NobleRyder Tricine-SDS-PAGE 電泳(yong)能(neng)夠(gou)較好(hao)的分(fen)離10KD 以(yi)下(xia)的蛋白或多(duo)肽(tai)，是電泳(yong)法分(fen)離多(duo)肽(tai)的主(zhu)要(yao)方(fang)法，30T 壹般(ban)可(ke)以配制30～35 塊(kuai)膠(jiao)，具(ju)體配制的量(liang)應(ying)根(gen)據(ju)器具(ju)大小決定。電泳(yong)分(fen)離後(hou)可直接考馬(ma)斯(si)亮藍染(ran)色、銀(yin)染(ran)等(deng)。
諾博(bo)萊(lai)德 Tricine-SDS-PAGE凝(ning)膠(jiao)配制試(shi)劑盒(he)

諾博(bo)萊(lai)德 Tricine-SDS-PAGE凝(ning)膠(jiao)配制試(shi)劑盒(he)

產品(pin)簡(jian)介(jie)：

聚丙烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠(jiao)電泳(yong)(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)原理在(zai)於聚丙烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠(jiao)為(wei)網(wang)狀(zhuang)結(jie)構(gou)，具(ju)有分(fen)子篩效應(ying)。它(ta)有兩(liang)種(zhong)形式：非(fei)變性聚丙烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠(jiao)及 SDS-聚丙烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠(jiao)；非變(bian)性聚丙烯(xi)酰胺(an)凝(ning)膠(jiao)，在電泳(yong)的過(guo)程(cheng)中，蛋白質(zhi)能(neng)夠(gou)保持完整(zheng)狀(zhuang)態，並(bing)依(yi)據(ju)蛋白質(zhi)的分(fen)子量大小、蛋白質(zhi)的形(xing)狀(zhuang)及其(qi)所(suo)附(fu)帶的電荷量而(er)逐(zhu)漸呈(cheng)梯(ti)度(du)分(fen)開，主(zhu)要(yao)用(yong)於分(fen)離蛋白質(zhi)和(he)寡(gua)核苷酸(suan)。常(chang)規(gui) SDS-PAGE凝(ning)膠(jiao)電泳(yong)適用於分(fen)離大分(fen)子蛋白，對(dui)於小分(fen)子量的蛋白或多(duo)肽(tai)，分(fen)辨率大大降低(di)。

NobleRyder Tricine-SDS-PAGE 電泳(yong)能(neng)夠(gou)較好(hao)的分(fen)離10KD  以下(xia)的蛋白或多(duo)肽(tai)，是電泳(yong)法分(fen)離多(duo)肽(tai)的主(zhu)要(yao)方(fang)法，30T 壹般(ban)可(ke)以配制30～35  塊(kuai)膠(jiao)，具(ju)體配制的量(liang)應(ying)根(gen)據(ju)器具(ju)大小決定。電泳(yong)分(fen)離後(hou)可直接考馬(ma)斯(si)亮藍染(ran)色、銀(yin)染(ran)等(deng)。 

產品(pin)組(zu)成(cheng)：

操(cao)作步(bu)驟(僅供參考(kao))：

1、配制10%過(guo)硫(liu)酸(suan)銨(an)(APS)：直接在0.3g Ammonium Persulfate中加(jia)入3ml蒸餾(liu)水，充(chong)分(fen)溶解(jie)，分(fen)裝(zhuang)成(cheng)小份儲存於-20℃或 4℃。註意：壹般(ban)用(yong)1.5mlEP 管(guan)分(fen)裝(zhuang)成(cheng) 0.5-1ml每(mei)支，-20℃保存(cun)，每(mei)支使(shi)用 2-3 次即(ji)棄用(yong)。短期(qi)使(shi)用時，可(ke)保存(cun)於4℃，1 周有效。

2、根(gen)據(ju)目的蛋白分(fen)子量大小選擇(ze)合適的凝(ning)膠(jiao)濃度(du)，按(an)照附(fu)表配制分(fen)離膠(jiao)：

① 將(jiang)不同體積(ji)的蒸餾(liu)水、49.5%T 6%C、Gel buffer、Glycerol 加(jia)入到(dao)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)充(chong)分(fen)混合。

② 加入10%APS 和(he) TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以(yi)使(shi)溶液充(chong)分(fen)混勻。

③ 在凝(ning)膠(jiao)模具(ju)中迅(xun)速(su)灌(guan)入適(shi)量(liang)分(fen)離膠(jiao)溶液(ye)(1mm mini-gel，分(fen)離膠(jiao)溶液(ye)加約 4ml），然(ran)後(hou)在分(fen)離膠(jiao)溶液(ye)上輕輕覆(fu)蓋(gai)壹層 1～3cm 的水(shui)層，使凝(ning)膠(jiao)表面(mian)保持平整(zheng)。

④ 靜置，待(dai)分(fen)離膠(jiao)和水(shui)層之(zhi)間出(chu)現(xian)壹個清(qing)晰的界面(mian)表示(shi)凝膠(jiao)已聚合(he)。

3、根(gen)據(ju)目的蛋白分(fen)子量大小選擇(ze)合適的凝(ning)膠(jiao)濃度(du)，按(an)照附(fu)表配制夾(jia)層膠(jiao)：

① 去(qu)除覆(fu)蓋(gai)在分(fen)離膠(jiao)上的水(shui)層，用濾紙(zhi)將(jiang)殘(can)留的水(shui)盡(jin)量吸(xi)去(qu)。

② 將(jiang)不同體積(ji)的蒸餾(liu)水、49.5%T 3%C 和(he) Gel buffer 加入到(dao)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)混合。

③ 加入10%APS 和(he) TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以(yi)使(shi)溶液充(chong)分(fen)混勻。

④ 將(jiang)適(shi)量(liang)的夾(jia)層膠(jiao)溶液(ye)迅(xun)速(su)加至分(fen)離膠(jiao)的上面(mian)(對於 1mm 的 mini-gel，夾(jia)層膠(jiao)溶液(ye)加約1ml)，然(ran)後(hou)在夾(jia)層膠(jiao)溶液(ye)上輕輕覆(fu)蓋(gai)壹層 1～2cm 的水(shui)層，使凝(ning)膠(jiao)表面(mian)保持平整(zheng)。

⑤ 靜置，待(dai)夾(jia)層膠(jiao)和水(shui)層之(zhi)間出(chu)現(xian)壹個清(qing)晰的界面(mian)表示(shi)凝膠(jiao)已聚合(he)。

4、根(gen)據(ju)目的蛋白分(fen)子量大小選擇(ze)合適的凝(ning)膠(jiao)濃度(du)，按(an)照附(fu)表配制濃縮(suo)膠(jiao)：

① 去(qu)除覆(fu)蓋(gai)在夾(jia)層膠(jiao)上的水(shui)層，用濾紙(zhi)將(jiang)殘(can)留的水(shui)吸(xi)去(qu)。

② 將(jiang)不同體積(ji)的雙(shuang)蒸水(shui)、49.5%T 3%C 和(he) Gel buffer加入到(dao)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)混合。

③ 加入10%APS和(he) TEMED，立即渦旋混勻 5～10s，以(yi)使(shi)溶液充(chong)分(fen)混勻。

④ 將(jiang)梳(shu)子插(cha)入凝(ning)膠(jiao)內，避免產生氣泡(pao)。

⑤ 靜置，待(dai)凝膠(jiao)聚合(he)後(hou)，小心(xin)地(di)拔(ba)出梳子，避免破(po)壞(huai)加樣孔(kong)。進(jin)行電泳(yong)操(cao)作。

5、電泳(yong)

將(jiang)電泳(yong)槽(cao)置於4℃或冰(bing)水(shui)浴(yu)中(zhong)，外槽(cao)加入陽(yang)極緩(huan)沖液，內槽(cao)加入陰(yin)極緩(huan)沖液，30V  預(yu)電泳(yong)10 min，將(jiang)處(chu)理(li)好(hao)的樣品(pin)加(jia)入點(dian)樣孔(kong)， 30V 電泳(yong) 1h， 100V 電泳(yong)至溴(xiu)酚(fen)藍到(dao)達膠(jiao)底部(bu)後(hou)停止(zhi)電泳(yong)，進行後(hou)續的考(kao)馬(ma)斯(si)亮藍染(ran)色或電轉。 

附(fu)表  Tricine-SDS-PAGE  凝(ning)膠(jiao)配方(fang)表

註意(yi)事項：

1、過硫(liu)酸(suan)銨(an)配制成(cheng)10%APS 溶液(ye)後(hou)應當(dang)-20℃保存(cun)，用(yong)2~3  次，亦(yi)可4℃保存(cun)幾(ji)天。

2、TEMED  易揮發(fa)，使(shi)用後(hou)請蓋(gai)緊瓶(ping)蓋(gai)。另外凝膠(jiao)凝聚的速(su)度(du)和(he)溫度(du)及(ji)光照關系密(mi)切。可通(tong)過適(shi)當(dang)調節TEMED  的用(yong)量(liang)，控制在(zai)不同的室(shi)內環(huan)境下(xia)凝(ning)膠(jiao)凝聚的速(su)度(du)。

3、配制聚丙烯(xi)凝膠(jiao)的過(guo)程(cheng)中，如果室(shi)溫(wen)較(jiao)低(di)，可(ke)以置於37℃放置，加速凝(ning)固。在液體混勻的時候(hou)應盡量避免氣泡(pao)的產(chan)生(sheng)。

4、在分(fen)離膠(jiao)上層加蒸餾(liu)水時要(yao)緩(huan)慢(man)，速(su)度(du)不宜(yi)過(guo)快。

5、49.5%T 3%C 和49.5%T 6%C  為(wei)不同比例的Acr-Bis，有輕微(wei)神經毒性，請小心(xin)操(cao)作。 

有效期(qi)：24 個月有效。

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