采(cai)用大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)BL21（DE3）pLysS菌(jun)株(zhu)經(jing)特(te)殊(shu)工(gong)藝(yi)處(chu)理得到(dao)的(de)感(gan)受(shou)態細胞，可(ke)用於DNA的化(hua)學(xue)轉化(hua)。
BL21(DE3)pLysS感(gan)受(shou)態細胞 載體(ti)構(gou)建

NobleRyder C9388 BL21(DE3)pLysS感(gan)受(shou)態細胞BL21(DE3)pLysS Competent Cells

產品貨號(hao)：C9388

產品名稱：BL21(DE3)pLysS感(gan)受(shou)態細胞BL21(DE3)pLysS Competent Cells

英文名稱：BL21(DE3)pLysS Competent Cells

產品規(gui)格：20*100ul/10*100ul

BL21(DE3)pLysS感(gan)受(shou)態細胞 載體(ti)構(gou)建

產品簡介：

外(wai)觀(性狀)：幹(gan)冰(bing)運輸(shu)，單(dan)加(jia)10kg幹(gan)冰(bing)費

儲(chu)存(cun)條(tiao)件：液氮(dan)保存(cun)至(zhi)少壹年，-70℃保存(cun)至(zhi)少6個月(yue)

具體(ti)產品的參(can)數以(yi)收到(dao)產品說明書(shu)的(de)參(can)數(shu)為準

NobleRyder C9388 BL21(DE3)pLysS感(gan)受(shou)態細胞BL21(DE3)pLysS Competent Cells

采(cai)用大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)BL21（DE3）pLysS菌(jun)株(zhu)經(jing)特(te)殊(shu)工(gong)藝(yi)處(chu)理得到(dao)的(de)感(gan)受(shou)態細胞，可(ke)用於DNA的化(hua)學(xue)轉化(hua)。使用pUC19質(zhi)粒(li)檢測，轉化(hua)效(xiao)率可(ke)達(da)107，-70℃保存(cun)6個(ge)月轉化(hua)效(xiao)率不發(fa)生(sheng)改(gai)變。

基(ji)因型(xing)：F-,ompT,hsdSB(rB-mB-), dcm, gal(DE3), pLysS, Cmr

特(te)點(dian)：該菌(jun)株(zhu)帶有質粒pLysS，因(yin)此具有氯黴(mei)su抗(kang)性。質粒(li)pLysS含(han)有表達T7溶(rong)jun酶(mei)的(de)基(ji)因，能(neng)夠降低(di)目的(de)基(ji)因的(de)背(bei)景(jing)表達水(shui)平(ping)，但不(bu)幹擾(rao)目的(de)蛋白的表(biao)達。該菌(jun)適(shi)合(he)表達毒性蛋白和非(fei)毒(du)性蛋白。

操作方法(fa)：（以(yi)下(xia)各步(bu)驟均(jun)為無菌操作(zuo)）

1、將(jiang)感(gan)受(shou)態細胞置於冰(bing)上融化，以(yi)下(xia)實(shi)驗以(yi)100ul感(gan)受(shou)態細胞為例。

2、向感(gan)受(shou)態細胞懸液中(zhong)加入需轉化(hua)的(de)目的(de)DNA，註(zhu)意(yi)目的(de)DNA的(de)體(ti)積不(bu)要(yao)超過感(gan)受(shou)態細胞懸液體(ti)積的(de)十分之(zhi)壹(yi)，輕(qing)輕(qing)旋(xuan)轉離(li)心管以(yi)混勻(yun)內容物(wu)，冰(bing)浴(yu)放(fang)置30分鐘(zhong)。

3、將(jiang)離(li)心管置於42℃水(shui)浴(yu)中(zhong)放置60-90秒(miao)，然(ran)後(hou)快速轉移(yi)到(dao)冰(bing)浴(yu)中(zhong)放置2-3分鐘(zhong)，不要(yao)搖(yao)動(dong)離心管。

4、向離心管中(zhong)加入500ul無菌無抗(kang)的(de)SOC或LB培養基(ji)，37℃150rpm振蕩(dang)培養1小(xiao)時。目的(de)是(shi)使質粒(li)上相關的(de)抗(kang)性標記(ji)基(ji)因表(biao)達，使菌體(ti)復蘇(su)。

5、取適(shi)量(liang)已轉化(hua)的(de)感(gan)受(shou)態細胞塗布含(han)相(xiang)應抗(kang)生(sheng)素的SOC或LB平(ping)板，37℃倒(dao)置培養12-16小(xiao)時。塗布用量(liang)可(ke)根(gen)據具體(ti)實驗(yan)來(lai)調(tiao)整(zheng)，如轉化(hua)的(de)DNA總(zong)量較(jiao)多(duo)，可(ke)取100ul左右的(de)轉化(hua)產物塗板；反之(zhi)，如轉化(hua)的(de)DNA總(zong)量較(jiao)少，可(ke)取200-300ul的轉化(hua)產物塗板。如果預(yu)計的(de)克(ke)隆(long)較(jiao)少，可(ke)通(tong)過離心後(hou)吸除(chu)部分培養液(ye)，懸浮菌體(ti)後(hou)將(jiang)其(qi)塗布於壹個(ge)平(ping)板中(zhong)。塗布剩(sheng)余的菌(jun)液可(ke)4℃保存(cun)，如果次(ci)日的轉化(hua)菌(jun)落(luo)數(shu)過少可(ke)以(yi)將(jiang)剩(sheng)下(xia)的(de)菌(jun)液再塗布新(xin)的(de)平(ping)板。

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

1、實驗過程(cheng)中(zhong)應嚴格(ge)無菌操作(zuo)，防止其(qi)它DNA或雜(za)菌的(de)汙(wu)染，避(bi)免為以(yi)後(hou)的篩(shai)選(xuan)、鑒定(ding)帶來(lai)影響(xiang)。

2、感(gan)受(shou)態細胞不(bu)可(ke)反復凍(dong)融，否則(ze)其(qi)轉化(hua)效(xiao)率將(jiang)會(hui)降低(di)。

3、轉化(hua)時，轉化(hua)效(xiao)率與外(wai)源DNA的濃(nong)度在壹定(ding)範圍(wei)內成正(zheng)比(bi)，但當加(jia)入的外(wai)源DNA量過多或體(ti)積過大(da)反而(er)會(hui)降低(di)轉化(hua)效(xiao)率。轉化(hua)時DNA體(ti)積要(yao)小(xiao)於感(gan)受(shou)態細胞體(ti)積的(de)十分之(zhi)壹(yi)。

4、為防止轉化(hua)實(shi)驗(yan)不(bu)成功(gong)，可(ke)以(yi)保留(liu)部分連接產物，以(yi)重新轉化(hua)，將(jiang)損(sun)失(shi)將(jiang)到(dao)最(zui)di。

BL21(DE3)pLysS感(gan)受(shou)態細胞 載體(ti)構(gou)建 

產品訂購(gou)信(xin)息(xi)：

C9388 BL21(DE3)pLysS感(gan)受(shou)態細胞BL21(DE3)pLysS Competent Cells  20*100ul/10*100ul