本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用堿裂(lie)解法裂(lie)解細胞(bao)，根(gen)據離心(xin)吸附柱(zhu)在(zai)高(gao)鹽狀態(tai)下特異性(xing)地結(jie)合溶液中的DNA的原(yuan)理(li)特異性(xing)提取(qu)質(zhi)粒DNA。 離(li)心(xin)吸附柱(zhu)中采用的矽(gui)基質材料(liao)能高(gao)效、專(zhuan)壹(yi)地吸附DNA，可(ke)最大限度(du)去除(chu)雜(za)質蛋(dan)白(bai)及(ji)細(xi)胞(bao)中其他(ta)有機化(hua)合物(wu)。
去內(nei)毒素(su)質粒小量(liang)提取(qu)試(shi)劑(ji)盒-常備(bei)現(xian)貨

去內(nei)毒素(su)質粒小量(liang)提取(qu)試(shi)劑(ji)盒

NobleRyderD9928  去內毒(du)素(su)質粒小量(liang)提取(qu)試(shi)劑(ji)盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Mini Kit

產品(pin)貨號：D9928

產品(pin)名(ming)稱：去內毒(du)素(su)質粒小量(liang)提取(qu)試(shi)劑(ji)盒 Free Endotoxin Plasmid Extraction Mini Kit

英(ying)文名稱(cheng)：Free Endotoxin Plasmid Extraction Mini Kit

產品(pin)規(gui)格：50T/100T

去內(nei)毒(du)素(su)質粒小量(liang)提取(qu)試(shi)劑(ji)盒-常備(bei)現(xian)貨

產品(pin)簡(jian)介：

儲存條件：酶附件-20℃，內(nei)毒(du)素(su)清(qing)除(chu)劑(ji)4℃，其它(ta)試(shi)劑(ji)RT，復(fu)檢(jian)期(qi)1年

NobleRyderD9928  去內(nei)毒(du)素(su)質粒小量(liang)提取(qu)試(shi)劑(ji)盒本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)采(cai)用堿裂(lie)解法裂(lie)解細胞(bao)，根(gen)據離心(xin)吸附柱(zhu)在(zai)高(gao)鹽狀態(tai)下特異性(xing)地結(jie)合溶液中的DNA的原(yuan)理(li)特異性(xing)提取(qu)質(zhi)粒DNA。 離(li)心(xin)吸附柱(zhu)中采用的矽(gui)基質材料(liao)能高(gao)效、專(zhuan)壹(yi)地吸附DNA，可(ke)最大限度(du)去除(chu)雜(za)質蛋(dan)白(bai)及(ji)細(xi)胞(bao)中其他(ta)有機化(hua)合物(wu)。 NobleRyder公司研制(zhi)的內(nei)毒(du)素(su)清(qing)除(chu)劑(ji)，可(ke)最大限度(du)地除(chu)去(qu)內毒(du)素(su)。從(cong)1-5ml大腸(chang)桿(gan)菌LB培(pei)養(yang)液中，可(ke)快(kuai)速(su)提(ti)取5-15μg高(gao)純(chun)度(du)質粒DNA，提(ti)取(qu)率(lv)達85-90%。使(shi)用本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)提(ti)取的質(zhi)粒DNA純(chun)度(du)高(gao)，可(ke)直(zhi)接用於細胞(bao)轉(zhuan)染(ran)等要(yao)求(qiu)較(jiao)高(gao)的實(shi)驗(yan)，以(yi)及(ji)其(qi)他(ta)各(ge)種(zhong)常規(gui)操作(zuo)，包括酶切(qie)、PCR、測(ce)序、連接和轉(zhuan)化等試驗(yan)。

使(shi)用前請先(xian)在(zai)漂(piao)洗液中加入(ru)無水乙(yi)醇(chun)，加入(ru)體(ti)積請(qing)參照瓶體(ti)上(shang)的標(biao)簽(qian)（每瓶(ping)需單(dan)獨加入(ru)45mL 無水乙(yi)醇(chun)）。P1在(zai)使(shi)用前先(xian)加入(ru)RNase A（將(jiang)試劑盒中提供(gong)的RNase A全部加入(ru)），混(hun)勻，置於2-8℃保存。如(ru)非指明(ming)，所(suo)有離心(xin)步驟(zhou)均為(wei)使(shi)用臺(tai)式離心機在(zai)室(shi)溫下(xia)離心。

第(di)壹(yi)次開蓋(gai)使(shi)用後，請將內(nei)毒(du)素(su)清(qing)除(chu)試(shi)劑於(yu)2-8℃保存，可(ke)以(yi)縮短(duan)使(shi)用時的冰(bing)上(shang)預冷時間(jian)。

具(ju)體(ti)產品(pin)的參數(shu)以收(shou)到產品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)的參數(shu)為(wei)準

操作(zuo)步驟（僅供(gong)參考(kao)）:

1. 取(qu) 1-5mL 細菌培(pei)養(yang)物(wu)，12000rpm 離心(xin) 1min，盡量(liang)吸除(chu)上(shang)清(qing)（菌液較多時可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)多次離心將(jiang)菌體(ti)沈(chen)澱(dian)收(shou)集到壹個(ge)離(li)心(xin)管中）。

2. 向(xiang)留有菌體(ti)沈(chen)澱(dian)的離(li)心(xin)管中加入(ru)200μL P1(請(qing)先(xian)檢(jian)查是(shi)否已加入(ru)RNase A），使(shi)用移液器(qi)或旋渦振蕩器(qi)che底懸(xuan)浮細菌細(xi)胞(bao)沈(chen)澱(dian)。註(zhu)意：如(ru)菌塊(kuai)未(wei)che底(di)混(hun)勻，會(hui)影(ying)響裂(lie)解導致(zhi)質粒提(ti)取(qu)量和(he)純(chun)度(du)偏(pian)低(di)。

3. 向(xiang)離(li)心(xin)管中加入(ru)200μL P2，溫和(he)地上下(xia)翻轉(zhuan)6-8次使(shi)菌體(ti)充(chong)分裂(lie)解。註(zhu)意：混(hun)勻壹定(ding)要溫和(he)，以免汙染(ran)細菌基因(yin)組 DNA，此(ci)時菌液應變得(de)清(qing)亮(liang)粘(zhan)稠，作(zuo)用時間(jian)不(bu)要(yao)超過 5min，以免質(zhi)粒被(bei)破(po)壞。

4. 向(xiang)離(li)心(xin)管中加入(ru)200μL P3，立(li)即溫和(he)地上下(xia)翻轉(zhuan)6-8次，充(chong)分混(hun)勻，此(ci)時會出(chu)現(xian)白色(se)絮狀沈(chen)澱(dian)。12000rpm離(li)心10min，用移液器(qi)小心(xin)地將上(shang)清(qing)轉(zhuan)移到另壹(yi)個(ge)幹(gan)凈(jing)的離(li)心(xin)管中，盡量(liang)不(bu)要(yao)吸出(chu)沈(chen)澱(dian)。註(zhu)意：P3加入(ru)後(hou)應立即(ji)混合，避(bi)免產生(sheng)局(ju)部(bu)沈(chen)澱(dian)。如(ru)果(guo)上清(qing)中還(hai)有微小白(bai)色沈(chen)澱(dian)，可(ke)再(zai)次離心後(hou)取上清(qing)。

5. 加入(ru)上(shang)清(qing)1/5體(ti)積的冰(bing)上(shang)預冷內毒(du)素(su)清(qing)除(chu)劑(ji)，振蕩(dang)混勻(yun)溶液變渾濁(zhuo)，冰(bing)浴(yu)5-10min至溶液變清(qing)亮(liang)。

6. 42℃水浴(yu) 5min，不(bu)時振蕩，溶液又變渾濁(zhuo)，12000rpm室(shi)溫離(li)心5min，溶液應分為(wei)兩相(xiang)，上層水相(xiang)含質粒DNA，下(xia)層油相(xiang)含內毒素(su)。

7. 將含質粒DNA的上(shang)層水相(xiang)轉(zhuan)移至新管，棄下層油相(xiang)，註(zhu)意不(bu)要(yao)吸入(ru)油(you)狀相(xiang)。重(zhong)復(fu)抽(chou)提(ti)三(san)次，即重(zhong)復(fu)步(bu)驟(zhou)5-7三(san)次。

8. 加入(ru)0.4倍(bei)上清(qing)體(ti)積的無水乙(yi)醇(chun)，充(chong)分混(hun)勻後(hou)加入(ru)吸附柱(zhu)中(吸附柱(zhu)加入(ru)收(shou)集管中)，室(shi)溫放(fang)置2min，12000rpm 離心1min，倒掉收集(ji)管中的廢(fei)液，將吸附柱(zhu)重(zhong)新放回(hui)收(shou)集(ji)管中。

9. 向(xiang)吸附柱(zhu)中加入(ru)600μL漂(piao)洗液(使(shi)用前請先(xian)檢(jian)查是(shi)否已加入(ru)無水乙(yi)醇(chun))，12000rpm離心(xin)1min，棄(qi)廢(fei)液，將吸附柱(zhu)放(fang)入(ru)收(shou)集管中。

10. 向(xiang)吸附柱(zhu)中加入(ru)600μL漂(piao)洗液，12000rpm離心1min，棄廢(fei)液，將吸附柱(zhu)放(fang)入(ru)收(shou)集管中。

11. 12000rpm 離心(xin) 2min，將吸附柱(zhu)敞口(kou)置於室(shi)溫或50℃溫箱(xiang)放置數(shu)分鐘，目的是(shi)將(jiang)吸附柱(zhu)中殘余(yu)的漂(piao)洗(xi)液去除(chu)，否(fou)則漂(piao)洗液中的乙(yi)醇(chun)會影(ying)響後續(xu)的實(shi)驗(yan)，如(ru)酶切(qie)、PCR等(deng)。

12. 將(jiang)吸附柱(zhu)放(fang)入(ru)壹(yi)個幹(gan)凈(jing)的離(li)心(xin)管中，向(xiang)吸附膜中央(yang)懸(xuan)空滴加50-200μL經65℃水浴(yu)預熱(re)的洗(xi)脫(tuo)液，室(shi)溫放(fang)置2min，12000rpm離心1min。

13. 為(wei)了增加質粒的回(hui)收(shou)效(xiao)率(lv)，可(ke)將(jiang)得(de)到(dao)的洗(xi)脫(tuo)液重(zhong)新加入(ru)吸附柱(zhu)中，室(shi)溫放(fang)置 2min，12000rpm 離心1min。

註(zhu)意事項(xiang)：

1. 使(shi)用前請先(xian)檢(jian)查P2和(he)P3是否出(chu)現(xian)混濁(zhuo)，如(ru)有混濁(zhuo)現(xian)象，可(ke)在(zai)37℃水浴(yu)中加熱幾分鐘，待溶液恢復(fu)澄(cheng)清(qing)後(hou)再使(shi)用。P2、P3、漂洗液使(shi)用後應立即(ji)擰緊蓋(gai)子。

2. 洗(xi)脫(tuo)緩(huan)沖液體(ti)積不(bu)應少於(yu)50μL，體(ti)積過(guo)小影(ying)響回(hui)收(shou)效(xiao)率(lv)；洗脫液的pH值(zhi)對(dui)洗脫(tuo)效率(lv)也有影(ying)晌，若(ruo)需要(yao)用水做(zuo)洗脫液應保證(zheng)其pH值(zhi)在(zai)8.0左(zuo)右(可(ke)用NaOH將水的pH值(zhi)調(tiao)至此(ci)範(fan)圍(wei))，pH 值低(di)於(yu)7.0會(hui)降(jiang)低(di)洗(xi)脫(tuo)效(xiao)率(lv)，DNA產物(wu)應保存在(zai)-20℃，以(yi)防(fang)DNA降解。

3. 如(ru)果(guo)所提質(zhi)粒為(wei)低(di)拷(kao)貝質(zhi)粒或大於(yu)10kb的大(da)質(zhi)粒，應加大菌體(ti)使(shi)用量，使(shi)用5-10mL過夜培(pei)養物(wu)，同時按(an)照比例(li)增加P1、P2和P3的用量，吸附和洗脫時可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)的延(yan)長(chang)時間(jian)，以(yi)增加提取(qu)效(xiao)率(lv)。

4. DNA 濃度(du)及(ji)純(chun)度(du)檢(jian)測：得(de)到的質(zhi)粒DNA純(chun)度(du)與樣品保存時間(jian)、操(cao)作(zuo)過程(cheng)中的剪(jian)切(qie)力(li)等(deng)因(yin)素(su)有關。得(de)到的 DNA 可(ke)用瓊脂(zhi)糖(tang)疑(yi)膠(jiao)電(dian)泳(yong)和紫外分光(guang)光(guang)度(du)計檢(jian)測濃(nong)度(du)與純(chun)度(du)。DNA 應在(zai)OD260處(chu)有顯著(zhu)吸收(shou)峰(feng)，OD260值為(wei)1相當(dang)於大(da)約50ug/mL雙(shuang)鏈(lian)DNA、40ug/mL單(dan)鏈(lian)DNA。OD260/OD280比值(zhi)應為(wei) 1.7-1.9，如(ru)果(guo)洗脫時不(bu)使(shi)用洗脫緩(huan)沖液，而(er)使(shi)用去離子水，比(bi)值會偏(pian)低(di)，因(yin)為(wei)pH值和(he)離子(zi)存在(zai)會(hui)影(ying)響吸光(guang)值(zhi)，但並(bing)不(bu)表(biao)示(shi)純(chun)度(du)低(di)。

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