鈣(gai)熒光探針 Fluo 3-AM 細(xi)胞(bao)功(gong)能(neng)是壹(yi)種(zhong)可(ke)以(yi)穿(chuan)透(tou)細(xi)胞(bao)膜的(de)熒光染料。Fluo-3，AM 進(jin)入(ru)細(xi)胞(bao)後可以(yi)被(bei)細(xi)胞(bao)內(nei)源(yuan)性酯酶(mei)剪(jian)切(qie)形成(cheng)Fluo-3，從(cong)而被(bei)滯留(liu)在(zai)細(xi)胞(bao)內(nei)。

NobleRyder F6628 鈣(gai)熒光探針 Fluo 3-AM

產(chan)品(pin)貨(huo)號(hao)：F6628

產(chan)品(pin)名稱(cheng)：鈣(gai)熒光探針 Fluo 3-AM

英(ying)文(wen)名稱(cheng)：Fluo 3-AM

產(chan)品(pin)規格(ge)：100ug/1mg

鈣(gai)熒光探針 Fluo 3-AM 細(xi)胞(bao)功(gong)能(neng)產(chan)品(pin)簡介：

別(bie)名：鈣(gai)熒光探針/鈣(gai)離子(zi)探針

分(fen)子(zi)式：C51H50Cl2N2O23

分(fen)子(zi)量：1129.85

純度(du)/級(ji)別：≥90%(HPLC)

外(wai)觀(性(xing)狀)：紅色粉末(mo)（本品為(wei)凍幹(gan)粉形式，可(ke)能(neng)會粘附(fu)在(zai)管(guan)壁(bi)上(shang)，是正(zheng)常(chang)現(xian)象，可(ke)放心使用(yong)）

儲(chu)存條(tiao)件：-20℃保(bao)存，有效期(qi)1年(nian)。

具體產(chan)品(pin)的(de)參數以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品(pin)說明書的(de)參數為(wei)準。

NobleRyder F6628 鈣(gai)熒光探針 Fluo 3-AM是壹(yi)種(zhong)可(ke)以(yi)穿(chuan)透(tou)細(xi)胞(bao)膜的(de)熒光染料。Fluo-3，AM 進(jin)入(ru)細(xi)胞(bao)後可以(yi)被(bei)細(xi)胞(bao)內(nei)源(yuan)性酯酶(mei)剪(jian)切(qie)形成(cheng)Fluo-3，從(cong)而被(bei)滯留(liu)在(zai)細(xi)胞(bao)內(nei)。Fluo-3可以(yi)和鈣(gai)離子(zi)結合，結合鈣(gai)離子(zi)後可以(yi)產(chan)生較(jiao)強(qiang)的(de)熒光，最大激發波(bo)長為506nm，最大發射波長為526nm。Fluo-3，AM 的(de)壹個(ge)重(zhong)要作用(yong)是其在高(gao)通(tong)量(liang)藥物(wu)篩選中(zhong)的(de)應用(yong)。

操作步(bu)驟(zhou)（僅(jin)供(gong)參考(kao)）：

1、用(yong)DMSO溶(rong)解(jie)配制1-5mM的(de)Fluo-3，AM母液(ye)，向 Fluo-3,AM/DMSO 溶(rong)液(ye)中(zhong)加(jia)入(ru)等(deng)體積(ji)的(de) 20%的(de) Pluronic F127 溶(rong)液(ye)，Pluronic F127 可以(yi)防(fang)止 Fluo-3,AM 在(zai) HBSS 中(zhong)聚(ju)合並(bing)能(neng)夠(gou)幫助其進(jin)入(ru)細(xi)胞(bao)。（註(zhu)意(yi)：不(bu)建(jian)議(yi)在(zai) PluronicF127 中(zhong)長期(qi)保(bao)存 Fluo-3,AM 溶(rong)液(ye)。PluronicF127 的(de)量可(ke)以(yi)適當(dang)調(tiao)整，PluronicF127 和 Fluo-3,AM 壹定(ding)要(yao)確(que)保(bao)wan全溶(rong)解(jie)後才(cai)可使用(yong)。）

2、用(yong)HBSS溶(rong)液(ye)稀釋1-5mM的(de)Fluo-3,AM母液(ye)，配制成1-5μM的(de)Fluo-3,AM工作(zuo)液（此(ci)濃(nong)度僅(jin)供(gong)參考(kao)，請(qing)根(gen)據(ju)具(ju)體(ti)實驗(yan)要(yao)求自(zi)行(xing)調(tiao)整）。

3、取出預培養(yang)細(xi)胞(bao)，去除培(pei)養基，用(yong)HBSS溶(rong)液(ye)洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)三(san)次。

4、加入(ru)Fluo-3，AM工作(zuo)液，溶(rong)液(ye)量以(yi)覆蓋細(xi)胞(bao)為(wei)準。

5、37℃細(xi)胞(bao)培(pei)養箱孵(fu)育(yu)約10-60min。

6、去除Fluo-3，AM工(gong)作液，用(yong)HEPESbuffersaline溶(rong)液(ye)洗(xi)滌(di)細(xi)胞(bao)三(san)次。

7、加入(ru)含1%胎(tai)牛血清(qing)的(de)HBSS溶(rong)液(ye)，使其覆蓋細(xi)胞(bao)，37℃細(xi)胞(bao)培(pei)養箱孵(fu)育(yu)約20-30min，確(que)保(bao)AM體在細(xi)胞(bao)內(nei)的(de)wan全去酯化作(zuo)用。

8、用(yong)激光共聚(ju)焦(jiao)或熒光顯微鏡(jing)檢測細(xi)胞(bao)，激發波(bo)長480-500nm，發射波長525-530nm，如需熒(ying)光酶(mei)標儀或流(liu)式檢測需(xu)用 HEPESbuffersaline 使細(xi)胞(bao)重(zhong)懸浮(fu)，制成 1×105cells/mL 的(de)溶(rong)液(ye)。

註意(yi)事項(xiang)：

1、如果使(shi)用(yong)含有血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基，血(xue)清(qing)中(zhong)的(de)酯酶(mei)會分解(jie)AM體(ti)，從(cong)而降低(di)Fluo-3，AM進(jin)入(ru)細(xi)胞(bao)的(de)效果(guo)。另外，含(han)有(you)酚(fen)紅的(de)培養(yang)基會使本底(di)值略(lve)微偏(pian)高(gao)，所以(yi)加工(gong)作(zuo)液之(zhi)前(qian)，應(ying)盡(jin)量去除培(pei)養基殘(can)留。

2、關於(yu)細(xi)胞(bao)孵(fu)育(yu)時間，建議(yi)先(xian)孵(fu)育(yu)30min，看熒(ying)光效果。如果細(xi)胞(bao)死(si)亡較(jiao)多(duo)，應縮短(duan)時間；如果熒(ying)光強(qiang)度太弱(ruo)，適當(dang)延長時間。

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