核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)全(quan)套(tao)試劑(ji)，適用於(yu)從(cong)各(ge)種(zhong)原(yuan)代或(huo)傳(chuan)代動(dong)物細(xi)胞和(he)各(ge)種(zhong)動(dong)物實(shi)體組(zu)織，如(ru)腦、脊(ji)髓、神(shen)經(jing)結或(huo)纖維(wei)、脂(zhi)肪(fang)、肝(gan)臟、消(xiao)化道、腎臟、心臟、肌肉、血管(guan)、結締(di)組(zu)織等(deng)動物組(zu)織中(zhong)提(ti)取(qu)核(he)蛋(dan)白(bai)和(he)胞(bao)漿蛋(dan)白(bai)。
核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒-蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用

諾博萊(lai)德(de) 核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用）

NobleRyder P5086 核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用）

產品(pin)貨(huo)號(hao)：P5086

產品(pin)名(ming)稱：核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用）

產品(pin)規(gui)格(ge)：50T/100T

核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒-蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用

產品(pin)簡(jian)介(jie)：

中文名(ming)稱：核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用）

規格：100T ; 50T

儲(chu)存條件：2-8℃，1 year

具體產品(pin)的(de)參數以收到產品(pin)說(shuo)明書的參數為準(zhun)

NobleRyder P5086 核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用）

核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)全(quan)套(tao)試劑(ji)，適用於(yu)從(cong)各(ge)種(zhong)原(yuan)代或(huo)傳(chuan)代動(dong)物細(xi)胞和(he)各(ge)種(zhong)動(dong)物實(shi)體組(zu)織，如(ru)腦、脊(ji)髓、神(shen)經(jing)結或(huo)纖維(wei)、脂(zhi)肪(fang)、肝(gan)臟、消(xiao)化道、腎臟、心臟、肌肉、血管(guan)、結締(di)組(zu)織等(deng)動物組(zu)織中(zhong)提(ti)取(qu)核(he)蛋(dan)白(bai)和(he)胞(bao)漿蛋(dan)白(bai)。提(ti)取(qu)過(guo)程簡(jian)單方便，可在1小(xiao)時內(nei)完成(cheng)。制備(bei)的核(he)蛋(dan)白(bai)和(he)胞(bao)漿蛋(dan)白(bai)不僅純度(du)高，保持(chi)天(tian)然(ran)活(huo)性，而(er)且絕少(shao)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。本試(shi)劑(ji)盒含(han)有的獨(du)te配方能夠有效溶(rong)解(jie)細(xi)胞核(he)膜組(zu)份(fen)。本試(shi)劑(ji)盒含(han)有的蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物，阻(zu)止了蛋(dan)白(bai)酶對蛋(dan)白(bai)的降(jiang)解，為提(ti)取(qu)高純度的蛋(dan)白(bai)提(ti)供(gong)了保證。本試(shi)劑(ji)盒的(de)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)組(zu)份(fen)中不(bu)含有不可透(tou)析(xi)除(chu)去的(de)去垢(gou)劑(ji)組(zu)份(fen)，不含(han)SDS、TritonX-100、chaps等可能影響質(zhi)譜(pu)實驗的組(zu)份(fen)，最後得到的蛋(dan)白(bai)質樣品(pin)經(jing)過(guo)透(tou)析(xi)或(huo)者(zhe)脫(tuo)鹽處(chu)理後將(jiang)不(bu)含有(you)去(qu)垢(gou)劑(ji)、高濃度(du)鹽(yan)等影響，基(ji)本可(ke)以滿足(zu)下(xia)遊(you)任意的(de)蛋(dan)白(bai)質組(zu)學相(xiang)關實(shi)驗研究(jiu)。本產品(pin)的(de)蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物中(zhong)不含(han)AEBSF，可(ke)以避免(mian)由於(yu)AEBSF導(dao)致的(de)質譜(pu)峰漂(piao)移(yi)，因(yin)此使用本產品(pin)提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白(bai)樣品(pin)可(ke)以用於(yu)質(zhi)譜(pu)(MassSpectrometry,MS)檢(jian)測(ce)和(he)分(fen)析(xi)，蛋(dan)白(bai)質組(zu)學(proteomics)等(deng)相(xiang)關研(yan)究。本試(shi)劑(ji)盒提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白(bai)為具(ju)有(you)天(tian)然(ran)蛋(dan)白(bai)構象(xiang)的活(huo)性蛋(dan)白(bai)。

適用樣本：動(dong)物細(xi)胞/組(zu)織

註(zhu)：

1. 蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)未(wei)開(kai)蓋使用前也(ye)可以2-8℃儲(chu)存。開(kai)蓋使用後-20℃儲(chu)存。

2. 蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)在2-8℃低溫(wen)時是(shi)固體狀態(tai)，從(cong)冰(bing)箱取(qu)出(chu)後恢復(fu)至(zhi)室(shi)溫(wen)或37℃短時間(jian)水浴(yu)，變(bian)成液體狀態(tai)後離心至(zhi)管(guan)底(di)部(bu)再(zai)開(kai)蓋。

3. 試劑(ji)拆封後請盡(jin)快使用完！

產品(pin)簡(jian)介(jie)：

核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)全(quan)套(tao)試劑(ji)，適用於(yu)從(cong)各(ge)種(zhong)原(yuan)代或(huo)傳(chuan)代動(dong)物細(xi)胞和(he)各(ge)種(zhong)動(dong)物實(shi)體組(zu)織，如(ru)腦、脊(ji)髓、神(shen)經(jing)結或(huo)纖維(wei)、脂(zhi)肪(fang)、肝(gan)臟、消(xiao)化道、腎臟、心臟、肌肉、血管(guan)、結締(di)組(zu)織等(deng)動物組(zu)織中(zhong)提(ti)取(qu)核(he)蛋(dan)白(bai)和(he)胞(bao)漿蛋(dan)白(bai)。提(ti)取(qu)過(guo)程簡(jian)單方便，可在1小(xiao)時內(nei)完成(cheng)。制備(bei)的核(he)蛋(dan)白(bai)和(he)胞(bao)漿蛋(dan)白(bai)不僅純度(du)高，保持(chi)天(tian)然(ran)活(huo)性，而(er)且絕少(shao)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染。

本試(shi)劑(ji)盒含(han)有的獨(du)te配方能夠有效溶(rong)解(jie)細(xi)胞核(he)膜組(zu)份(fen)。本試(shi)劑(ji)盒含(han)有的蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物，阻(zu)止了蛋(dan)白(bai)酶對蛋(dan)白(bai)的降(jiang)解，為提(ti)取(qu)高純度的蛋(dan)白(bai)提(ti)供(gong)了保證。

本試(shi)劑(ji)盒的(de)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)組(zu)份(fen)中不(bu)含有不可透(tou)析(xi)除(chu)去的(de)去垢(gou)劑(ji)組(zu)份(fen)，不含(han)SDS、Triton X100、chaps等可能影響質(zhi)譜(pu)實驗的組(zu)份(fen)，最後得到的蛋(dan)白(bai)質樣品(pin)經(jing)過(guo)透(tou)析(xi)或(huo)者(zhe)脫(tuo)鹽處(chu)理後將(jiang)不(bu)含有(you)去(qu)垢(gou)劑(ji)、高濃度(du)鹽(yan)等影響，基(ji)本可(ke)以滿足(zu)下(xia)遊(you)任意的(de)蛋(dan)白(bai)質組(zu)學相(xiang)關實(shi)驗研究(jiu)。

本產品(pin)的(de)蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物中(zhong)不含(han)AEBSF，可(ke)以避免(mian)由於(yu)AEBSF導(dao)致的(de)質譜(pu)峰漂(piao)移(yi)，因(yin)此使用本產品(pin)提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白(bai)樣品(pin)可(ke)以用於(yu)質(zhi)譜(pu)(Mass Spectrometry,MS)檢(jian)測(ce)和(he)分(fen)析(xi)，蛋(dan)白(bai)質組(zu)學(proteomics)等(deng)相(xiang)關研(yan)究。

本試(shi)劑(ji)盒提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白(bai)為具(ju)有(you)天(tian)然(ran)蛋(dan)白(bai)構象(xiang)的活(huo)性蛋(dan)白(bai)。

本試(shi)劑(ji)盒中(zhong)不含有EDTA，與金屬(shu)螯(ao)和(he)層(ceng)析等下(xia)遊(you)應用兼容(rong)。

本試(shi)劑(ji)盒提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白(bai)也(ye)可用於(yu)Western Blotting、蛋(dan)白(bai)質電泳、免(mian)疫(yi)沈澱、ELISA、轉錄活(huo)性分(fen)析、Gel shi凝膠(jiao)阻滯實驗、酶活(huo)性測(ce)定等下(xia)遊(you)蛋(dan)白(bai)研究實驗。

自(zi)備(bei)試劑(ji)和(he)儀(yi)器(qi)：

離心機(ji)、振蕩(dang)器(qi)、渦旋混勻(yun)器(qi)、移(yi)液(ye)器(qi)、冰箱、冰(bing)盒，PBS緩沖液(ye)、蛋(dan)白(bai)定量(liang)試(shi)劑(ji)盒，離心管(guan)、吸(xi)頭(tou)、壹(yi)次性(xing)手套

產品(pin)特(te)點：

1、使用方便，從(cong)細(xi)胞，組(zu)織中(zhong)提(ti)取(qu)蛋(dan)白(bai)不需經(jing)過(guo)研磨(mo)、反復凍融、超(chao)聲(sheng)破(po)碎等前(qian)處(chu)理。

2、將(jiang)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)的(de)時間(jian)縮短至(zhi) 30 分鐘(zhong)-1 小時。

3、含蛋(dan)白(bai)穩(wen)定劑(ji)，提(ti)取(qu)的(de)蛋(dan)白(bai)穩(wen)定。

4、紫外(wai)檢(jian)測(ce)蛋(dan)白(bai)濃度(du)時，背景幹(gan)擾低。

5、蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)液(ye)含(han)多(duo)種(zhong)有(you)效成(cheng)分(fen)，可以充(chong)分(fen)釋(shi)放(fang)胞(bao)漿蛋(dan)白(bai)、核(he)蛋(dan)白(bai)，又(you)可(ke)結合(he)釋(shi)出(chu)的蛋(dan)白(bai)防(fang)止(zhi)沈澱。

6、蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)抑制了蛋(dan)白(bai)的降(jiang)解，蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)配方優(you)化。蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物包(bao)含 5 種(zhong)獨(du)立的蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji) Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每壹(yi)種(zhong)抑制劑(ji)可特(te)異性抑制某壹(yi)種(zhong)或(huo)幾種(zhong)蛋(dan)白(bai)酶活(huo)性。該混合(he)物優(you)化的(de)組(zu)成使(shi)其可(ke)以抑制幾乎(hu)所有(you)重要(yao)的蛋(dan)白(bai)酶活(huo)性，包(bao)括(kuo)si氨酸蛋(dan)白(bai)酶、半(ban)guang氨酸蛋(dan)白(bai)酶、天(tian)冬氨酸蛋(dan)白(bai)酶、丙(bing)氨酰-氨基肽酶等。

使用方法：

使用註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

1. 螺(luo)旋蓋微(wei)量(liang)試(shi)劑(ji)管(guan)裝的(de)試(shi)劑(ji)在開(kai)蓋前請(qing)短暫離心，將(jiang)蓋和(he)管(guan)內(nei)壁(bi)上的液體離心至(zhi)管(guan)底(di)，避(bi)免(mian)開(kai)蓋

時試劑(ji)損失(shi)。

2. 實驗過(guo)程中(zhong)的所有(you)試(shi)劑(ji)須預冷；所有器(qi)具須(xu)放-20℃冰(bing)箱預冷。整個過(guo)程須(xu)保持(chi)樣品(pin)處(chu)於(yu)低溫(wen)。

3. 蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)儲(chu)存期間(jian)溶液如果出(chu)現沈澱，不(bu)影響使(shi)用，溶解(jie)後正常使用。

4. 如果試劑(ji)盒不(bu)能短時間(jian)內(nei)用完，蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物不(bu)可以壹(yi)次全(quan)部加入提(ti)取(qu)液(ye)。

5. 可以根據(ju)自(zi)己實(shi)驗需要(yao)加(jia)入其它(ta)蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)單品(pin)。

6. Western實驗內(nei)參可以選用Lamin B、TBP、Histon H3。

操作(zuo)步驟

1.提(ti)取(qu)液(ye)制備(bei)：

將(jiang)試(shi)劑(ji)B1和(he)試(shi)劑(ji)B2混合(he)，配成(cheng)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)液(ye)B，充(chong)分(fen)混(hun)勻備(bei)用。

每500μl蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)液(ye)B中(zhong)加入2μl蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物，混(hun)勻後置冰(bing)上備(bei)用。

【註(zhu)】:

1)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)液(ye)B短期(qi)置(zhi)4℃保存(cun)，長(chang)期不(bu)用的可(ke)以分裝後-20℃保存(cun)，避(bi)免(mian)反復凍融。

2)根據(ju)需要(yao)處(chu)理的(de)樣品(pin)數(shu)量(liang)準(zhun)備(bei)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)液(ye)，蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)混合(he)物不(bu)可以壹(yi)次全(quan)部加入提(ti)取(qu)液(ye)。磷(lin)酸酶抑制劑(ji)可以壹(yi)次加(jia)入。

3)加過(guo)蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)的提(ti)取(qu)液(ye)壹(yi)周內(nei)未(wei)使(shi)用完，再(zai)次使(shi)用前需(xu)要再(zai)次加(jia)入蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)。

4)以下(xia)步驟中(zhong)使用的蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)液(ye)B為此步配制好的(de)含蛋(dan)白(bai)酶抑制劑(ji)的提(ti)取(qu)液(ye)。

2. 取5×10⁶-1×10⁷個細(xi)胞（大(da)約50 mg細(xi)胞/50μl細(xi)胞），在(zai)4℃，500×g條件下(xia)離心5分(fen)鐘(zhong)，小心(xin)吸(xi)取(qu)培養(yang)基，盡可(ke)能(neng)吸(xi)幹(gan)，收(shou)集(ji)細(xi)胞。

【註(zhu)】

1) 組(zu)織樣本用jian刀剪碎，加(jia)冷PBS，用組(zu)織勻(yun)漿器(qi)/機勻(yun)漿至(zhi)無明顯(xian)肉眼(yan)可見固(gu)體。勻漿液在4℃，1000×g力(li)條件下(xia)離心10分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上清(qing)，收集(ji)沈澱。

3.用冷PBS洗滌(di)細(xi)胞兩(liang)次，每(mei)次洗滌(di)後盡可(ke)能吸(xi)幹(gan)上清(qing)。

4.大約每(mei)20μl細(xi)胞（離心後細(xi)胞沈澱體積）中(zhong)加入(ru)200-300μl冷的提(ti)取(qu)液(ye)A，高速渦旋振蕩(dang)混(hun)勻(yun)或(huo)吹打混勻(yun)，置2-8℃條件振蕩(dang)10-30分(fen)鐘(zhong)。

【註(zhu)】:

1)提(ti)取(qu)液(ye)A處(chu)理後細(xi)胞體積應減(jian)少(shao)，否則(ze)延(yan)長提(ti)取(qu)液(ye)A振(zhen)蕩(dang)處(chu)理時間(jian)。

2)使用振蕩(dang)器(qi)/搖床(chuang)的較低轉速，提(ti)取(qu)液(ye)能(neng)輕(qing)微(wei)晃動即可(ke)。

3)沒(mei)有(you)振蕩(dang)條件也(ye)可以不振(zhen)蕩(dang)，稍(shao)微(wei)延長提(ti)取(qu)液(ye)的(de)處(chu)理時間(jian)，中間(jian)每隔(ge)幾分鐘(zhong)用移(yi)液(ye)器(qi)吹打混勻(yun)即可(ke)。

5.然後在4℃，2000×g條件下(xia)離心10分(fen)鐘(zhong)。棄(qi)上清(qing)，收集(ji)沈澱。

6.在沈澱中(zhong)加(jia)入100-200μl冷的提(ti)取(qu)液(ye)B，高速渦旋振蕩(dang)15秒(miao)。

【註(zhu)】:

1)加提(ti)取(qu)液(ye)B前(qian)，必須盡可能(neng)吸(xi)幹(gan)提(ti)取(qu)液(ye)A。否則(ze)會(hui)影響核(he)蛋(dan)白(bai)純度。

2)也(ye)可以用PBS將(jiang)沈澱洗(xi)滌(di)壹(yi)次。PBS重(zhong)懸(xuan)沈澱，2000×g離心15分(fen)鐘(zhong)。

3)提(ti)取(qu)液(ye)B用量(liang)根據(ju)實驗細(xi)胞數(shu)量(liang)情況調(tiao)整，細(xi)胞數(shu)量(liang)多(duo)則(ze)多(duo)加(jia)。也(ye)可根據(ju)預實驗時最終蛋(dan)白(bai)濃度(du)實(shi)際情況調(tiao)整。

7. 置2-8℃條件振蕩(dang)30-40分(fen)鐘(zhong)。

【註(zhu)】:

1)使用振蕩(dang)器(qi)/搖床(chuang)的較低轉速，提(ti)取(qu)液(ye)能(neng)輕(qing)微(wei)晃動即可(ke)。

2)沒(mei)有(you)振蕩(dang)條件也(ye)可以不振(zhen)蕩(dang)，稍(shao)微(wei)延長提(ti)取(qu)液(ye)的(de)處(chu)理時間(jian)，中間(jian)每隔(ge)幾分鐘(zhong)用移(yi)液(ye)器(qi)吹打混勻(yun)即可(ke)。

3)此步驟蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)液(ye)處(chu)理產物中(zhong)有時會(hui)出(chu)現少(shao)量(liang)透(tou)明膠(jiao)狀物，屬(shu)正常現象(xiang)。該透(tou)明膠(jiao)狀物為含(han)有(you)基因(yin)組(zu)DNA等的(de)蛋(dan)白(bai)復合(he)物。不(bu)檢(jian)測(ce)和(he)基(ji)因(yin)組(zu)DNA結合(he)特別(bie)緊(jin)密(mi)的特(te)定蛋(dan)白(bai)的情況下(xia)，可(ke)以直接離心取(qu)上清(qing)進行後續實(shi)驗即可(ke)；如果需要(yao)檢(jian)測(ce)和(he)基(ji)因(yin)組(zu)結合(he)特別(bie)緊(jin)密(mi)的蛋(dan)白(bai)，則可以通(tong)過(guo)超聲(sheng)處(chu)理，300 w/10秒(miao)間(jian)隔(ge)10秒(miao)，超(chao)聲(sheng)3分(fen)鐘(zhong)，隨後離心取(qu)上清(qing)用於(yu)後續實(shi)驗。檢(jian)測(ce)壹(yi)些常見的(de)轉錄因(yin)子，例如(ru)NF-kappaB、p53等時，不必進(jin)行超聲(sheng)處(chu)理。如(ru)果引入(ru)其(qi)他外(wai)源性蛋(dan)白(bai)質不影響下(xia)遊(you)實(shi)驗的話，也(ye)可以加入(ru)DNase處(chu)理。

8.在4℃，12000×g條件下(xia)離心10分(fen)鐘(zhong)。

9.將(jiang)上清(qing)吸(xi)入(ru)另(ling)壹(yi)預冷的幹凈離心管(guan)，即可(ke)得到核(he)蛋(dan)白(bai)。

10.將(jiang)上述蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)物定量(liang)後分裝於(yu)-80℃冰(bing)箱保存(cun)備(bei)用或直(zhi)接用於(yu)下(xia)遊(you)實(shi)驗。

【註(zhu)】:

1)建議用BCA法進(jin)行蛋(dan)白(bai)定量(liang)。

2)蛋(dan)白(bai)樣品(pin)-80℃存(cun)放(fang)壹(yi)年沒(mei)有(you)問題。註(zhu)意(yi)不(bu)要(yao)被蛋(dan)白(bai)酶水解掉(diao)，不要(yao)被(bei)細(xi)菌(jun)汙(wu)染。

11. 將(jiang)蛋(dan)白(bai)樣品(pin)透(tou)析(xi)處(chu)理或(huo)者(zhe)脫(tuo)鹽柱(zhu)脫(tuo)鹽處(chu)理後用於(yu)下(xia)遊(you)實(shi)驗。

【註(zhu)】:

1)蛋(dan)白(bai)樣品(pin)中(zhong)含(han)有(you)鹽(yan)，需要脫(tuo)鹽處(chu)理後用於(yu)雙(shuang)向(xiang)電泳(yong)。

2)經(jing)透(tou)析(xi)或(huo)脫(tuo)鹽處(chu)理的(de)蛋(dan)白(bai)樣品(pin)不(bu)含(han)有(you)去(qu)垢(gou)劑(ji)和(he)高濃度(du)鹽(yan)。

核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒-蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用

產品(pin)訂(ding)購(gou)信(xin)息(xi)：

P5086  核(he)蛋(dan)白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)盒（蛋(dan)白(bai)組(zu)實驗、質譜(pu)適用）  50T/100T