡(wang)

NobleRyder BC1618 Caspase-3 活性(xing)檢(jian)測試劑盒Caspase-3 Activity Assay Kit

產品(pin)貨號(hao)：BC1618

產品(pin)名(ming)稱(cheng)：Caspase-3 活(huo)性檢(jian)測試(shi)劑盒Caspase-3 Activity Assay Kit

英文(wen)名(ming)稱(cheng)：Caspase-3 Activity Assay Kit

產品(pin)規格(ge)：50T/100T/20T

Caspase-3活性(xing)檢(jian)測試劑盒 細(xi)胞雕(diao)亡(wang)

產品(pin)簡介(jie)：

檢測(ce)方(fang)法：比色法 Colorimetric

儲(chu)存條(tiao)件：Store at -20℃，6 months

具(ju)體產品(pin)的參數以收到產(chan)品(pin)說明(ming)書的參數為準(zhun)

NobleRyder BC1618 Caspase-3 活性(xing)檢(jian)測試劑盒Caspase-3 Activity Assay Kit是參與細胞雕(diao)亡(wang)過程(cheng)的蛋(dan)白酶家(jia)族，包含(han)I0多個(ge)成(cheng)員(yuan)。Caspase-3 是(shi)雕(diao)亡(wang)過程(cheng)中(zhong)最主(zhu)要(yao)的終末(mo)蛋(dan)白酶,也(ye)是研(yan)究最多 caspase;它(ta)激活 pro-caspase-2,6,7,9特(te)異水(shui)解(jie)多種(zhong)關(guan)鍵雕(diao)亡(wang)蛋(dan)白如(ru)PARP，介(jie)導(dao)染色(se)質固縮、雕(diao)亡(wang)小(xiao)體生成(cheng)、核 DNA 斷(duan)裂。

測定(ding)原(yuan)理基(ji)於(yu)Caspase-3 特(te)異水(shui)解(jie)多肽(tai)底物(wu) DEVD-pNA(Asp-Gu-Val-Asp-p-nitroanilide),釋(shi)放的(de)遊離(li)硝(xiao)基苯(ben)胺(an) pNA在: 405nm 有(you)最大(da)吸收(shou)峰(feng)。采用(yong)可(ke)見光光度比色(se)法測(ce)定(ding)pNA而(er)得到(dao)Caspase 活性。適(shi)用於檢測哺(bu)乳動(dong)物組(zu)織、細(xi)胞 Caspase-3 活(huo)性(xing)。

需(xu)自(zi)備(bei)的(de)儀(yi)器和(he)用品(pin):

可(ke)見分光光度計/酶標儀(yi)、100mL玻璃(li)比(bi)色皿/96 孔(kong)板(ban)、臺式離(li)心機(ji)、水浴(yu)鍋/恒(heng)溫培(pei)養(yang)箱(xiang)、可(ke)調式(shi)移(yi)液(ye)器、研(yan)缽/勻漿(jiang)器、冰和(he)蒸餾水(shui)。

操(cao)作步驟(zhou):

壹、樣本(ben)處(chu)理(可(ke)適(shi)當(dang)調(tiao)整待測樣本(ben)量，具(ju)體比例(li)可(ke)以參考文獻)

1.培養(yang)細(xi)胞:先(xian)收(shou)集細(xi)胞到(dao)離(li)心管，離(li)心後棄(qi)上(shang)清(qing):按照(zhao)細(xi)胞數(shu)量(約(yue)106個(ge))加(jia) 100L 試劑二(er)(若裂解(jie)不(bu)充(chong)分(fen)可(ke)提高至(zhi) 150-200μL),震蕩(dang)重(zhong)懸沈(chen)澱(dian)，置冰上(shang)靜(jing)置15 min,15000g49C離(li)心 10-15min,取上(shang)清(qing)置冰上(shang)待測(ce)。

2、組織(zhi):按照(zhao)組(zu)織質量(g):試劑(ji)二(er)體積(mL)為1:5-~10的比例(建議稱(cheng)取約(yue)01g組織，加(jia)入1mL試劑(ji)二(er))，冰浴(yu)研磨(mo)或充(chong)分剪碎(sui)，置冰上(shang)靜(jing)置15min，4℃，15000g離(li)心10-15min，取上(shang)清(qing)置冰上(shang)待測(ce)。

二、測(ce)定(ding)步(bu)驟

1、可(ke)見分光光度計/酶標儀(yi)預(yu)熱(re) 30min 以上，調節(jie)波(bo)長(chang)至(zhi)405nm，分光光度計蒸(zheng)餾水(shui)調零(ling)。

2、標準(zhun)溶(rong)液(ye)的(de)稀(xi)釋(shi):將5mmolLpNA 標準(zhun)品(pin)用標(biao)準(zhun)品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)至(zhi) 200、100、50、25、12.5、0umolL,的標(biao)準(zhun)溶(rong)液(ye)備(bei)用(yong)。

註意事項(xiang):

1、由於試劑二(er)中(zhong)含(han)有(you)還原(yuan)劑(ji)(DTT)，建議將(jiang)樣本(ben)用(yong)水(shui)稀(xi)釋(shi)2倍後，用Bradford 法(fa)測定(ding)蛋(dan)白濃度(du)，以降低 DTT對蛋(dan)白濃度(du)測(ce)定(ding)的(de)下擾(rao)。不(bu)建議使(shi)用 BCA法(fa)測定(ding)蛋(dan)白濃度(du)。

Caspase 活性(xing)測(ce)定(ding)值(zhi)低最常(chang)見的原(yuan)因(yin)是細(xi)胞未(wei)發(fa)生雕(diao)亡(wang)或細(xi)胞量太少(shao)，其(qi)次(ci)是(shi)觀測(ce)時間(jian)不(bu)恰當(dang)。誘(you)導雕(diao)亡(wang)時，2、並(bing)非(fei)劑(ji)量越(yue)大時間(jian)越(yue)長 Caspase 活(huo)性就越(yue)高。建議設(she)置不(bu)同(tong)劑(ji)量和(he)時間(jian)點(dian)如(ru)0、2、4、8、16、24小(xiao)時，以檢測優(you)良的觀察點(dian)。

3、所測(ce)樣本(ben)的(de)值(zhi)高於(yu)標準(zhun)曲(qu)線(xian)上限(xian)shi，可(ke)用試(shi)劑(ji)二(er)稀(xi)釋(shi)樣本(ben)後重(zhong)新(xin)測定(ding)。

4、蓋緊(jin) 96 孔(kong)板(ban)蓋(gai)子並(bing)用(yong)封(feng)口(kou)膜(mo)密(mi)封。37℃孵育，肉眼可(ke)見顏色(se)變(bian)黃時的OD405值約(yue)為0.2，此(ci)時即可(ke)測定(ding)。顏(yan)色變(bian)化(hua)不(bu)明(ming)顯可(ke)延長(chang)反應或過(guo)夜，但(dan)酶活性(xing)較(jiao)強(qiang)時，孵育時間(jian)過(guo)長(chang)將(jiang)導(dao)致(zhi)反應失去(qu)線(xian)性關(guan)系。

Caspase-3活性(xing)檢(jian)測試劑盒 細(xi)胞雕(diao)亡(wang) 

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