這(zhe)種(zhong)細胞(bao)內的膜性(xing)管(guan)道(dao)系統壹方(fang)面(mian)構成(cheng)細(xi)胞(bao)內物(wu)質運(yun)輸(shu)的通(tong)路，另方(fang)面(mian)為 細胞內各種(zhong)各樣的酶反(fan)應提(ti)供(gong)廣闊(kuo)的反(fan)應面(mian)積。內質網的(de)功能與(yu)蛋(dan)白(bai)質的合成、糖(tang)類(lei)和脂(zhi)類 的(de)合成、解(jie)毒(du)、同化作(zuo)用有(you)關(guan)，並且還具(ju)有(you)運(yun)輸(shu)蛋(dan)白(bai)質的功能。
動(dong)物(wu)細胞(bao)組織(zhi)內質網提(ti)取(qu)試劑盒

諾博(bo)萊德 內質網提(ti)取(qu)試劑盒

NobleRyder P4935 內質網提(ti)取(qu)試劑盒

產品貨號(hao)：P4935

產品名稱(cheng)：內質網提(ti)取(qu)試劑盒

產品規格：50T/100T

產品簡介(jie)：

中文(wen)名稱(cheng)：內質網提(ti)取(qu)試劑盒

規格：50T ; 100T

儲存條件(jian)：2-8℃，1 year

具(ju)體產品的(de)參(can)數以(yi)收到(dao)產品說明(ming)書(shu)的參(can)數為準

適用樣本(ben)：動(dong)物(wu)細胞(bao)/組織(zhi)

產品介(jie)紹

內質網存(cun)在(zai)於(yu)除哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)成熟(shu)的紅(hong)細胞(bao)外的(de)各(ge)種真核細(xi)胞(bao)中(zhong)。內質網為由生物(wu)膜構(gou)成的互 相(xiang)通(tong)連(lian)的片層隙(xi)狀或小管(guan)狀系統，膜片間(jian)的隙(xi)狀空間(jian)稱(cheng)為池，通常(chang)與細胞(bao)外隙(xi)和細(xi)胞(bao)漿(jiang)基(ji)質 之間(jian)不(bu)直接(jie)相(xiang)通(tong)。這(zhe)種(zhong)細胞(bao)內的膜性(xing)管(guan)道(dao)系統壹方(fang)面(mian)構成(cheng)細(xi)胞(bao)內物(wu)質運(yun)輸(shu)的通(tong)路，另方(fang)面(mian)為 細胞內各種(zhong)各樣的酶反(fan)應提(ti)供(gong)廣闊(kuo)的反(fan)應面(mian)積。內質網的(de)功能與(yu)蛋(dan)白(bai)質的合成、糖(tang)類(lei)和脂(zhi)類的(de)合成、解(jie)毒(du)、同化作(zuo)用有(you)關(guan)，並且還具(ju)有(you)運(yun)輸(shu)蛋(dan)白(bai)質的功能。

內質網提(ti)取(qu)試劑盒可用於各種動(dong)物(wu)細胞(bao)和實(shi)體軟、硬(ying)組(zu)織(zhi)樣本(ben)的內質網的(de)提(ti)取(qu)。 本(ben)試劑盒適用於各種粗面(mian)內質網和光(guang)面(mian)內質網的(de)提(ti)取(qu)。

本(ben)試劑盒可以(yi)用於完整內質網提(ti)取(qu)相關(guan)的實(shi)驗(yan)，也可(ke)以(yi)用於下遊內質網蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)等實(shi)驗(yan)。

動(dong)物(wu)細胞(bao)組織(zhi)內質網提(ti)取(qu)試劑盒

註：

1. 提(ti)取(qu)液(ye)長期不(bu)用時置於-20℃保(bao)存 ，15 天(tian)內要多次使用的話(hua)置 4℃保(bao)存即(ji)可。

2. 試劑拆(chai)封後請(qing)盡快(kuai)使用完！

產品簡介(jie)：

內質網存(cun)在(zai)於(yu)除哺(bu)乳(ru)動(dong)物(wu)成熟(shu)的紅(hong)細胞(bao)外的(de)各(ge)種真核細(xi)胞(bao)中(zhong)。內質網為由生物(wu)膜構(gou)成的互 相(xiang)通(tong)連(lian)的片層隙(xi)狀或小管(guan)狀系統，膜片間(jian)的隙(xi)狀空間(jian)稱(cheng)為池，通常(chang)與細胞(bao)外隙(xi)和細(xi)胞(bao)漿(jiang)基(ji)質之間(jian)不(bu)直接(jie)相(xiang)通(tong)。這(zhe)種(zhong)細胞(bao)內的膜性(xing)管(guan)道(dao)系統壹方(fang)面(mian)構成(cheng)細(xi)胞(bao)內物(wu)質運(yun)輸(shu)的通(tong)路，另方(fang)面(mian)為細胞內各種(zhong)各樣的酶反(fan)應提(ti)供(gong)廣闊(kuo)的反(fan)應面(mian)積。內質網的(de)功能與(yu)蛋(dan)白(bai)質的合成、糖(tang)類(lei)和脂(zhi)類的(de)合成、解(jie)毒(du)、同化作(zuo)用有(you)關(guan)，並且還具(ju)有(you)運(yun)輸(shu)蛋(dan)白(bai)質的功能。

內質網提(ti)取(qu)試劑盒可用於各種動(dong)物(wu)細胞(bao)和組(zu)織(zhi)樣本(ben)的完(wan)整內質網提(ti)取(qu)，也可(ke)以(yi)用於下遊內質網蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)等實(shi)驗(yan)。

本(ben)試劑盒適用於各種粗面(mian)內質網和光(guang)面(mian)內質網的(de)提(ti)取(qu)。

本(ben)試劑盒可以(yi)用於完整內質網提(ti)取(qu)相關(guan)的實(shi)驗(yan)，也可(ke)以(yi)用於下遊內質網蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)等實(shi)驗(yan)。

本(ben)試劑盒需要使用高速(su)離(li)心(xin)，沒有(you)高速(su)離(li)心(xin)的條件(jian)時(shi)，可以選(xuan)擇低(di)速(su)離(li)心(xin)法內質網提(ti)取(qu)試劑盒。

自(zi)備試(shi)劑及(ji)設備

離(li)心(xin)機(ji)、振(zhen)蕩(dang)器、勻漿(jiang)機(ji)/Dounce 勻漿(jiang)器、渦(wo)旋(xuan)混(hun)勻器、移液(ye)器、冰(bing)箱(xiang)、冰(bing)盒、PBS 緩(huan)沖液(ye)、離(li)心(xin)管(guan)、吸(xi)頭、壹次性(xing)手套(tao) 、細胞篩(shai)

使用方(fang)法(fa)（僅供參(can)考）：

壹、使用註意(yi)事項(xiang)：

1. 旋(xuan)帽(mao)離(li)心(xin)管(guan)裝(zhuang)的(de)試劑在(zai)開(kai)蓋前請(qing)短(duan)暫(zan)離(li)心(xin)，將蓋內壁(bi)上(shang)的(de)液(ye)體甩至(zhi)管(guan)底，避免(mian)開(kai)蓋時液(ye)體灑落。

2. 實(shi)驗(yan)過程中(zhong)的所有(you)試劑須預(yu)冷；所有(you)器具(ju)須(xu)放(fang)-20℃冰(bing)箱(xiang)預冷。整個過程須(xu)保持樣品處(chu)於(yu)低(di)溫(wen)。

3. 最(zui)好(hao)使用 Dounce 勻漿(jiang)器勻漿(jiang)，如(ru)果(guo)沒有(you) Dounce 勻漿(jiang)器，用普通 1ml 玻璃(li)勻漿(jiang)器勻漿(jiang)也(ye)可(ke)，但(dan)是(shi)內質網回(hui)收率(lv)可能會(hui)下(xia)降。

4. 要求(qiu)離(li)心(xin)力 50000g 的離(li)心(xin)，沒有(you)條件(jian)的(de)話(hua)可以(yi)采用 30000g -50000g 離(li)心(xin)力，最(zui)好(hao)能達(da)到 45000g 左(zuo)右。最(zui)小離(li)心(xin)力需要保證(zheng) 30000g。

5. 如(ru)果(guo)需要回(hui)收所有(you)光(guang)面(mian)內質網小泡，最(zui)後壹個離(li)心(xin)步驟的離(li)心(xin)力需要提(ti)高到(dao) 100000g 力(li)。

6. 離(li)心(xin)機(ji)轉(zhuan)速有(you)相對離(li)心(xin)力（RCF，×g）和每(mei)分(fen)鐘轉(zhuan)速（RPM）兩種(zhong)表(biao)示方(fang)式(shi)，有(you)些離(li)心(xin)機(ji)設置(zhi)有(you) RPM 和×g 顯(xian)示切換(huan)，但部(bu)分(fen)離(li)心(xin)機(ji)沒(mei)有(you)自(zi)動(dong)切換(huan)功能。需(xu)要用下面(mian)的公式(shi)進行換(huan)算：g=r×1.118×10^-5×rpm²（r 為有(you)效(xiao)離(li)心(xin)半(ban)徑(jing)，即(ji)從(cong)離(li)心(xin)機(ji)軸心到(dao)離(li)心(xin)收集(ji)管(guan)底部(bu)中(zhong)心(xin)位置(zhi)的(de)長度，單位為厘米(mi))

例如(ru): 轉(zhuan)速為 3000rpm，有(you)效(xiao)離(li)心(xin)半(ban)徑(jing)為 10 cm，則(ze)相對離(li)心(xin)力（RCF，×g）為=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

二(er)、操(cao)作(zuo)步驟

細胞內質網蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)：

1. 取 1-2×107 個細胞(bao)，在(zai) 4℃，500×g 條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 5 分鐘，小心吸(xi)取培(pei)養基(ji)，盡可能吸(xi)幹，收集(ji)細胞；

2. 用冷 PBS 洗(xi)滌兩次(ci)，每(mei)次(ci)洗滌後盡(jin)可能吸(xi)幹上(shang)清。

【註】：

1. 在(zai) 500×g 條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 5 分鐘。

3. 加(jia)入(ru) 500 μl-1 ml 冷的(de)試劑 A，置冰(bing)上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿(jiang)器勻漿(jiang) 30-40 下(xia)。

5. 將勻漿(jiang)液(ye)在(zai) 4℃，1000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 5 分鐘。棄(qi)沈澱(dian)，收集(ji)上清。

6. 將上清在(zai) 4℃，11000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 10 分鐘，棄(qi)沈澱(dian)，收集(ji)上清。

7. 將上清在(zai) 4℃，50000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 45 分鐘。棄(qi)上清，收集(ji)沈澱(dian)。

【註】：

1. 如(ru)果(guo)條件(jian)允許，可(ke)將離(li)心(xin)力加(jia)大(da)到(dao) 100000×g，有(you)利於(yu)提(ti)高光(guang)面(mian)內質網小泡回(hui)收率(lv)。

2. 如(ru)果(guo)用大(da)的(de)離(li)心(xin)轉頭，液(ye)體量太少(shao)不(bu)好離(li)心(xin)的話(hua)，可以(yi)添加(jia) PBS 增加(jia)液(ye)體量。

3.沒有(you)高速(su)離(li)心(xin)的條件(jian)時(shi)，可以選(xuan)擇低(di)速(su)離(li)心(xin)法內質網提(ti)取(qu)試劑盒。

4.沈澱(dian)是(shi)離(li)心(xin)管(guan)底部(bu)薄薄壹層。不(bu)是(shi)明(ming)顯團塊(kuai)。

8. 在(zai)沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru) 400 μl 冷的(de)試劑 B，混(hun)勻。

9. 在(zai) 4℃，50000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 45 分鐘。

【註】：

1. 如(ru)果(guo)用大(da)的(de)離(li)心(xin)轉頭，液(ye)體量太少(shao)不(bu)好離(li)心(xin)的話(hua)，可以(yi)添加(jia) PBS 增加(jia)液(ye)體量。

2.沒有(you)高速(su)離(li)心(xin)的條件(jian)時(shi)，可以選(xuan)擇低(di)速(su)離(li)心(xin)法內質網提(ti)取(qu)試劑盒。

3. 如(ru)果(guo)期望(wang)回(hui)收所有(you)光(guang)面(mian)內質網小泡，離(li)心(xin)力需要提(ti)高到(dao) 100000×g 力(li)。

10. 棄(qi)上清，沈澱(dian)用內質網保(bao)存液(ye)重懸。

【註】：

1.也可不(bu)用試劑盒中的(de)內質網保(bao)存液(ye)重懸，根據下(xia)遊實(shi)驗(yan)需要選擇(ze)合適的(de)緩(huan)沖液(ye)重懸內質網或直接用於下遊實(shi)驗(yan)。

2. 需要提(ti)取(qu)內質網蛋(dan)白(bai)時(shi)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)在(zai)沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)適量(liang)蛋(dan)白(bai)裂(lie)解(jie)液(ye)進行裂(lie)解(jie)。

3. 沈澱(dian)是(shi)離(li)心(xin)管(guan)底部(bu)薄薄壹層。不(bu)是(shi)明(ming)顯團塊(kuai)。

11. 即得到內質網樣品，置(zhi)冰(bing)箱(xiang)備用或直接用於下遊實(shi)驗(yan)。

組織內質網提(ti)取(qu)：

1. 取 50 mg -100 mg 新鮮(xian)動(dong)物(wu)組織(zhi)樣本(ben)，用 PBS 洗滌幹凈(jing)。

2. 用剪dao盡(jin)可(ke)能剪碎(sui)，用冷 PBS 洗(xi)滌兩次(ci)。

【註】：

1. 在(zai) 500×g 條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 5 分鐘。

3. 加(jia)入(ru) 500 μl-1 ml 冷的(de)試劑 A，置冰(bing)上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿(jiang)器充(chong)分(fen)勻漿(jiang) 30-40 下(xia)，至(zhi)無明(ming)顯固體團塊(kuai)。然(ran)後在(zai) 4℃，1000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 5 分鐘。

5. 將上清吸(xi)入(ru)另壹預冷的(de)幹凈離(li)心(xin)管(guan)。

6. 在(zai) 4℃，11000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 10 分鐘，棄(qi)沈澱(dian)，收集(ji)上清。

7. 將上清在(zai) 4℃，50000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 45 分鐘。棄(qi)上清，收集(ji)沈澱(dian)。

【註】：

1. 如(ru)果(guo)條件(jian)允許，可(ke)將離(li)心(xin)力加(jia)大(da)到(dao) 100000×g，有(you)利於(yu)提(ti)高光(guang)面(mian)內質網小泡回(hui)收率(lv)。

2. 如(ru)果(guo)用大(da)的(de)離(li)心(xin)轉頭，液(ye)體量太少(shao)不(bu)好離(li)心(xin)的話(hua)，可以(yi)添加(jia) PBS 增加(jia)液(ye)體量。

3. 沒有(you)高速(su)離(li)心(xin)的條件(jian)時(shi)，可以選(xuan)擇低(di)速(su)離(li)心(xin)法內質網提(ti)取(qu)試劑盒。

4. 沈澱(dian)是(shi)離(li)心(xin)管(guan)底部(bu)薄薄壹層。不(bu)是(shi)明(ming)顯團塊(kuai)。

8. 在(zai)沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru) 400 μl 冷的(de)試劑 B，混(hun)勻。

9. 在(zai) 4℃，50000×g 力(li)條件(jian)下(xia)離(li)心(xin) 45 分鐘。

【註】：

1. 如(ru)果(guo)用大(da)的(de)離(li)心(xin)轉頭，液(ye)體量太少(shao)不(bu)好離(li)心(xin)的話(hua)，可以(yi)添加(jia) PBS 增加(jia)液(ye)體量。

2. 沒有(you)高速(su)離(li)心(xin)的條件(jian)時(shi)，可以選(xuan)擇低(di)速(su)離(li)心(xin)法內質網提(ti)取(qu)試劑盒。

3. 如(ru)果(guo)期望(wang)回(hui)收所有(you)光(guang)面(mian)內質網小泡，離(li)心(xin)力需要提(ti)高到(dao) 100000×g 力(li)。

10. 棄(qi)上清，沈澱(dian)用內質網保(bao)存液(ye)重懸。

【註】：

1. 也可不(bu)用試劑盒中的(de)內質網保(bao)存液(ye)重懸，根據下(xia)遊實(shi)驗(yan)需要選擇(ze)合適的(de)緩(huan)沖液(ye)重懸內質網或直接用於下遊實(shi)驗(yan)。

2. 需要提(ti)取(qu)內質網蛋(dan)白(bai)時(shi)可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)在(zai)沈(chen)澱(dian)中(zhong)加(jia)入(ru)適量(liang)蛋(dan)白(bai)裂(lie)解(jie)液(ye)進行裂(lie)解(jie)。

3.沈澱(dian)是(shi)離(li)心(xin)管(guan)底部(bu)薄薄壹層。不(bu)是(shi)明(ming)顯團塊(kuai)。

4. 即得到內質網樣品，置(zhi)冰(bing)箱(xiang)備用或直接用於下遊實(shi)驗(yan)。

註意(yi)事項(xiang)：

1. 正式(shi)實(shi)驗(yan)前請(qing)選(xuan)取幾個樣本(ben)做(zuo)預實(shi)驗(yan)，以優(you)化實(shi)驗(yan)條件(jian)，取(qu)得優(you)良實(shi)驗(yan)效(xiao)果。

2. 螺旋(xuan)蓋(gai)微(wei)量(liang)試(shi)劑管(guan)裝(zhuang)的(de)試劑在(zai)開(kai)蓋前請(qing)短(duan)暫(zan)離(li)心(xin)，將蓋和管(guan)內壁(bi)上(shang)的(de)液(ye)體離(li)心(xin)至(zhi)管(guan)底，避免(mian)開(kai)蓋時試(shi)劑損失。

3. 禁止與其他品(pin)牌(pai)的(de)試(shi)劑混(hun)用，否則(ze)會影響(xiang)使用效(xiao)果。

4. 樣品或試劑被(bei)細(xi)菌(jun)或真菌(jun)汙(wu)染(ran)或試劑交叉(cha)汙(wu)染可能會(hui)導(dao)致(zhi)錯誤的結(jie)果。

5. 最(zui)好(hao)使用壹次性(xing)吸(xi)頭、管(guan)、瓶或玻璃(li)器皿(min)，可(ke)重復(fu)使用的玻璃(li)器皿(min)必須(xu)在(zai)使用前清(qing)洗(xi)並che底清除(chu)殘(can)留清(qing)潔(jie)劑。

6. 實(shi)驗(yan)後完(wan)成後所有(you)樣品及(ji)接(jie)觸(chu)過的(de)器皿(min)應按(an)照規(gui)定(ding)程序(xu)處理(li)。

動(dong)物(wu)細胞(bao)組織(zhi)內質網提(ti)取(qu)試劑盒

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