NobleRyder C9258 T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao)為大腸(chang)桿菌(jun)BL21增強(qiang)型(xing)菌株，為Lon和OmpT蛋白(bai)酶缺(que)陷(xian)型(xing)，主要(yao)適(shi)用於(yu)含有(you)T7啟動(dong)子(zi)的原核表(biao)達(da)載(zai)體(ti)（如pET等(deng)）的(de)蛋白(bai)表(biao)達(da)，同(tong)樣適用於(yu)需要(yao)大(da)腸(chang)桿菌(jun)RNA聚(ju)合(he)酶來(lai)轉(zhuan)錄(lu)RNA的非T7啟(qi)動(dong)子(zi)的表(biao)達(da)載(zai)體(ti)（如pGEX等(deng)）。
T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao) 載(zai)體(ti)構建(jian)

NobleRyder C9258 T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao)

產(chan)品貨(huo)號：C9258

產(chan)品名(ming)稱：T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao)

產(chan)品規格：10*100ul/20*100ul

T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao) 載(zai)體(ti)構建(jian)

產(chan)品簡介(jie)：

儲存條件：-70℃

具體(ti)產(chan)品的參(can)數以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品說明(ming)書的參(can)數為準(zhun)

NobleRyder C9258 T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao)為大腸(chang)桿菌(jun)BL21增強(qiang)型(xing)菌株，為Lon和OmpT蛋白(bai)酶缺(que)陷(xian)型(xing)，主要(yao)適(shi)用於(yu)含有(you)T7啟動(dong)子(zi)的原核表(biao)達(da)載(zai)體(ti)（如pET等(deng)）的(de)蛋白(bai)表(biao)達(da)，同(tong)樣適用於(yu)需要(yao)大(da)腸(chang)桿菌(jun)RNA聚(ju)合(he)酶來(lai)轉(zhuan)錄(lu)RNA的非T7啟(qi)動(dong)子(zi)的表(biao)達(da)載(zai)體(ti)（如pGEX等(deng)）。該(gai)菌(jun)株區(qu)別於BL21(DE3)菌(jun)株的(de)優(you)勢(shi)在(zai)於T7RNA聚(ju)合(he)酶基(ji)因整(zheng)合(he)在細(xi)菌(jun)染(ran)色(se)體(ti)上的(de)lac操縱(zong)子(zi)區(qu)域，基因組(zu)中無λ前噬菌(jun)體(ti)序列，並具有(you)抗T1噬(shi)菌(jun)體感染(ran)等特(te)點。T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao)經(jing)特殊(shu)工(gong)藝制作，pUC19質(zhi)粒檢測轉化效率大(da)於(yu)108cfu/μg。

基因型(xing):fhuA2lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 (mcrCmrr)114::IS10

菌株抗(kang)性(xing)：對(dui)氨芐(bian)qing黴(mei)素，卡na黴(mei)素，壯guan黴(mei)素，氯黴(mei)su，鏈黴(mei)su和四(si)環su敏感。

操作方法(fa)：（以(yi)下操作均(jun)按無菌(jun)條件的標(biao)準(zhun)進(jin)行(xing)）

1. 將感(gan)受態細胞(bao)置(zhi)於冰(bing)水(shui)浴(yu)中化凍。待細(xi)胞(bao)剛化凍後，加(jia)入(ru)質粒DNA或5-10μL連接產(chan)物(wu)到(dao)細(xi)胞(bao)中，用手指撥da管(guan)底(di)，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻；

2. 冰水(shui)浴中放置(zhi)30分(fen)鐘(zhong)，不(bu)要晃(huang)動(dong)；

3. 42℃熱(re)擊60秒(miao)鐘，不(bu)要晃(huang)動(dong)；

4. 冰水(shui)浴中放置(zhi)2分(fen)鐘(zhong)，不(bu)要晃(huang)動(dong)；

5. 加入(ru)500μL無菌(jun)的SOC或(huo)LB培養(yang)基(ji)；

6. 置(zhi)於37℃搖(yao)床中，150-200rpm 震蕩復(fu)蘇培養(yang)60分(fen)鐘(zhong)；

7. 取(qu)50-100μL 菌(jun)液塗布在含(han)有(you)抗性(xing)的 LB 平(ping)板(ban)上。待(dai)液體吸(xi)幹(gan)後(hou)，倒(dao)置(zhi)平板(ban)，37℃培養(yang) 12-16 小時。

（平板(ban)劃(hua)線(xian)分(fen)離(li)法(fa)：復(fu)蘇培養(yang)結(jie)束後，12000rpm 離(li)心30秒鐘(zhong)，棄掉上清(qing)，留100μL左右(you)的液體，用200μL 吸(xi)頭(tou)輕(qing)輕(qing)吹(chui)打散菌(jun)塊(kuai)，取(qu)10μL重(zhong)懸(xuan)的(de)菌(jun)液分(fen)多(duo)點滴(di)在平(ping)板(ban)上，傾(qing)斜(xie)吸(xi)頭(tou)，用吸(xi)頭(tou)頭部的側面將(jiang)滴(di)在平(ping)板(ban)上的(de)液體來回劃(hua)線(xian)。這(zhe)個方法(fa)可以(yi)獲得更多(duo)更大(da)的(de)單(dan)克(ke)隆菌落(luo)。）

（質粒快速轉(zhuan)化步驟(zhou)：將(jiang)步驟(zhou)2的(de)時間縮(suo)短(duan)到(dao)5分(fen)鐘(zhong)，對(dui)於氨芐(bian)青黴(mei)su抗性(xing)的質(zhi)粒，步驟(zhou)4完(wan)成後(hou)，可直(zhi)接塗布或劃(hua)線(xian)於含氨芐(bian)青黴(mei)su抗性(xing)的LB平(ping)板(ban)上。其(qi)它(ta)抗(kang)性(xing)的質(zhi)粒仍需60分(fen)鐘(zhong)的復(fu)蘇培養(yang)。）

註意(yi)事(shi)項(xiang)：

1．感受態細胞(bao)應(ying)保(bao)存在(zai)-70℃，不(bu)可反復(fu)凍融，否則其(qi)轉(zhuan)化效率將(jiang)會(hui)降低(di)。

2．實(shi)驗(yan)過程(cheng)中應(ying)嚴格(ge)無菌操作，防(fang)止其(qi)它(ta)DNA或(huo)雜(za)菌(jun)的汙(wu)染(ran)，避(bi)免(mian)為以(yi)後的(de)篩選(xuan)、鑒(jian)定帶(dai)來(lai)影響(xiang)。

3．轉化時，轉化效率與(yu)外(wai)源DNA的濃度(du)在(zai)壹定範圍內(nei)成正(zheng)比(bi)，但(dan)當加(jia)入(ru)的外(wai)源DNA量(liang)過多(duo)或(huo)體(ti)積過(guo)大反而會(hui)降低(di)轉(zhuan)化效率。轉(zhuan)化時DNA體積要(yao)小於(yu)感受態細胞(bao)體積的(de)十分(fen)之(zhi)壹。

4．轉化率的(de)計(ji)算：轉(zhuan)化率＝產(chan)生菌(jun)落(luo)的總數/鋪板(ban)DNA總量(liang)。

T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao) 載(zai)體(ti)構建(jian) 

產(chan)品訂購(gou)信息：

C9258 T7表(biao)達(da)感(gan)受態細胞(bao)  10*100ul/20*100ul