是采用大腸(chang)桿菌(jun)Rosetta(DE3)菌(jun)株經特殊工(gong)藝(yi)處(chu)理(li)得到的(de)感(gan)受態細(xi)胞，可(ke)用(yong)於(yu)DNA 的(de)化(hua)學(xue)轉(zhuan)化(hua)。使用(yong)pUC19質粒檢(jian)測(ce)
Rosetta (DE3) 感(gan)受態細(xi)胞 載(zai)體(ti)構(gou)建

NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感(gan)受態細(xi)胞Rosetta (DE3)

產(chan)品(pin)貨(huo)號：C9208

產(chan)品(pin)名稱(cheng)：Rosetta (DE3) 感(gan)受態細(xi)胞Rosetta (DE3)

英文名稱(cheng)：Rosetta (DE3)

產(chan)品(pin)規(gui)格：10*100ul /20*100ul

Rosetta (DE3) 感(gan)受態細(xi)胞 載(zai)體(ti)構(gou)建

產(chan)品(pin)簡(jian)介：

外(wai)觀(性(xing)狀(zhuang))：幹(gan)冰運輸，需加幹(gan)冰費(fei)。

儲(chu)存(cun)條件：液(ye)氮保存(cun)至(zhi)少(shao)壹年(nian)，-70℃保存(cun)至(zhi)少(shao)6個月

具(ju)體產(chan)品(pin)的(de)參(can)數以(yi)收(shou)到產(chan)品(pin)說(shuo)明書(shu)的(de)參(can)數為(wei)準

NobleRyder C9208 Rosetta (DE3) 感(gan)受態細(xi)胞Rosetta (DE3)是采用大腸(chang)桿菌(jun)Rosetta(DE3)菌(jun)株經特殊工(gong)藝(yi)處(chu)理(li)得到的(de)感(gan)受態細(xi)胞，可(ke)用(yong)於(yu)DNA 的(de)化(hua)學(xue)轉(zhuan)化(hua)。使用(yong)pUC19質粒檢(jian)測(ce)，轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)可(ke)達(da)107cfu/µg，-70℃保存(cun)幾個月轉化(hua)效(xiao)率(lv)不發生(sheng)改(gai)變。

基因型(xing): F-ompThsdSB(rB- mB-)galdcmlacY1(DE3)pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL)(Camr)

特(te)點:該菌(jun)株是攜(xie)帶氯(lv)mei素抗(kang)性(xing)質(zhi)粒BL21的(de)衍(yan)生(sheng)菌(jun)，補充大腸(chang)桿菌(jun)缺(que)乏(fa)的(de)6種稀有密(mi)碼子(AUA,AGG,AGA,CUA,CCC, GGA)對應的(de)tRNA，提(ti)高(gao)外(wai)源(yuan)基因，尤(you)其是真核基因在(zai)原(yuan)核系統(tong)中的(de)表達(da)水平。

操(cao)作方法(fa)：（以(yi)下(xia)操(cao)作均按無(wu)菌(jun)條件的(de)標(biao)準進行(xing)）

1、將(jiang)感受態細(xi)胞置於(yu)冰上(shang)融(rong)化(hua)，以下(xia)實(shi)驗(yan)以100ul感(gan)受態細(xi)胞為(wei)例(li)。

2、向(xiang)感(gan)受態細(xi)胞懸(xuan)液(ye)中加(jia)入(ru)需轉化(hua)的(de)目的(de)DNA，註(zhu)意(yi)目的(de)DNA的(de)體(ti)積(ji)不(bu)要超(chao)過(guo)感(gan)受態細(xi)胞懸(xuan)液(ye)體積(ji)的(de)十(shi)分之壹，輕輕旋(xuan)轉離(li)心管以(yi)混勻(yun)內(nei)容物，冰浴(yu)放置30分鐘。

3、將(jiang)離心管置於(yu)42℃水浴(yu)中60-90秒(miao)，然(ran)後快(kuai)速(su)轉移(yi)到冰浴(yu)中放(fang)置2-3分鐘註意(yi)不要搖動離(li)心管。

4、向(xiang)離(li)心管中(zhong)加(jia)入500ul無(wu)菌(jun)無(wu)抗(kang)的(de)SOC或(huo)LB培(pei)養(yang)基，37℃180rpm振蕩培(pei)養(yang)1小時(shi)。目的(de)是使質(zhi)粒上相(xiang)關的(de)抗(kang)性(xing)標(biao)記(ji)基因表達(da)，使菌(jun)體復蘇(su)。

5、取(qu)適量(liang)已轉(zhuan)化(hua)的(de)感(gan)受態細(xi)胞塗(tu)布(bu)含相(xiang)應抗生(sheng)素(su)的(de)SOC或(huo)LB平板(ban)，37℃倒置培(pei)養(yang)12-16小時(shi)。塗(tu)布(bu)用量(liang)可(ke)根據(ju)具(ju)體實(shi)驗(yan)來調整，如(ru)轉(zhuan)化(hua)的(de)DNA總(zong)量(liang)較多，可(ke)取(qu)100ul左右的(de)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物(wu)塗(tu)板(ban)；反(fan)之，如轉化(hua)的(de)DNA總(zong)量(liang)較少(shao)，可(ke)取(qu)200-300ul的(de)轉(zhuan)化(hua)產(chan)物(wu)塗(tu)板(ban)。過(guo)多菌(jun)液(ye)可(ke)以(yi)抑制細(xi)菌(jun)生(sheng)長(chang)。如果(guo)預(yu)計(ji)的(de)克隆較(jiao)少(shao)，可(ke)通(tong)過(guo)離(li)心後吸(xi)除部(bu)分培(pei)養(yang)液(ye)，懸浮菌(jun)體後將(jiang)其塗(tu)布(bu)於(yu)壹個平板(ban)中。塗(tu)布(bu)剩(sheng)余的(de)菌(jun)液(ye)可(ke)4℃保存(cun)，如(ru)果次(ci)日的(de)轉(zhuan)化(hua)菌(jun)落(luo)數過(guo)少(shao)，可(ke)以(yi)將(jiang)剩(sheng)下(xia)的(de)菌(jun)液(ye)再塗(tu)布(bu)新(xin)的(de)平板(ban)。

註(zhu)意事項(xiang)：

1、感(gan)受態細(xi)胞應保存(cun)在(zai)-70℃，不可(ke)反(fan)復凍(dong)融，否(fou)則其(qi)轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)將(jiang)會(hui)降(jiang)低(di)。

2、實(shi)驗(yan)過(guo)程(cheng)中(zhong)應嚴格無(wu)菌(jun)操(cao)作，防(fang)止(zhi)其它(ta)DNA或(huo)雜菌(jun)的(de)汙(wu)染，避免(mian)為(wei)以(yi)後的(de)篩選(xuan)、鑒(jian)定帶來影響。

3、轉(zhuan)化(hua)時(shi)，轉(zhuan)化(hua)效(xiao)率(lv)與外源(yuan)DNA的(de)濃度(du)在(zai)壹定範圍內(nei)成(cheng)正(zheng)比(bi)，但當加入的(de)外(wai)源(yuan)DNA量(liang)過(guo)多或體(ti)積(ji)過(guo)大(da)反(fan)而會(hui)

降(jiang)低(di)轉化(hua)效(xiao)率(lv)。轉化(hua)時(shi)DNA體(ti)積要小於(yu)感受態細(xi)胞體(ti)積(ji)的(de)十(shi)分之壹。

4、轉(zhuan)化(hua)率的(de)計(ji)算(suan)：轉(zhuan)化(hua)率＝產(chan)生(sheng)菌(jun)落(luo)的(de)總(zong)數/鋪板DNA總(zong)量(liang)。

5、為(wei)防(fang)止(zhi)轉化(hua)實(shi)驗(yan)不成(cheng)功(gong)，可(ke)以(yi)保留部分(fen)連接產(chan)物(wu)，以(yi)重新(xin)轉化(hua)，將(jiang)損失(shi)降(jiang)到最(zui)di。

Rosetta (DE3) 感(gan)受態細(xi)胞 載(zai)體(ti)構(gou)建

產(chan)品(pin)訂(ding)購(gou)信(xin)息：

C9208  Rosetta (DE3) 感(gan)受態細(xi)胞Rosetta (DE3) 10*100ul /20*100ul