真(zhen)菌是(shi)具有(you)真核和(he)細(xi)胞壁(bi)的(de)異養生(sheng)物，種屬很(hen)多，已(yi)報(bao)道(dao)的(de)屬(shu)達(da)1萬(wan)以(yi)上，種超(chao)過10萬(wan)個。真(zhen)菌通(tong)常(chang)又(you)分為(wei)三類，即酵(jiao)母菌、黴(mei)菌(jun)和蕈菌(jun)（大(da)型真菌(jun)）。對(dui)於(yu)酵(jiao)母菌和(he)黴(mei)菌，可以(yi)用玻(bo)璃(li)珠(zhu)處(chu)理(li)，而對(dui)於(yu)大(da)型真菌(jun)，可(ke)直(zhi)接用液氮研磨(mo)。經(jing)過(guo)前期(qi)處理(li)的(de)菌(jun)液，用矽質(zhi)膜吸(xi)附，即可(ke)得(de)到高(gao)純(chun)度(du)的(de)基(ji)因組(zu)。
真(zhen)菌(jun)基(ji)因組(zu)DNA提取試(shi)劑(ji)he 質(zhi)粒提取

真(zhen)菌基(ji)因組(zu)DNA提取試(shi)劑(ji)he 質(zhi)粒提取

NobleRyderD0188  真(zhen)菌基(ji)因組(zu)DNA提取試(shi)劑(ji)he Fungi Genomic DNA                   Extraction Kit 

產(chan)品貨號：D0188

產(chan)品名稱(cheng)：真菌(jun)基(ji)因組(zu)DNA提取試(shi)劑(ji)he Fungi Genomic DNA Extraction Kit

英(ying)文名稱(cheng)：Fungi Genomic DNA Extraction Kit

產(chan)品規(gui)格：50T/100T

產(chan)品簡介：

儲存條(tiao)件(jian)：酶附件-20℃，其(qi)它(ta)試劑RT，復檢(jian)期(qi)1年

NobleRyderD0188  真(zhen)菌基(ji)因組(zu)DNA提取試(shi)劑(ji)he真(zhen)菌是具有(you)真(zhen)核和(he)細(xi)胞壁(bi)的(de)異養生(sheng)物，種屬很(hen)多，已(yi)報(bao)道(dao)的(de)屬(shu)達(da)1萬(wan)以(yi)上，種超(chao)過10萬(wan)個。真(zhen)菌通(tong)常(chang)又(you)分為(wei)三類，即酵(jiao)母菌、黴(mei)菌(jun)和蕈菌(jun)（大(da)型真菌(jun)）。對(dui)於(yu)酵(jiao)母菌和(he)黴(mei)菌，可以(yi)用玻(bo)璃(li)珠(zhu)處(chu)理(li)，而對(dui)於(yu)大(da)型真菌(jun)，可(ke)直(zhi)接用液氮研磨(mo)。經(jing)過(guo)前期(qi)處理(li)的(de)菌(jun)液，用矽質(zhi)膜吸(xi)附，即可(ke)得(de)到高(gao)純(chun)度(du)的(de)基(ji)因組(zu)。提取純(chun)化後的(de)DNA，可(ke)以(yi)直(zhi)接(jie)用於(yu) PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等(deng)下(xia)遊應用實驗(yan)。

本(ben)試劑盒(he)適(shi)用於(yu)酵(jiao)母菌和(he)黴(mei)菌，可以(yi)用玻(bo)璃(li)珠(zhu)處(chu)理(li)，經(jing)過(guo)前期(qi)處理(li)的(de)菌(jun)液，用矽質(zhi)膜吸(xi)附，即可(ke)得(de)到高(gao)純(chun)度(du)的(de)基(ji)因組(zu)。

具(ju)體產品的(de)參(can)數(shu)以收到產品(pin)說明(ming)書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

操(cao)作步(bu)驟（僅供參(can)考(kao)）：

使(shi)用前請先(xian)在漂洗(xi)液中加入無水乙醇(chun)，加入體積(ji)請參(can)照(zhao)瓶體上(shang)的(de)標(biao)簽(qian)（每瓶需要(yao)單獨添(tian)加(jia)45mL無水乙醇(chun)）。所(suo)有離(li)心步(bu)驟均(jun)為(wei)使用臺式離心(xin)機(ji)在室(shi)溫(wen)下(xia)離心。

1、樣(yang)品處理(li)：

1）對(dui)於(yu)酵(jiao)母菌，取1-2mL培養好(hao)的(de)菌(jun)液，離心收集，棄上(shang)清。加入200μL溶液A，加入2μLRNase A，再加(jia)入100mg玻(bo)璃(li)珠(zhu)，在高(gao)速(su)振(zhen)蕩(dang)器(qi)上(shang)振(zhen)蕩(dang)，約5-10min。

2）黴(mei)菌(孢子(zi)也可(ke)相(xiang)同(tong)處理(li))：取50-100mg菌(jun)絲(si)，加200μL溶液A，用玻(bo)璃(li)研(yan)磨(mo)器(qi)適(shi)當研(yan)磨(mo)分(fen)散(san)菌(jun)絲，加入2μL RNase A，再加(jia)入100mg玻(bo)璃(li)珠(zhu)，在高(gao)速(su)振(zhen)蕩(dang)器(qi)上(shang)振(zhen)蕩(dang)，約30min。

3）大(da)型真菌(jun)（建(jian)議(yi)）：稱(cheng)取100-200mg樣(yang)品(pin)，倒(dao)入適(shi)量的(de)液氮，立即研(yan)磨(mo)重(zhong)復3次(ci)，使樣品研成(cheng)粉末(mo)，加400μL的(de)CTAB裂(lie)解液，加入2μL RNase A，再加(jia)入100mg 玻(bo)璃(li)珠(zhu)，在高(gao)速(su)振(zhen)蕩(dang)器(qi)上(shang)振(zhen)蕩(dang)，約5min，後續再采(cai)用本試(shi)劑(ji)盒(he)繼續提取。

2、 加(jia)入20μL的(de)蛋(dan)白(bai)酶K，充(chong)分混(hun)勻，55℃水浴消化(hua)30min，消化(hua)期(qi)間(jian)可顛倒(dao)離心(xin)管(guan)混(hun)勻數(shu)次。 12000rpm離心2min。將(jiang)上(shang)清轉移到壹個新(xin)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)。如有沈澱，可(ke)再次(ci)離心(xin)。

3、在上(shang)清中加(jia)入200μL溶液B，充(chong)分混(hun)勻。如出現白色沈澱(dian)，可(ke)放(fang)55℃水浴5min，沈(chen)澱即(ji)會消失(shi)，不(bu)影響(xiang)後續實驗(yan)。如溶液未變清亮(liang)，說明(ming)樣(yang)品(pin)消化(hua)不(bu)che底(di)，可能(neng)導(dao)致(zhi)提取的(de) DNA量(liang)少(shao)及(ji)不(bu)純(chun)，還有(you)可(ke)能(neng)導(dao)致(zhi)上(shang)柱(zhu)後堵(du)柱(zhu)子(zi)，請增(zeng)加消化(hua)時(shi)間(jian)。

4、再加(jia)入200μL無水乙醇(chun)，充(chong)分混(hun)勻，此時可(ke)能(neng)會出現絮狀(zhuang)沈(chen)澱，不(bu)影響(xiang)DNA的(de)提取，將(jiang)溶液和絮狀(zhuang)沈(chen)澱都(dou)加(jia)入吸附柱中(zhong)，放(fang)置(zhi)2min。

5、12000rpm 離(li)心1min，棄廢(fei)液，將(jiang)吸(xi)附柱放(fang)入收集管(guan)中(zhong)。

6、向(xiang)吸附柱中(zhong)加(jia)入600μL漂洗(xi)液(使用前請先(xian)檢查是(shi)否(fou)已加入無水乙醇(chun))，12000rpm離心(xin)1min，棄廢(fei)液，將(jiang)吸(xi)附柱放(fang)入收集管(guan)中(zhong)。

7、向(xiang)吸附柱中(zhong)加(jia)入600μL漂洗(xi)液，12000rpm離心1min，棄廢(fei)液，將(jiang)吸(xi)附柱放(fang)入收集管(guan)中(zhong)。

8、12000rpm 離(li)心2min，將(jiang)吸(xi)附柱置(zhi)於(yu)室(shi)溫(wen)或50℃溫(wen)箱(xiang)放(fang)置(zhi)數(shu)分鐘(zhong)，目的(de)是(shi)將(jiang)吸(xi)附柱中(zhong)殘(can)余的(de)漂洗(xi)液去除(chu)，否(fou)則(ze)漂洗(xi)液中的(de)乙(yi)醇(chun)會影響(xiang)後續的(de)實(shi)驗(yan)如酶切、PCR等。

9、將(jiang)吸(xi)附柱放(fang)入壹個幹(gan)凈(jing)的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，向吸附膜中(zhong)央(yang)懸空滴加50-200μL經(jing)65℃水浴預(yu)熱的(de)洗(xi)脫(tuo)液，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)5min，12000rpm離(li)心1min。

10、離(li)心所(suo)得洗(xi)脫(tuo)液再加(jia)入吸附柱中(zhong)，室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)2min，12000rpm離(li)心2min，即可(ke)得到高(gao)質(zhi)量的(de)基(ji)因組(zu)DNA。

註(zhu)意事(shi)項(xiang)：

1. 由(you)於(yu)真(zhen)菌(jun)種類(lei)萬(wan)千，對(dui)於(yu)壹些特(te)別(bie)難處(chu)理(li)的(de)真(zhen)菌(jun)，可(ke)用液氮研磨(mo)，再用玻(bo)璃(li)珠(zhu)振(zhen)蕩(dang)，蛋(dan)白酶K處理(li)，壹般都(dou)可(ke)以得到壹定量(liang)的(de)基(ji)因組(zu)DNA，如電泳檢測(ce)很(hen)弱，壹般PCR都(dou)會有較好(hao)結果。

2. 若(ruo)溶液A或溶液B中有沈澱(dian)，可(ke)在55℃水浴中(zhong)重新(xin)溶解。

3. 如果DNA提取量(liang)很(hen)少(shao)，可(ke)加長玻(bo)璃(li)珠(zhu)處(chu)理(li)時間(jian)，如果提取DNA成(cheng)彌散(san)短(duan)條帶，可減(jian)少(shao)玻(bo)璃(li)珠(zhu)處(chu)理(li)時間(jian)。

4. 洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液的(de)體(ti)積(ji)最好(hao)不(bu)少(shao)於(yu)50μL，體(ti)積(ji)過小(xiao)會影響(xiang)回(hui)收效(xiao)率(lv)；洗(xi)脫(tuo)液的(de)pH值對(dui)洗脫(tuo)效(xiao)率(lv)也有(you)影響(xiang)，若(ruo)需要(yao)用水做洗(xi)脫(tuo)液應保(bao)證(zheng)其(qi)pH值在8.0左(zuo)右(you)(可(ke)用NaOH將(jiang)水的(de)pH值調(tiao)至(zhi)此範圍)，pH值低(di)於(yu)7.0會降低(di)洗脫(tuo)效(xiao)率(lv)；DNA產(chan)物應保(bao)存在-20℃，以(yi)防DNA降解。

5. DNA 濃度(du)及(ji)純(chun)度(du)檢測(ce)：得(de)到的(de)基(ji)因組(zu)DNA片段(duan)的(de)大(da)小與樣(yang)品(pin)保(bao)存時(shi)間(jian)、操作過程中的(de)剪(jian)切力等(deng)因素有關。回(hui)收得到的(de) DNA 片段(duan)可用瓊脂(zhi)糖(tang)凝膠(jiao)電(dian)泳和紫外分(fen)光(guang)光(guang)度(du)計(ji)檢測(ce)濃度(du)與純(chun)度(du)。DNA應在OD260處(chu)有顯著(zhu)吸收峰，OD260值為(wei)1相當(dang)於(yu)大(da)約50 μg/mL雙鏈(lian)DNA、40 μg/mL 單鏈(lian) DNA

OD260/OD280比值應(ying)為(wei) 1.7-1.9，如果洗脫(tuo)時不(bu)使(shi)用洗脫(tuo)緩沖(chong)液，而使用去離子(zi)水，比值會偏低(di)，因為(wei)pH值和(he)離(li)子(zi)存(cun)在會影響(xiang)光(guang)吸收值，但(dan)並不(bu)表示純(chun)度(du)低。

真(zhen)菌基(ji)因組(zu)DNA提取試(shi)劑(ji)he 質(zhi)粒提取

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D0188  真(zhen)菌基(ji)因組(zu)DNA提取試(shi)劑(ji)he Fungi Genomic DNA Extraction Kit  50T/100T