革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)總蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)可以(yi)從各(ge)種(zhong)革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)菌(jun)體(ti)中(zhong)提取總蛋(dan)白，試劑(ji)盒(he)適用(yong)各(ge)種(zhong)革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)以(yi)及(ji)各(ge)種(zhong)厚壁(bi)菌(jun)體(ti)的(de)蛋(dan)白提取，也可用(yong)於(yu)純化(hua)蛋(dan)白的(de)粗(cu)品(pin)制(zhi)備及(ji)總蛋(dan)白制(zhi)備。提取過(guo)程簡(jian)單(dan)方(fang)便。本(ben)試劑(ji)盒(he)含有(you)蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)混(hun)合(he)物(wu)和磷(lin)酸酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)混(hun)合(he)物(wu)，阻止了蛋白酶對(dui)蛋白的(de)降(jiang)解，為提取高(gao)質(zhi)量(liang)的(de)蛋(dan)白提供了保證。
革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)-常備(bei)現貨(huo)

諾(nuo)博(bo)萊德 革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)

NobleRyder P5002 革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)（pull-down、co-IP等）

產品(pin)貨(huo)號(hao)：P5002

產品(pin)名稱：革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)（pull-down、co-IP等）

產品(pin)規(gui)格：50T/100T

革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)-常備(bei)現貨(huo)

產品(pin)簡(jian)介(jie)：

中(zhong)文名稱：革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)（pull-down、co-IP等）

規(gui)格：100T ; 50T

儲存條(tiao)件(jian)：2-8℃，1 year

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參數(shu)以收(shou)到(dao)產品(pin)說明(ming)書的(de)參數(shu)為準

NobleRyder P5002 革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)（pull-down、co-IP等）

適用樣(yang)本(ben)：革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)

註：

1. 蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)未(wei)開蓋(gai)使(shi)用前也可以(yi)2-8℃儲存。開(kai)蓋(gai)使(shi)用後-20℃儲(chu)存。

2. 蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)在2-8℃低溫(wen)時是固體(ti)狀(zhuang)態(tai)，從(cong)冰箱(xiang)取出(chu)後恢(hui)復至(zhi)室(shi)溫(wen)或37℃短(duan)時間水浴，變成液體(ti)狀(zhuang)態(tai)後離心至管底(di)部(bu)再開(kai)蓋(gai)。

3. 試劑(ji)拆封後請盡(jin)快使(shi)用(yong)完！

產品(pin)簡(jian)介(jie)：

革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)總蛋(dan)白提取試劑(ji)盒(he)可以(yi)從各(ge)種(zhong)革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)菌(jun)體(ti)中(zhong)提取總蛋(dan)白，試劑(ji)盒(he)適用(yong)各(ge)種(zhong)革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)以(yi)及(ji)各(ge)種(zhong)厚壁(bi)菌(jun)體(ti)的(de)蛋(dan)白提取，也可用(yong)於(yu)純化(hua)蛋(dan)白的(de)粗(cu)品(pin)制(zhi)備及(ji)總蛋(dan)白制(zhi)備。提取過(guo)程簡(jian)單(dan)方(fang)便。

本(ben)試劑(ji)盒(he)含有(you)蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)混(hun)合(he)物(wu)和磷(lin)酸酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)混(hun)合(he)物(wu)，阻止了蛋白酶對(dui)蛋白的(de)降(jiang)解，為提取高(gao)質(zhi)量(liang)的(de)蛋(dan)白提供了保證。

本(ben)試劑(ji)盒(he)提取的(de)蛋(dan)白可用(yong)於(yu) Western Blotting、蛋(dan)白質(zhi)電泳、免(mian)疫沈澱、ELISA、轉(zhuan)錄活(huo)性分(fen)析、Gel shift 凝(ning)膠(jiao)阻(zu)滯實(shi)驗、酶活(huo)性測(ce)定等下遊(you)蛋(dan)白研(yan)究實(shi)驗。

本(ben)試劑(ji)盒(he)提取的(de)蛋(dan)白為具(ju)有(you)天(tian)然蛋白構(gou)象的(de)活(huo)性蛋(dan)白，可以(yi)用於(yu)不(bu)同的(de)下遊(you)應(ying)用。根(gen)據(ju)不同的(de)菌(jun)液樣(yang)本(ben)以及(ji)不同(tong)的(de)培(pei)養(yang)狀(zhuang)況，每(mei)毫升(sheng)菌(jun)液大(da)概(gai)可(ke)以提得 2-10mg 蛋白。采(cai)用(yong) BCA或 Lowry 法(fa)進行(xing)蛋白定量(liang)。

本(ben)試劑(ji)盒(he)中(zhong)不含(han)有 EDTA，與金(jin)屬螯和層析等下遊(you)應(ying)用兼(jian)容(rong)。

本(ben)試劑(ji)盒(he)提取的(de)蛋(dan)白樣(yang)本(ben)含有(you)高(gao)濃度(du)的(de)鹽(yan)成(cheng)分(fen)，不可(ke)直(zhi)接(jie)用於(yu) 2D 電(dian)泳，需要除鹽(yan)後再用(yong)於(yu) 2D 電(dian)泳。

自(zi)備(bei)試劑(ji)和儀器：

離心機、振蕩(dang)器、勻(yun)漿(jiang)機/勻(yun)漿(jiang)器、渦(wo)旋混(hun)勻(yun)器、移液器、冰箱(xiang)、冰盒(he)，PBS 緩沖(chong)液、蛋(dan)白定量(liang)試劑(ji)盒(he)，離心管、吸頭(tou)、壹次(ci)性手(shou)套(tao)

產品(pin)特(te)點(dian)：

1、使用方(fang)便，不(bu)需(xu)昂(ang)貴設(she)備。

2、可以處理各(ge)種(zhong)細菌(jun)菌(jun)體(ti)，包(bao)括(kuo)新(xin)鮮菌(jun)液和冰凍菌(jun)體(ti)。

3、將(jiang)蛋白提取的(de)時(shi)間(jian)縮短(duan)至 30 分(fen)鐘(zhong)-1 小(xiao)時(shi)。

4、采(cai)用(yong)溫(wen)和的(de)中(zhong)性裂(lie)解組分(fen)，保持(chi)蛋白活(huo)性。

5、含蛋白穩定(ding)劑(ji)，提取的(de)蛋(dan)白穩定(ding)。

6、紫(zi)外檢(jian)測(ce)蛋白濃度(du)時，背景幹擾(rao)低。

7、蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)抑(yi)制(zhi)了蛋白的(de)降(jiang)解，蛋(dan)白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)配(pei)方(fang)優(you)化(hua)。蛋(dan)白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)混(hun)合(he)物(wu)包(bao)含(han) 6種(zhong)獨(du)立的(de)蛋(dan)白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji) AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每(mei)壹種(zhong)抑(yi)制(zhi)劑(ji)可(ke)特(te)異(yi)性抑(yi)制(zhi)某壹種(zhong)或幾種(zhong)蛋白酶活(huo)性。該(gai)混(hun)合物優(you)化(hua)的(de)組成使其(qi)可(ke)以(yi)抑制(zhi)幾乎所(suo)有(you)重(zhong)要的(de)蛋(dan)白酶活(huo)性，包(bao)括(kuo)si氨(an)酸蛋白酶、半guang氨(an)酸蛋白酶、天(tian)冬氨(an)酸蛋白酶、丙氨(an)酰(xian)-氨(an)基肽酶等。

8、本(ben)試劑(ji)盒(he)中(zhong)不有(you) EDTA，與金(jin)屬螯和層析等兼(jian)容(rong)。

使用方(fang)法(fa)：

壹、使(shi)用(yong)註意(yi)事項：

1、旋帽離心管裝的(de)試劑(ji)在開蓋(gai)前請短(duan)暫離心，將(jiang)蓋(gai)內(nei)壁(bi)上的(de)液體(ti)甩(shuai)至管底(di)，避免開(kai)蓋(gai)時(shi)液體(ti)灑落(luo)。

2、實驗過(guo)程中(zhong)的(de)所(suo)有(you)試劑(ji)須(xu)預冷(leng)；所有(you)器具(ju)須(xu)放-20℃冰箱(xiang)預冷(leng)。整個(ge)過(guo)程須(xu)保持(chi)樣(yang)品(pin)處(chu)於(yu)低(di)溫(wen)。

3、蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)儲(chu)存期間溶(rong)液如(ru)果(guo)出(chu)現(xian)沈澱，不影(ying)響(xiang)使(shi)用，溶(rong)解後正(zheng)常(chang)使用(yong)。

4、可以根(gen)據(ju)自(zi)己(ji)實(shi)驗需(xu)要(yao)加(jia)入其(qi)它蛋(dan)白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)單(dan)品(pin)。

5、本(ben)試劑(ji)盒(he)中(zhong)提取液和蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)中(zhong)均不(bu)含 EDTA，根(gen)據(ju)需要可(ke)自(zi)行(xing)加(jia)入。

二(er)、革(ge)蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白提取：

1. 提取液的(de)準備(bei)：

根(gen)據(ju)所需要(yao)提取的(de)樣(yang)本(ben)量(liang)，每(mei) 500 μl 提取液 A 中(zhong)加(jia)入 2 μl 蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)和 5 μl 蛋白穩定(ding)液，充(chong)分(fen)混勻(yun)後置冰上(shang)備(bei)用(yong)。

【註】：

1) 根(gen)據(ju)需要處(chu)理(li)的(de)樣(yang)品(pin)數(shu)量(liang)準備(bei)蛋(dan)白提取液，蛋(dan)白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)混(hun)合(he)物(wu)不可以壹次(ci)全(quan)部(bu)加(jia)入提取液。

2) 加(jia)過(guo)蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)的(de)提取液壹周(zhou)內(nei)未(wei)使用(yong)完，再次(ci)使(shi)用前需要(yao)再次(ci)加(jia)入蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)。

3) 以下步(bu)驟(zhou)中(zhong)使用(yong)的(de)蛋(dan)白提取液為此(ci)步(bu)配(pei)制(zhi)好的(de)含(han)蛋(dan)白酶抑(yi)制(zhi)劑(ji)的(de)提取液。

2. 在 4℃，10000×g 條(tiao)件(jian)下將(jiang)菌(jun)液離心 5 分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清(qing)，盡(jin)量(liang)吸幹剩余(yu)液體(ti)，收(shou)集(ji)菌(jun)體(ti)。

3. 用 PBS 洗(xi)菌(jun)體(ti) 2 次(ci)。若為冷(leng)凍(dong)菌(jun)體(ti)直(zhi)接(jie)進行(xing)下面(mian)操(cao)作步(bu)驟(zhou)即(ji)可。

4. 按每(mei) 100 mg 濕重(zhong)菌(jun)體(ti)樣(yang)本(ben)加(jia)入 500 μl 蛋白提取液，吹打混(hun)勻(yun)，冰上(shang)放置 20-30 分(fen)鐘(zhong)。

【註】：

1) 細胞數(shu)量(liang)根(gen)據(ju)實驗情(qing)況(kuang)調(tiao)整，每(mei)次(ci)的(de)裂(lie)解液用(yong)量(liang)並不(bu)是壹定(ding)的(de)，請根(gen)據(ju)實際情(qing)況(kuang)調(tiao)整。

2) 加(jia)入菌(jun)體(ti)體(ti)積的(de) 3-5 倍(bei)體積的(de)提取液，充(chong)分(fen)淹(yan)沒菌(jun)體(ti)即(ji)可(ke)。

5. 在 150-300 w，10 s 超聲(sheng)/10 s 間隔(ge)條(tiao)件(jian)下冰(bing)浴超(chao)聲(sheng)至菌(jun)液變清(qing)。

【註】：

1) 若無(wu)超(chao)聲(sheng)條(tiao)件(jian)，可不超聲(sheng)，將(jiang)提取液 A 置研(yan)缽(bo)研(yan)磨。若無(wu)研(yan)磨條(tiao)件(jian)可以不研(yan)磨。

2) 若無(wu)超(chao)聲(sheng)，將(jiang)提取液在室(shi)溫(wen)或 37℃持(chi)續(xu)振蕩(dang) 1-2 小(xiao)時(shi)。

3) 使用振蕩器/搖(yao)床(chuang)的(de)較(jiao)低(di)轉(zhuan)速，提取液能(neng)輕(qing)微(wei)晃(huang)動(dong)即(ji)可。

4) 如(ru)果(guo)沒有振蕩(dang)條(tiao)件(jian)，可以在室(shi)溫(wen)或 37℃靜(jing)置，稍微(wei)延長(chang)提取液處(chu)理(li)時(shi)間，中(zhong)間每(mei)隔(ge) 10分(fen)鐘(zhong)渦(wo)旋振(zhen)蕩(dang)混勻(yun)。

5) 超聲(sheng)時間(jian)盡(jin)量(liang)短(duan)，提取液變清(qing)即可，壹般(ban)不(bu)超(chao)過(guo) 20 分(fen)鐘(zhong)。

6) 如(ru)果(guo)超聲(sheng)時出(chu)現(xian)黑色沈澱(dian)，說明(ming)超(chao)聲(sheng)功(gong)率(lv)過(guo)大，需(xu)要降(jiang)低(di)功(gong)率(lv)。

7) 避免產(chan)生泡沫。

6. 在 4℃，12000×g 條(tiao)件(jian)下將(jiang)提取液離心 5 分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)沈澱，收(shou)集(ji)上(shang)清(qing)。

7. 將(jiang)上清(qing)移入另(ling)壹幹(gan)凈(jing)離心管，即得(de)革蘭(lan)氏(shi)陽性菌(jun)蛋(dan)白樣(yang)品(pin)。

8. 將(jiang)總蛋(dan)白樣(yang)品(pin)定(ding)量(liang)後分(fen)裝置於(yu)-80℃冰(bing)箱備用或直(zhi)接(jie)用於(yu)下遊(you)實(shi)驗。

【註】：

1) 建議用 BCA 法(fa)進行(xing)蛋白定量(liang)。

2) 蛋白樣(yang)品(pin)-80℃存放壹年沒有問題(ti)。註意(yi)不(bu)要被蛋(dan)白酶水解掉，不要(yao)被細菌(jun)汙染(ran)。

註意(yi)事項：

1. 正式(shi)實(shi)驗前請選取幾(ji)個(ge)樣(yang)本(ben)做預實(shi)驗，以(yi)優(you)化(hua)實(shi)驗條(tiao)件(jian)，取得(de)優(you)良(liang)實(shi)驗效(xiao)果(guo)。

2. 螺旋蓋(gai)微(wei)量(liang)試劑(ji)管(guan)裝(zhuang)的(de)試劑(ji)在開蓋(gai)前請短(duan)暫離心，將(jiang)蓋(gai)和管內壁(bi)上的(de)液體(ti)離心至管底(di)，避免開(kai)蓋(gai)時(shi)試劑(ji)損(sun)失。

3. 禁止與其(qi)他(ta)品(pin)牌(pai)的(de)試劑(ji)混(hun)用(yong)，否(fou)則會影響使(shi)用(yong)效(xiao)果(guo)。

4. 樣(yang)品(pin)或試劑(ji)被細菌(jun)或真(zhen)菌(jun)汙染(ran)或試劑(ji)交(jiao)叉汙染(ran)可能會(hui)導(dao)致(zhi)錯(cuo)誤的(de)結(jie)果(guo)。

5. 最(zui)好使用(yong)壹次(ci)性吸頭(tou)、管、瓶(ping)或玻璃器皿，可重(zhong)復使(shi)用的(de)玻(bo)璃器皿必須(xu)在使用(yong)前清(qing)洗(xi)並徹di清(qing)除殘留(liu)清(qing)潔(jie)劑(ji)。

6. 實驗後完(wan)成(cheng)後所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)及(ji)接(jie)觸過(guo)的(de)器皿應按照規(gui)定(ding)程序(xu)處(chu)理。

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