是模擬鏈(lian)黴(mei)親和(he)素-生wu素系統(tong)的新型(xing)蛋(dan)白純(chun)化系統(tong)，Strep-Tactin 對(dui) Strep-Tag II 的親和(he)能(neng)力與鏈(lian)黴(mei)親和(he)素相比(bi)，至(zhi)少(shao)強(qiang) 10 倍以上，且(qie)分(fen)離純化條件(jian)溫和(he)，在生(sheng)理條件(jian)下(xia)即(ji)可(ke)實(shi)現蛋(dan)白的分(fen)離純化
Strep-tag II 蛋(dan)白純(chun)化磁珠-常備現貨(huo)

NobleRyder M0128 Strep-tag II 蛋(dan)白純(chun)化磁珠 Magrose Strep-Tactin

Strep-tag II 蛋(dan)白純(chun)化磁珠-常備現貨(huo)

產品貨(huo)號：M0128

產品名(ming)稱(cheng)：Strep-tag II 蛋(dan)白純(chun)化磁珠 Magrose Strep-Tactin

產品規(gui)格(ge)：5mL

產品簡(jian)介(jie)：

具體(ti)產品的參(can)數以收(shou)到產品說(shuo)明(ming)書的參(can)數為準

NobleRyder M0128 Strep-tag II 蛋(dan)白純(chun)化磁珠 Magrose Strep-Tactin是模擬鏈(lian)黴(mei)親和(he)素-生wu素系統(tong)的新型(xing)蛋(dan)白純(chun)化系統(tong)，Strep-Tactin 對(dui) Strep-Tag II 的親和(he)能(neng)力與鏈(lian)黴(mei)親和(he)素相比(bi)，至(zhi)少(shao)強(qiang) 10 倍以上，且(qie)分(fen)離純化條件(jian)溫和(he)，在生(sheng)理條件(jian)下(xia)即(ji)可(ke)實(shi)現蛋(dan)白的分(fen)離純化；此(ci)外(wai)，與其(qi)他(ta) tag 相比(bi)，Strep-TagII 為(wei) 8 個(ge)氨ji酸(suan)的小(xiao)標(biao)簽(qian)（WSHPQFEK），由(you)於標(biao)簽(qian)小(xiao)，僅為1kDa左右(you)，不影響(xiang)融合(he)後(hou)蛋(dan)白質的結(jie)構(gou)和(he)功能(neng)。這(zhe)些溫和(he)的純化參(can)數能(neng)保存(cun)蛋(dan)白質的生物(wu)活性， 並僅經(jing)壹(yi)步(bu)提取(qu)即可產出(chu)超(chao)過 99%的純度(du)。

BeadsMagroseStrep-Tactin 磁(ci)珠(zhu)采用(yong)特殊(shu)的蛋(dan)白偶(ou)聯(lian)工藝，將 Strep-Tactin 蛋(dan)白共(gong)價偶(ou)聯(lian)到超順(shun)磁(ci)性(xing)磁(ci)珠(zhu)表面，制備(bei)了壹(yi)種專為(wei)高效、快(kuai)速分(fen)離純化Strep-tagII 蛋(dan)白的壹種新型(xing)功能(neng)化材料(liao)，實(shi)現並(bing)搭(da)建了提(ti)取(qu)速度(du)、提(ti)取量(liang)及純度(du)兼(jian)得(de)的蛋(dan)白純(chun)化平(ping)臺(tai)。

適(shi)用(yong)範(fan)圍：

可(ke)用(yong)於從(cong)任(ren)何(he)表達系統(tong)，包(bao)括桿(gan)狀(zhuang)病毒、哺乳動(dong)物細(xi)胞(bao)、酵(jiao)母(mu)和(he)細(xi)菌中(zhong)含有(you) Strep-TagII 標(biao)簽(qian)蛋(dan)白的分(fen)離純化。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

目(mu)標(biao)蛋(dan)白與(yu)磁珠的結(jie)合(he)性能(neng)將直接影響(xiang)目(mu)標(biao)蛋(dan)白的純化效率(lv)，各種緩(huan)沖液(ye)配(pei)制也將在壹(yi)定程(cheng)度上影(ying)響(xiang)目(mu)標(biao)蛋(dan)白的回收(shou)率(lv)和(he)純度(du)。以下(xia)提(ti)供(gong)壹(yi)個(ge)較(jiao)為(wei)廣(guang)泛應用(yong)的Strep-TagII 蛋(dan)白的純化流程(cheng)，用(yong)戶可參(can)考該操作(zuo)流程(cheng)，或(huo)者(zhe)根(gen)據自(zi)己(ji)蛋(dan)白的特性(xing)自(zi)行(xing)設計和(he)優化蛋(dan)白純(chun)化流程(cheng)。

1、緩(huan)沖溶液配(pei)制

Binding/Washing Buffer ：10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH：8.0

Elution Buffer：2.5 mM desthiobiotin in Binding Buffer。

2、樣(yang)品處(chu)理(li)

(1) 大腸(chang)桿(gan)菌、酵母(mu)等細(xi)胞(bao)內(nei)表達蛋(dan)白：表達細(xi)胞(bao)用(yong)適量(liang) BindingBuffer 稀(xi)釋，加入(ru)蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)（如終(zhong)濃(nong)度為 1mM 的 PMSF）；冰浴超(chao)聲(sheng)裂(lie)解(jie)細(xi)胞(bao)，即(ji)為(wei)粗(cu)蛋(dan)白樣(yang)品。如(ru)果(guo)樣品過(guo)於粘(zhan)稠(chou)，可根(gen)據需要(yao)在(zai)粗(cu)樣(yang)品中(zhong)加入(ru)適量核(he)酸(suan)酶(mei)，在(zai)冰(bing)上(shang)放置 30min，以降解(jie)核(he)酸(suan)。另(ling)外(wai)，如果目(mu)標(biao)蛋(dan)白含量(liang)較(jiao)低(di)，建議(yi)將粗(cu)蛋(dan)白樣(yang)品進行離(li)心操作(zuo)。

(2) 胞(bao)外(wai)表達蛋(dan)白：取(qu)胞(bao)外(wai)表達上(shang)清(qing)，用(yong)等量(liang)BindingBuffer 稀(xi)釋平(ping)衡(heng)，即為粗(cu)蛋(dan)白樣(yang)品。

(3) 動(dong)物(wu)細(xi)胞(bao)胞(bao)內(nei)表達蛋(dan)白：取(qu)適量動物細(xi)胞(bao)，用(yong)適量(liang) PBS 洗滌(di) 1 次，棄上清(qing)；用(yong)適量(liang)含 1%（v/v） Triton X-100 或(huo) 1%（v/v）NP-40 的 Binding Buffer 重懸；加入蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)（如終(zhong)濃(nong)度為 1mM 的PMSF）；置於冰(bing)上(shang) 10min，即為(wei)粗(cu)蛋(dan)白樣(yang)品。

3、磁(ci)珠(zhu)預處(chu)理(li)

壹(yi)般(ban)情(qing)況下(xia)，磁(ci)珠(zhu)的使(shi)用(yong)量是由用(yong)戶根(gen)據目(mu)標(biao)蛋(dan)白產量(liang)和(he)磁珠(zhu)載量信(xin)息(xi)計算獲得(de)。例如(ru)：采用(yong)大腸(chang)桿(gan)菌表達某(mou)目(mu)標(biao)蛋(dan)白，250mL 發(fa)酵液(ye)收(shou)獲 1g 濕重的菌體(ti)，通過預實驗(yan)估算(suan)其(qi)目(mu)標(biao)蛋(dan)白產量(liang)為(wei)~7mg，用(yong)戶需要(yao)取(qu) 10mL10%的磁珠(zhu)懸(xuan)液(ye)用(yong)於目(mu)標(biao)蛋(dan)白的純化。以下(xia)即(ji)以(yi)此(ci)為(wei)例進行詳細(xi)說(shuo)明(ming)：

(1) 將磁珠(zhu)產品置(zhi)於漩(xuan)渦(wo)混(hun)勻(yun)器上充分(fen)混(hun)勻(yun)，用(yong)移液(ye)器(qi)取(qu) 10mL 磁珠(zhu)懸液(ye)於離(li)心管中(zhong)；

(2) 將離心管置於磁(ci)性(xing)分(fen)離器上(shang)，待(dai)溶液變(bian)澄(cheng)清(qing)後(hou)，移去上(shang)清液(ye)；

(3) 加(jia)入(ru) 5~10mLBindingBuffer/Washing Buffer 到上述裝(zhuang)有(you)磁(ci)珠(zhu)的離心管中(zhong)，蓋(gai)緊蓋(gai)子，漩渦(wo)振蕩(dang)15 s，使(shi)磁(ci)珠(zhu)重新懸浮(fu)。將離心管置於磁(ci)性(xing)分(fen)離器上(shang)，磁(ci)性(xing)分(fen)離*，移去上(shang)清液(ye)，重復(fu)洗滌(di) 2 次。

*註(zhu)：在(zai)磁性分(fen)離過程(cheng)中(zhong)，為了(le)減(jian)少磁(ci)珠在使(shi)用(yong)過程(cheng)中(zhong)的損耗，待溶液變(bian)澄(cheng)清(qing)後(hou)，蓋(gai)緊離(li)心管蓋(gai)子，保持(chi)離(li)心管仍在(zai)磁(ci)性分(fen)離器上(shang)，手持(chi)磁(ci)性(xing)分(fen)離器與(yu)離(li)心管上下(xia)翻(fan)轉數次，使(shi)澄(cheng)清(qing)的溶液涮(shuan)洗離(li)心管蓋(gai)上殘(can)留的磁珠(zhu)，靜置(zhi)片刻，使(shi)溶液重新變澄清(qing)；以(yi)下(xia)同(tong)。

4、目(mu)標(biao)蛋(dan)白與(yu)磁珠結(jie)合(he)

(1) 用(yong) 10mLBinding Buffer 重懸 1g 濕重的菌體(ti)，進行破(po)碎和(he)裂解(jie)後(hou)，即為(wei)粗(cu)蛋(dan)白樣(yang)品；

(2) 將粗(cu)蛋(dan)白樣(yang)品轉移(yi)到裝有(you)已(yi)預處(chu)理(li)磁珠的離心管中(zhong)，蓋(gai)緊離(li)心管蓋(gai)；

(3) 將離心管置於漩(xuan)渦(wo)混(hun)勻(yun)器振蕩(dang) 15s，然(ran)後(hou)將其(qi)置於垂(chui)直混(hun)合(he)儀(yi)上(shang)，室(shi)溫垂直混(hun)勻(yun) 30min（如果需要(yao)，可(ke)在(zai) 2~8℃的低(di)溫(wen)環(huan)境(jing)下(xia)旋(xuan)轉混(hun)合(he)約 1h，防(fang)止(zhi)目(mu)標(biao)蛋(dan)白降(jiang)解(jie)）；

(4) 將離心管置於磁(ci)性(xing)分(fen)離器上(shang)進行磁(ci)性分(fen)離，移出(chu)上(shang)清(qing)液到新的離心管中(zhong)以備(bei)後(hou)續(xu)檢(jian)測。從磁(ci)性(xing)分(fen)離器上(shang)取(qu)下(xia)離(li)心管進行下(xia)壹(yi)步(bu)洗滌(di)步(bu)驟(zhou)。

5、磁(ci)珠(zhu)洗滌(di)

(1) 將步(bu)驟(zhou) 4 的磁珠(zhu)中(zhong)加入(ru) 5~10mLWashingBuffer，漩渦混(hun)合(he) 2min，磁性(xing)分(fen)離，移出(chu)清(qing)洗液(ye)到新的離心管中(zhong)，以備(bei)取樣檢(jian)測；

(2) 繼(ji)續(xu)將上述磁(ci)珠(zhu)中(zhong)加入(ru) 5~10mLWashingBuffer，漩渦混(hun)合(he) 2min，使(shi)磁(ci)珠(zhu)重新懸浮(fu)，將磁珠(zhu)懸液(ye)轉移(yi)至(zhi)新的離心管，避免(mian)原(yuan)離心管壁上非(fei)特異(yi)性(xing)吸附(fu)蛋(dan)白汙(wu)染(ran)目(mu)標(biao)蛋(dan)白；磁(ci)性分(fen)離，移出(chu)上(shang)清(qing)液到收(shou)集(ji)管，以備(bei)取(qu)樣檢(jian)測；

6、目(mu)標(biao)蛋(dan)白洗脫

(1) 加(jia)入(ru) 2~5mLElution Buffer（用(yong)戶可根(gen)據需要(yao)改變(bian)洗脫體(ti)積調整目(mu)標(biao)蛋(dan)白濃(nong)度）於離(li)心管中(zhong)，蓋(gai)緊離(li)心管蓋(gai)，然(ran)後(hou)將離心管置於垂(chui)直混(hun)合(he)儀(yi)上(shang)，室(shi)溫垂直混(hun)合(he)洗脫 10min；磁性分(fen)離，收(shou)集(ji)洗脫液到新的離心管中(zhong)，即為(wei)純化的目(mu)標(biao)蛋(dan)白樣(yang)品；

(2) 如(ru)果(guo)需要，可(ke)以重復(fu)上(shang)述步(bu)驟(zhou) 1 次，收(shou)集(ji)樣品到新的離心管中(zhong)，以檢(jian)測目(mu)標(biao)蛋(dan)白是否洗脫wan全。

7、磁(ci)珠(zhu)再生和(he)保存(cun)

(1) NaOH 再(zai)生(sheng)：洗脫目(mu)的蛋(dan)白後(hou)的磁珠(zhu)按照以下(xia)順(shun)序進行洗滌(di)： 5~10mL 純化水洗滌(di) 3 次、5~10 mL 0.5M NaOH 洗滌(di) 3 次、5~10mL 純(chun)化水洗滌(di)至中(zhong)性，最(zui)後(hou)加入(ru) 10mL 保(bao)存(cun)液，將磁珠(zhu)放置(zhi)2~8℃環(huan)境(jing)保存(cun)。

(2) HABA 再(zai)生(sheng)：用(yong)脫硫(liu)生wu素洗脫目(mu)標(biao)蛋(dan)白的磁珠(zhu)還(hai)可(ke)以用(yong) HABA 緩(huan)沖液(ye)再(zai)生(sheng)，加入 5~10mL1mMHABA 洗滌(di)磁珠(zhu) 5 次，接(jie)著用(yong) BindingBuffer 洗滌(di)磁珠(zhu)至磁(ci)珠(zhu)本(ben)身(shen)顏(yan)色(se)，每(mei)次(ci)洗滌(di) 5 min， 最後(hou)加入(ru) 10mL 保(bao)存(cun)液，將磁珠(zhu)放置(zhi) 2~8°C 環(huan)境(jing)保存(cun)。

蛋(dan)白純(chun)化流程(cheng)的優化

以(yi)上(shang)操作(zuo)流程(cheng)適用(yong)於大部分(fen) Strep-TagII 標(biao)簽(qian)蛋(dan)白的純化，根(gen)據目(mu)標(biao)蛋(dan)白與(yu) Strep-Tactin 蛋(dan)白純(chun)化磁珠的結(jie)合(he)性能(neng)不同(tong)，用(yong)戶可以(yi)從(cong)以下(xia)幾(ji)個(ge)方(fang)面對(dui)純化流程(cheng)進行優(you)化，以提高(gao)目(mu)標(biao)蛋(dan)白的回收(shou)率(lv)和(he)純度(du)。

提(ti)高(gao)目(mu)標(biao)蛋(dan)白回(hui)收(shou)率(lv)的參(can)考方(fang)法(fa)：

(1) 延(yan)長(chang)蛋(dan)白溶液與(yu)磁(ci)珠(zhu)孵育的時間；

(2) 添加(jia)合(he)適的蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)，防(fang)止(zhi)目(mu)標(biao)蛋(dan)白降(jiang)解(jie)；

(3) 增(zeng)加(jia)磁珠用(yong)量；

(4) 延(yan)長(chang)洗脫目(mu)標(biao)蛋(dan)白的時間或(huo)增加(jia)洗脫次數；

提(ti)高(gao)目(mu)標(biao)蛋(dan)白純(chun)度的參(can)考方(fang)法(fa)：

(1) 在(zai)純(chun)化過程(cheng)中(zhong)添加(jia)合(he)適的蛋(dan)白酶(mei)抑(yi)制劑(ji)，防(fang)止(zhi)目(mu)標(biao)蛋(dan)白降(jiang)解(jie)；

(2) 延(yan)長(chang)洗滌(di)的時間，增(zeng)加洗滌(di)次數；

註(zhu)意(yi)事項

(1) 首(shou)ci使(shi)用(yong)本產品前(qian)，請(qing)務(wu)必(bi)詳細(xi)閱讀(du)本用(yong)戶手冊；

(2) 磁(ci)珠(zhu)使(shi)用(yong)和(he)保存(cun)過程(cheng)中(zhong)應避(bi)免冷凍、幹(gan)燥(zao)和(he)高速離(li)心等操(cao)作(zuo)；

(3) 在(zai)使(shi)用(yong)本產品前(qian)，請(qing)務(wu)必(bi)充(chong)分(fen)振蕩(dang)使(shi)磁(ci)珠(zhu)保(bao)持(chi)均(jun)勻(yun)的懸浮(fu)狀(zhuang)態(tai)；

(4) 請(qing)選用(yong)質量好(hao)的移液(ye)器(qi)吸(xi)頭和(he)離心管，以免(mian)磁(ci)珠貼壁或(huo)混(hun)合(he)過程(cheng)發(fa)生滲(shen)漏(lou)引起(qi)磁(ci)珠的損耗；

(5) 磁(ci)珠(zhu)與溶液混(hun)合(he)過程(cheng)中(zhong)，如果(guo)溶液粘(zhan)稠(chou)無法通(tong)過(guo)翻轉離(li)心管重懸磁珠，可(ke)采用(yong)移液(ye)器(qi)反(fan)復(fu)吹吸(xi)或(huo)短時漩渦(wo)混(hun)合(he)使(shi)磁(ci)珠(zhu)充(chong)分(fen)重懸；

(6) 用(yong)戶可根(gen)據實際(ji)需要(yao)保留(liu)經(jing)磁(ci)性(xing)分(fen)離移去的上清(qing)液(ye)，進行取(qu)樣檢(jian)測，以便(bian)分(fen)析純化過程(cheng)和(he)優化蛋(dan)白純(chun)化流程(cheng)；

(7) 本(ben)產品可(ke)以(yi)重復(fu)使(shi)用(yong)，重復(fu)使(shi)用(yong)時，建議(yi)純(chun)化同(tong)種蛋(dan)白，純(chun)化不同(tong)種類(lei)的蛋(dan)白時，建議(yi)使(shi)用(yong)新的磁珠(zhu)，以(yi)防(fang)交(jiao)叉汙染(ran)；

(8) 本(ben)產品需(xu)與(yu)磁性分(fen)離器配(pei)套(tao)使(shi)用(yong)；

(9) 本(ben)產品僅供研(yan)究使(shi)用(yong)。

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產品訂購(gou)信(xin)息(xi)：

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