采用大腸(chang)桿菌(jun)JM109菌(jun)株經(jing)特(te)殊(shu)工藝(yi)處(chu)理(li)得到(dao)的感(gan)受(shou)態(tai)細胞，可(ke)用於(yu)DNA的化學(xue)轉化。
JM109感(gan)受(shou)態(tai)細胞 載體構(gou)建(jian)

NobleRyder C9188 JM109感(gan)受(shou)態(tai)細胞E.coli JM109 Competent Cells

產品(pin)貨(huo)號(hao)：C9188

產品(pin)名稱(cheng)：JM109感(gan)受(shou)態(tai)細胞E.coli JM109 Competent Cells

英(ying)文(wen)名稱(cheng)：E.coli JM109 Competent Cells

產品(pin)規(gui)格：20*100ul/10*100ul

JM109感(gan)受(shou)態(tai)細胞 載體構(gou)建(jian)

產品(pin)簡介(jie)：

外(wai)觀(guan)(性(xing)狀(zhuang))：幹冰運輸(shu)，單(dan)加10kg幹冰費

儲(chu)存條(tiao)件：液氮(dan)保存至少壹年，-70℃保存至少6個(ge)月

具(ju)體產品(pin)的參數以收(shou)到(dao)產品(pin)說(shuo)明(ming)書的參數為(wei)準

NobleRyder C9188 JM109感(gan)受(shou)態(tai)細胞E.coli JM109 Competent Cells

采用大腸(chang)桿菌(jun)JM109菌(jun)株經(jing)特(te)殊(shu)工藝(yi)處(chu)理(li)得到(dao)的感(gan)受(shou)態(tai)細胞，可(ke)用於(yu)DNA的化學(xue)轉化。使(shi)用pUC19質粒檢測(ce)，轉(zhuan)化效(xiao)率可達108，-70℃保存幾(ji)個(ge)月轉(zhuan)化效(xiao)率不發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)。

基(ji)因型(xing)：recAsupE44endA1 hsdR17gyrA96relA1 thiΔ(lac-proAB) F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]

特(te)點(dian)：壹種琥(hu)珀抑(yi)制(zhi)型(xing)F’重組(zu)缺(que)陷菌(jun)株。支持(chi)M13噬(shi)菌(jun)體載體的生(sheng)長，對(dui)轉(zhuan)染(ran)的DNA有(you)修(xiu)飾(shi)作用，但(dan)無限(xian)制(zhi)作用。該菌(jun)株中的F’帶有(you)lacZΔM15，後(hou)者使(shi)得與(yu)在(zai)λZAP中編(bian)碼的β-半乳(ru)糖苷(gan)酶氨基端(duan)進行(xing)α-互(hu)補(bu)，可(ke)用(yong)於(yu)藍(lan)白(bai)斑篩(shai)選(xuan)。

操(cao)作方法：（以下各步(bu)驟(zhou)均(jun)為(wei)無菌(jun)操作）

1、將感(gan)受(shou)態(tai)細胞置(zhi)於(yu)冰(bing)上融(rong)化，以下實(shi)驗以100ul感(gan)受(shou)態(tai)細胞為(wei)例(li)。

2、向感(gan)受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液中加入(ru)需(xu)轉化的目的DNA，註意目的DNA的體積(ji)不(bu)要(yao)超過(guo)感(gan)受(shou)態(tai)細胞懸(xuan)液體積(ji)的十分(fen)之(zhi)壹，輕輕旋轉離(li)心管(guan)以混(hun)勻內(nei)容物(wu)，冰浴放置(zhi)30分(fen)鐘(zhong)。

3、將離(li)心管(guan)置(zhi)於(yu)42℃水(shui)浴中放置(zhi)60-90秒(miao)，然(ran)後(hou)快速轉移到冰浴中放置(zhi)2-3分(fen)鐘(zhong)，註(zhu)意不(bu)要搖(yao)動(dong)離(li)心管(guan)。

4、向離(li)心管(guan)中加入(ru)500ul無(wu)菌(jun)無抗(kang)的SOC或LB培(pei)養(yang)基(ji)，37℃180rpm振(zhen)蕩培(pei)養(yang)1小(xiao)時(shi)。目的是使質(zhi)粒上相(xiang)關(guan)的抗(kang)性(xing)標(biao)記(ji)基(ji)因表達(da)，使(shi)菌(jun)體復(fu)蘇。

5、取(qu)適量(liang)已轉化的感(gan)受(shou)態(tai)細胞塗布含相應抗(kang)生(sheng)素(su)的SOC或LB平板，37℃倒(dao)置(zhi)培(pei)養(yang)12-16小(xiao)時(shi)。塗布用量(liang)可(ke)根據具(ju)體實(shi)驗來(lai)調(tiao)整(zheng)，如轉化的DNA總(zong)量(liang)較(jiao)多(duo)，可(ke)取100ul左右(you)轉化產物塗板；反之，如果轉化的DNA總(zong)量(liang)較(jiao)少(shao)，可(ke)取200-300ul的轉化產物塗板。過(guo)多(duo)菌(jun)液可(ke)以抑(yi)制(zhi)細菌(jun)生(sheng)長。如果預計的克隆(long)較少(shao)，可(ke)通過(guo)離(li)心後(hou)吸除(chu)部分(fen)培(pei)養(yang)液(ye)，懸(xuan)浮菌(jun)體後(hou)將其塗布於壹個平板中。塗布剩(sheng)余的菌(jun)液可(ke)4℃保存，如果次日(ri)的轉化菌(jun)落數(shu)過(guo)少(shao)可(ke)以將剩(sheng)下的菌(jun)液再(zai)塗布新的平板。

註(zhu)意事(shi)項：

1、收(shou)到(dao)感(gan)受(shou)態(tai)細胞應保存在(zai)-70℃，不可(ke)反復凍(dong)融(rong)，否(fou)則(ze)其轉(zhuan)化效(xiao)率將會(hui)降(jiang)低(di)。

2、實(shi)驗過(guo)程中應嚴(yan)格(ge)無菌(jun)操作，防(fang)止其它DNA的汙(wu)染(ran)，避免(mian)為(wei)以後(hou)的篩(shai)選(xuan)、鑒(jian)定帶來(lai)影響(xiang)。

3、轉(zhuan)化時(shi)，轉化效(xiao)率與外(wai)源DNA的濃度在(zai)壹定範圍內(nei)成正比，但(dan)當加入(ru)的外(wai)源DNA量(liang)過(guo)多(duo)或體積(ji)過(guo)大反而會(hui)降(jiang)低(di)轉(zhuan)化效(xiao)率。轉化時(shi)DNA體積(ji)要(yao)小(xiao)於(yu)感(gan)受(shou)態(tai)細胞體積(ji)的十分(fen)之(zhi)壹。

4、轉(zhuan)化率的計算：轉化率＝產生(sheng)菌(jun)落的總(zong)數(shu)/鋪(pu)板(ban)DNA總(zong)量(liang)

5、為(wei)防(fang)止轉化實(shi)驗不(bu)成功，可(ke)以保留部分(fen)連(lian)接產物，以重新(xin)轉化，將損失(shi)將到最di。

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