細(xi)胞(bao)膜/胞(bao)漿/核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)適(shi)用(yong)於從各種(zhong)原代或(huo)傳(chuan)代細(xi)胞(bao)和(he)各種(zhong)實體(ti)組(zu)織(zhi)，如(ru)腦(nao)、脊(ji)髓(sui)、神(shen)經(jing)結或纖維(wei)、脂(zhi)肪(fang)、肝臟(zang)、消化道、腎臟(zang)、心(xin)臟(zang)、肌肉、血(xue)管(guan)、結締組織等動物組(zu)織(zhi)中分步提取細(xi)胞(bao)膜蛋(dan)白/胞(bao)漿蛋白/細(xi)胞(bao)核(he)膜蛋(dan)白/核(he)內蛋(dan)白(bai)。提(ti)取過程簡(jian)單方(fang)便，可在(zai)1小(xiao)時(shi)內完成。
細(xi)胞(bao)膜胞(bao)漿核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)

諾(nuo)博萊(lai)德 細(xi)胞(bao)膜/胞(bao)漿/核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)

NobleRyder P4939 細(xi)胞(bao)膜/胞(bao)漿/核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)

產品貨號：P4939

產品名(ming)稱(cheng)：細(xi)胞(bao)膜/胞(bao)漿/核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)

產品規格(ge)：50T/100T

細(xi)胞(bao)膜胞(bao)漿核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)

產品簡(jian)介：

中文名(ming)稱(cheng)：細(xi)胞(bao)膜/胞(bao)漿/核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)

規格：50T ; 100T

儲存條件(jian)：2-8℃，1 year

具(ju)體(ti)產(chan)品的參(can)數以收到(dao)產(chan)品說明書的(de)參(can)數為(wei)準

細(xi)胞(bao)膜蛋(dan)白/胞(bao)漿蛋白/核(he)膜蛋(dan)白提(ti)取試劑(ji)盒(he)適(shi)用(yong)於從各種(zhong)原代或(huo)傳(chuan)代細(xi)胞(bao)和(he)各種(zhong)實體(ti)組(zu)織(zhi)，如(ru)腦(nao)、脊(ji)髓(sui)、神(shen)經(jing)結或纖維(wei)、脂(zhi)肪(fang)、肝臟(zang)、消化道、腎臟(zang)、心(xin)臟(zang)、肌肉、血(xue)管(guan)、結締組織等動物組(zu)織(zhi)中分步提取細(xi)胞(bao)膜蛋(dan)白/胞(bao)漿蛋白/細(xi)胞(bao)核(he)膜蛋(dan)白/核(he)內蛋(dan)白(bai)。提(ti)取過程簡(jian)單方(fang)便，可在(zai)1小(xiao)時(shi)內完成。本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)含(han)有的du特(te)配(pei)方(fang)能(neng)夠(gou)有效(xiao)溶解(jie)細(xi)胞(bao)膜組(zu)份，包(bao)括細(xi)胞(bao)質(zhi)膜、核(he)膜和(he)各種(zhong)細(xi)胞(bao)器膜。本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)含(han)有的蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑(ji)混(hun)合物(wu)，阻止了蛋白酶對蛋白的(de)降(jiang)解(jie)，為(wei)提取高純度的蛋白(bai)提供(gong)了保證(zheng)。本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取的蛋白可用(yong)於WesternBlotting、蛋白質(zhi)電泳(yong)、免疫(yi)沈澱、ELISA、轉(zhuan)錄(lu)活性(xing)分析(xi)、Gelshift凝膠(jiao)阻滯實驗、酶活性(xing)測定(ding)等下(xia)遊蛋(dan)白(bai)研究(jiu)實驗。本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取的蛋白為(wei)具(ju)有天(tian)然(ran)蛋白構(gou)象(xiang)的活性(xing)蛋白(bai)。本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)中(zhong)不含(han)有EDTA，與(yu)金屬(shu)螯和(he)層(ceng)析(xi)等(deng)下(xia)遊應(ying)用(yong)兼容。

適(shi)用(yong)樣本(ben)：動物細(xi)胞(bao)

註：

1. 蛋白酶抑(yi)制劑(ji)未(wei)開蓋(gai)使用(yong)前也(ye)可以2-8℃儲存。開(kai)蓋(gai)使用(yong)後-20℃儲存。

2. 蛋白酶抑(yi)制劑(ji)在(zai)2-8℃低(di)溫時(shi)是固(gu)體(ti)狀(zhuang)態(tai)，從冰箱取出(chu)後恢(hui)復至室溫或37℃短時(shi)間水浴(yu)，變成液體(ti)狀(zhuang)態(tai)後離心(xin)至管(guan)底部再(zai)開(kai)蓋(gai)。

3. 試劑(ji)拆封後請(qing)盡快(kuai)使用(yong)完！

產品簡(jian)介：

細(xi)胞(bao)膜/胞(bao)漿/核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)適(shi)用(yong)於從各種(zhong)原代或(huo)傳(chuan)代細(xi)胞(bao)和(he)各種(zhong)實體(ti)組(zu)織(zhi)，如(ru)腦(nao)、脊(ji)髓(sui)、神(shen)經(jing)結或纖維(wei)、脂(zhi)肪(fang)、肝臟(zang)、消化道、腎臟(zang)、心(xin)臟(zang)、肌肉、血(xue)管(guan)、結締組織等動物組(zu)織(zhi)中分步提取細(xi)胞(bao)膜蛋(dan)白/胞(bao)漿蛋白/細(xi)胞(bao)核(he)膜蛋(dan)白/核(he)內蛋(dan)白(bai)。提(ti)取過程簡(jian)單方(fang)便，可在(zai)1小(xiao)時(shi)內完成。

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)含(han)有的du特(te)配(pei)方(fang)能(neng)夠(gou)有效(xiao)溶解(jie)細(xi)胞(bao)膜組(zu)份，包(bao)括細(xi)胞(bao)質(zhi)膜、核(he)膜和(he)各種(zhong)細(xi)胞(bao)器膜。本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)含(han)有的蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑(ji)混(hun)合物(wu)，阻止了蛋白酶對蛋白的(de)降(jiang)解(jie)，為(wei)提取高純度的蛋白(bai)提供(gong)了保證(zheng)。

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取的蛋白可用(yong)於 Western Blotting、蛋白質(zhi)電泳(yong)、免疫(yi)沈澱、ELISA、轉(zhuan)錄(lu)活性(xing)分析(xi)、Gel shift凝膠(jiao)阻滯實驗、酶活性(xing)測定(ding)等下(xia)遊蛋(dan)白(bai)研究(jiu)實驗。

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取的蛋白為(wei)具(ju)有天(tian)然(ran)蛋白構(gou)象(xiang)的活性(xing)蛋白(bai)。

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)中(zhong)不含(han)有EDTA，與(yu)金屬(shu)螯和(he)層(ceng)析(xi)等(deng)下(xia)遊應(ying)用(yong)兼容。

自備試(shi)劑(ji)和(he)儀器：

離心(xin)機(ji)、振蕩器、勻漿機/勻漿器、渦旋混勻器、移(yi)液器、冰箱、冰盒(he)，PBS緩(huan)沖液、蛋白定(ding)量試(shi)劑(ji)盒(he)，離心(xin)管(guan)、吸(xi)頭、壹(yi)次性(xing)手(shou)套

產品特(te)點：

1、使用(yong)方便，從(cong)細(xi)胞(bao)，組(zu)織中(zhong)提取蛋白不需(xu)經(jing)過(guo)研磨、反復(fu)凍融(rong)、超(chao)聲破碎等(deng)前(qian)處(chu)理(li)。

2、將蛋白(bai)提(ti)取的時(shi)間縮短至 1 小時(shi)。

3、含(han)蛋(dan)白(bai)穩定(ding)劑(ji)，提(ti)取的蛋白穩定(ding)。

4、紫外檢(jian)測(ce)蛋白濃(nong)度(du)時(shi)，背(bei)景幹(gan)擾低(di)。

5、蛋白酶抑(yi)制劑(ji)抑(yi)制了(le)蛋(dan)白的(de)降解，蛋白酶抑(yi)制劑(ji)配(pei)方(fang)優(you)化。蛋白酶抑(yi)制劑(ji)混(hun)合物(wu)包含(han) 6 種(zhong)獨立的蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑(ji)，每(mei)壹(yi)種(zhong)抑(yi)制劑(ji)可特(te)異性(xing)抑(yi)制某壹(yi)種(zhong)或幾(ji)種(zhong)蛋白(bai)酶活性(xing)。該混(hun)合物(wu)優化的組成使其可以抑(yi)制幾(ji)乎(hu)所(suo)有重要(yao)的(de)蛋(dan)白(bai)酶活性(xing)，包括(kuo)si氨酸(suan)蛋(dan)白(bai)酶、半guang氨酸(suan)蛋(dan)白(bai)酶、天(tian)冬氨酸(suan)蛋(dan)白(bai)酶、丙(bing)氨酰-氨基肽酶等。

使用(yong)方法：

壹(yi)、使用(yong)註意(yi)事(shi)項：

1. 正式(shi)實驗前請(qing)選(xuan)取幾(ji)個(ge)樣本(ben)做(zuo)預實驗，以優化實驗條件(jian)，取得優良實驗效(xiao)果

2. 螺旋蓋(gai)微量(liang)試劑(ji)管(guan)裝的試(shi)劑(ji)在(zai)開(kai)蓋(gai)前請(qing)短暫(zan)離心(xin)，將(jiang)蓋(gai)和管(guan)內壁上的液體(ti)離心(xin)至管(guan)底，避免(mian)開蓋(gai)時(shi)試劑(ji)損(sun)失。

3. 實驗過程(cheng)中(zhong)的所有試劑(ji)須(xu)預冷；所(suo)有器具(ju)須(xu)放(fang)-20℃冰(bing)箱預冷。整(zheng)個過程(cheng)須(xu)保持(chi)樣品處(chu)於低(di)溫。

4. 蛋白酶抑(yi)制劑(ji)儲存期(qi)間(jian)溶液如(ru)果出(chu)現沈澱，不影響(xiang)使用(yong)，溶解(jie)後正(zheng)常使用(yong)。

5. 如(ru)果試劑(ji)盒(he)不能(neng)短時(shi)間內用(yong)完，蛋白酶抑(yi)制劑(ji)混(hun)合物(wu)不可以壹(yi)次全部加(jia)入(ru)提取液。

6. 可以根據(ju)自(zi)己(ji)實驗需(xu)要(yao)加(jia)入(ru)其它(ta)蛋(dan)白酶抑(yi)制劑(ji)單品。

7. 下遊實驗如(ru)果是進(jin)行特(te)定蛋白(bai)酶或磷(lin)酸(suan)酶的酶活性(xing)檢測(ce)，提取液可以不加(jia)蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制劑(ji)或(huo)磷(lin)酸(suan)酶抑(yi)制劑(ji)，註(zhu)意提(ti)取過程保持(chi)低(di)溫操(cao)作，縮(suo)短離心(xin)時(shi)間。

8. 禁止與(yu)其他(ta)品牌(pai)的試(shi)劑(ji)混(hun)用(yong)，否則(ze)會(hui)影響(xiang)使用(yong)效(xiao)果。

9. 樣品或試(shi)劑(ji)被(bei)細(xi)菌或真菌汙(wu)染(ran)或試(shi)劑(ji)交叉(cha)汙(wu)染(ran)可能(neng)會(hui)導致錯誤的(de)結果。

二、操作步驟(zhou)

1. 提取液準備：

每(mei) 400ul 冷的(de)蛋白提(ti)取液 A/B/D 中都分(fen)別加(jia)入(ru) 2ul 蛋白酶抑(yi)制劑(ji)混(hun)合物(wu)和 2ul 磷(lin)酸(suan)酶抑(yi)制劑(ji)混(hun)合物(wu)，混勻(yun)後置(zhi)冰上備用(yong)。

2．取 5-10×10⁶個細(xi)胞(bao)，在(zai) 4℃，800×g 條件(jian)下離心(xin) 5-10 分(fen)鐘(zhong)，小(xiao)心(xin)吸(xi)取培養基(ji)，盡可能(neng)吸(xi)幹(gan)。

3. 用(yong)冷 PBS 洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)兩(liang)次，每(mei)次洗(xi)滌(di)後盡可能(neng)吸(xi)幹(gan)上清。

4. 每(mei) 5×10⁶個(ge)細(xi)胞(bao)中(zhong)加(jia)入(ru) 400ul 冷的(de)蛋白提(ti)取液 A，混勻後(hou)，在(zai) 4℃條件(jian)下用(yong)試劑(ji)盒(he)所(suo)配(pei)針(zhen)筒(tong)反復(fu)吸(xi)吹(chui)細(xi)胞(bao)，使細(xi)胞(bao)wan全破裂(lie)。

5. 在(zai) 4℃，1000×g 條件(jian)下離心(xin) 5 分(fen)鐘(zhong)。

6. 將上清(I)吸(xi)入(ru)另壹(yi)幹(gan)凈離心(xin)管(guan)，在(zai)沈澱中(zhong)加(jia)入(ru) 100-200μl 冷的(de)提取液 B，高速渦旋振蕩 15 秒，充分(fen)混(hun)勻(yun)。

7. 將混勻(yun)的(de)提取液 B 置(zhi) 4℃低(di)速振蕩 30-60 分鐘。

8. 將提取液 B 在(zai) 37℃條件(jian)下水浴(yu) 10 分鐘。

9. 將提取液 B 在(zai) 37℃下(xia) 1000-2000×g 離心(xin) 5 分(fen)鐘(zhong)，此時(shi)溶液分為(wei)兩層(ceng)（對著光(guang)線(xian)看），上層(ceng)為(wei)核(he)內蛋(dan)白(bai)，下(xia)層(ceng)是核(he)膜蛋(dan)白約為(wei) 20-40μl。小心(xin)移(yi)除上層(ceng)，用(yong) 1-2 倍體(ti)積(ji)的(de)冰冷的(de)提取液 D 溶解下(xia)層(ceng)即為(wei)細(xi)胞(bao)核(he)膜蛋(dan)白。

10. 在(zai)步驟(zhou) 6 中所(suo)得到的上清(I)中加(jia)入(ru) 5μl 提取液 C，充分混(hun)勻。

11. 在(zai) 2-8℃振蕩 20-30 分鐘。

12. 在(zai) 37℃水浴(yu) 10 分鐘。

13. 在(zai) 37℃下(xia)，1000×g 離心(xin) 3 分(fen)鐘(zhong)，此時(shi)溶液分為(wei)兩層(ceng)，上層(ceng)是胞漿蛋白部分(fen)，下(xia)層(ceng)部分(fen)（II）是細(xi)胞(bao)膜蛋(dan)白約為(wei) 40-50μl。

14. 將上層(ceng)小心(xin)吸(xi)入(ru)另壹(yi)預(yu)冷的(de)幹凈離心(xin)管(guan)，即可得到胞漿蛋白。

15. 用(yong) 50-150μl 冰冷的(de)提取液 D 溶解步驟(zhou) 13 中的(de)下層(ceng)部分(fen)（II），即(ji)得細(xi)胞(bao)膜蛋(dan)白。

16. 將上述蛋白提(ti)取物定量後(hou)分(fen)裝(zhuang)於-80℃冰箱保存備(bei)用(yong)或直接用(yong)於下遊實驗。

常見(jian)問題(ti)分(fen)析(xi)：

1. 蛋白濃(nong)度(du)低(di)？

處(chu)理(li)部分(fen)樣本(ben)時(shi)可能(neng)沒有裂(lie)解(jie)wan全，導致核(he)蛋白(bai)/膜蛋(dan)白濃(nong)度(du)低(di)。只要(yao)適(shi)當(dang)延長試(shi)劑(ji) BC 的(de)處(chu)理(li)

時(shi)間即可。最(zui)好在(zai)持(chi)續(xu)振蕩的條件(jian)下處(chu)理(li)，沒有振蕩器也可間(jian)隔(ge)幾(ji)分(fen)鐘(zhong)用(yong)吸(xi)頭吹(chui)打混(hun)勻(yun)。

膜蛋(dan)白豐(feng)度較低(di)，在(zai)條件(jian)允許的情(qing)況(kuang)下，需(xu)要(yao)盡可能(neng)加(jia)大(da)細(xi)胞(bao)的(de)上樣量(liang)。

2. 用(yong)什麽(me)方法定量蛋白(bai)？

建議用(yong) BCA 法。不適(shi)合(he)用(yong) Bradford 法，因為(wei)試劑(ji) A 中(zhong)含(han)有幹擾(rao) Bradford 法的組份，導致定量不準(zhun)。如(ru)果已(yi)經進(jin)行過透析(xi)處(chu)理(li)或者(zhe)用(yong)脫(tuo)鹽(yan)柱(zhu)改換過緩(huan)沖體(ti)系(xi)，則(ze)可以用(yong) Bradford 法定量。

3. 提取的蛋白具(ju)有活性(xing)嗎(ma)？

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)不含(han)有離子(zi)型(xing)去(qu)垢劑(ji)組(zu)份，不破(po)壞(huai)蛋(dan)白(bai)的結構(gou)，沒(mei)有對蛋(dan)白(bai)質(zhi)之間(jian)原(yuan)有的相互(hu)作用(yong)的破(po)壞，蛋(dan)白均保持(chi)其天(tian)然(ran)構(gou)象(xiang)和活性(xing)。

註意事(shi)項：

1. 本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)僅(jin)供科(ke)學(xue)研究(jiu)使用(yong)，不可用(yong)於診斷或治(zhi)療(liao)。

2. 最好使用(yong)壹(yi)次性(xing)吸(xi)頭、管(guan)、瓶(ping)或(huo)玻璃(li)器皿，可重(zhong)復使用(yong)的玻璃(li)器皿必(bi)須(xu)在(zai)使用(yong)前清(qing)洗(xi)並(bing)che底清除(chu)殘留清潔劑(ji)。

3. 實驗後完成後所有樣品及接(jie)觸(chu)過的器皿應(ying)按(an)照規(gui)定程(cheng)序處(chu)理(li)。

4. 避免皮(pi)膚(fu)或(huo)粘(zhan)膜與(yu)試(shi)劑(ji)接(jie)觸(chu)。

5. 如(ru)果試劑(ji)不小(xiao)心(xin)接(jie)觸(chu)皮(pi)膚(fu)或(huo)眼睛，應(ying)立即(ji)用(yong)水沖洗(xi)

細(xi)胞(bao)膜胞(bao)漿核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)

產品訂購(gou)信息(xi)：

P4939  細(xi)胞(bao)膜/胞(bao)漿/核(he)膜蛋(dan)白分(fen)步提取試劑(ji)盒(he)  50T/100T