DH5α感受(shou)態細胞是(shi)采(cai)用大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)DH5α菌(jun)株經(jing)特殊工(gong)藝(yi)制(zhi)備得(de)到(dao)，可用(yong)於(yu)DNA的化(hua)學轉化(hua)。
DH5α感受(shou)態細胞 載體(ti)構建(jian)

NobleRyder C9988 DH5α感受(shou)態細胞E.coli DH5α Competent Cells

產(chan)品貨號：C9988

產(chan)品名(ming)稱：DH5α感受(shou)態細胞E.coli DH5α Competent Cells

英文名(ming)稱：E.coli DH5α Competent Cells

產(chan)品規格(ge)：20*100ul/10*100ul

DH5α感受(shou)態細胞 載體(ti)構建(jian)

產(chan)品簡介(jie)：

外觀(性狀(zhuang))：幹(gan)冰運(yun)輸(shu)，單加(jia)10kg幹(gan)冰費(fei)

儲存(cun)條(tiao)件(jian)：液氮(dan)保(bao)存(cun)至少(shao)壹(yi)年，-70℃保(bao)存(cun)至少(shao)6個(ge)月(yue)

具(ju)體(ti)產(chan)品的參數以(yi)收到(dao)產(chan)品說(shuo)明(ming)書的參數為準(zhun)

NobleRyder C9988 DH5α感受(shou)態細胞E.coli DH5α Competent Cells

DH5α感受(shou)態細胞是(shi)采(cai)用大(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)DH5α菌(jun)株經(jing)特殊工(gong)藝(yi)制(zhi)備得(de)到(dao)，可用(yong)於(yu)DNA的化(hua)學轉化(hua)。使(shi)用(yong)pUC19質粒(li)檢(jian)測(ce)，轉化(hua)效率(lv)可達108，-70℃保(bao)存(cun)3-5個(ge)月(yue)轉(zhuan)化(hua)效率(lv)不發生(sheng)改(gai)變(bian)。

基因型: supE44△lacU169（φ80lacZ△M15）hsdR17recA1 endA1 gyrA96 thi-1 relA1。

特點(dian): 壹(yi)種用於(yu)鋪(pu)制(zhi)與培(pei)養(yang)質粒(li)平板(ban)和粘粒(li)平板(ban)的重(zhong)組(zu)缺陷(xian)的抑(yi)制(zhi)型菌(jun)株。其(qi)φ80lacZ△M15 基因的產(chan)物可與pUC載體編碼(ma)的 β-半乳糖苷酶(mei)氨基端實現(xian)β互(hu)補(bu)，可用(yong)於(yu)藍(lan)白斑(ban)篩選。

操作(zuo)方(fang)法(fa)：（以(yi)下操作(zuo)均(jun)按(an)無菌(jun)條(tiao)件(jian)的標(biao)準進(jin)行）

1、將(jiang)感(gan)受(shou)態細胞置於(yu)冰上(shang)融(rong)化(hua)，以下實驗(yan)以(yi)100ul感(gan)受(shou)態細胞為例(li)。

2、向(xiang)感(gan)受(shou)態細胞懸液中(zhong)加(jia)入(ru)需(xu)轉化(hua)的目(mu)的DNA，註(zhu)意(yi)目的DNA的體(ti)積(ji)不要超過感受(shou)態細胞懸液體(ti)積(ji)的十(shi)分之(zhi)壹(yi)，輕輕旋(xuan)轉離(li)心管以混勻(yun)內(nei)容(rong)物，冰浴(yu)放(fang)置30分鐘。

3、將(jiang)離(li)心管置於(yu)42℃水浴中(zhong)60-90秒，然後快速(su)轉移(yi)到(dao)冰浴(yu)中(zhong)放(fang)置2-3分鐘，註意(yi)不(bu)要搖動(dong)離(li)心管。

4、向(xiang)離(li)心管中加(jia)入(ru)500ul無菌(jun)無抗的SOC或(huo)LB培(pei)養(yang)基，37℃180rpm振蕩(dang)培(pei)養(yang)1小(xiao)時(shi)。目的是(shi)使(shi)質粒(li)上相關的抗性標(biao)記基因表達，使(shi)菌(jun)體復(fu)蘇(su)。

5、取適(shi)量已(yi)轉化(hua)的感(gan)受(shou)態細胞塗(tu)布(bu)含(han)相(xiang)應(ying)抗生(sheng)素(su)的SOC或(huo)LB平(ping)板(ban)，37℃倒(dao)置培(pei)養(yang)12-16小(xiao)時(shi)。塗(tu)布(bu)用(yong)量可(ke)根據具(ju)體(ti)實(shi)驗(yan)來(lai)調整(zheng)，如轉化(hua)的DNA總(zong)量較(jiao)多，可取(qu)100ul左(zuo)右(you)的轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)板(ban)；反之(zhi)，如(ru)轉化(hua)的DNA總(zong)量較(jiao)少(shao)，可(ke)取(qu)200-300ul的轉(zhuan)化(hua)產(chan)物塗(tu)板(ban)。過多菌(jun)液可(ke)以抑(yi)制(zhi)細菌(jun)生(sheng)長。如(ru)果(guo)預(yu)計的克(ke)隆較少(shao)，可(ke)通(tong)過離(li)心後吸(xi)除(chu)部(bu)分(fen)培(pei)養(yang)液(ye)，懸浮菌(jun)體後將(jiang)其(qi)塗(tu)布(bu)於(yu)壹(yi)個(ge)平(ping)板(ban)中。塗(tu)布(bu)剩(sheng)余的菌(jun)液可(ke)4℃保(bao)存(cun)，如果(guo)次日(ri)的轉(zhuan)化(hua)菌(jun)落數過少(shao)，可(ke)以(yi)將(jiang)剩(sheng)下的菌(jun)液再塗(tu)布(bu)新(xin)的平(ping)板(ban)。

註意事項：

1、感受(shou)態細胞應(ying)保(bao)存(cun)在-70℃，不可(ke)反(fan)復(fu)凍融，否(fou)則其轉化(hua)效率(lv)將(jiang)會降(jiang)低(di)。

2、實驗(yan)過程中(zhong)應(ying)嚴格(ge)無菌(jun)操作(zuo)，防止其它DNA或雜菌(jun)的汙(wu)染，避免(mian)為以(yi)後的篩(shai)選、鑒定帶(dai)來(lai)影響。

3、轉化(hua)時，轉(zhuan)化(hua)效率(lv)與外源DNA的濃(nong)度(du)在壹(yi)定範圍內成(cheng)正(zheng)比(bi)，但(dan)當加(jia)入(ru)的外源DNA量過多或(huo)體積(ji)過大反(fan)而(er)會降(jiang)低(di)轉(zhuan)化(hua)效率(lv)。轉化(hua)時DNA體(ti)積(ji)要小於(yu)感(gan)受(shou)態細胞體積(ji)的十(shi)分之(zhi)壹(yi)。

4、轉化(hua)率(lv)的計算(suan)：轉(zhuan)化(hua)率(lv)＝產(chan)生(sheng)菌(jun)落的總(zong)數/鋪(pu)板(ban)DNA總量。

5、為防止轉化(hua)實驗(yan)不(bu)成(cheng)功，可以保(bao)留部(bu)分(fen)連接產(chan)物，以重(zhong)新(xin)轉化(hua)，將(jiang)損(sun)失(shi)降(jiang)到(dao)最(zui)di。

DH5α感受(shou)態細胞 載體(ti)構建(jian) 

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C9988 DH5α感受(shou)態細胞E.coli DH5α Competent Cells  20*100ul/10*100ul