本(ben)品是(shi)潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen)，用於(yu)細(xi)胞(bao)培養實(shi)驗溶(rong)解後(hou)過(guo)濾除菌。推(tui)薦溶劑水(shui)，PBS溶液(ye)。
說(shuo)明：蛋白質合(he)成(cheng)抑制劑，可用於(yu)植物細(xi)胞(bao)培養等(deng)生化(hua)研(yan)究(jiu)。
潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen) 農桿菌培養

NobleRyder H6869 潮(chao)黴(mei)素(su)B（幹粉(fen)），濕(shi)黴(mei)素(su)乙 效(xiao)高素(su) 潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen)，Hygromycin B

產(chan)品貨號：H6869

產(chan)品名稱(cheng)：潮(chao)黴(mei)素(su)B（幹粉(fen)），濕(shi)黴(mei)素(su)乙 效(xiao)高素(su) 潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen)，Hygromycin B

產(chan)品規(gui)格(ge)：1g

潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen) 農桿菌培養

產(chan)品簡介：

別名：濕黴(mei)素(su)乙 效(xiao)高素(su) 潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen)

英文(wen)名稱：Hygromycin B

CAS：31282-04-9

儲存條(tiao)件(jian)：-20℃，有(you)效(xiao)期(qi)4年(nian)

規(gui)格(ge)：1g

外觀(guan)(性(xing)狀(zhuang))：白(bai)色(se)至(zhi)淺(qian)黃(huang)色(se)固體(ti)

純(chun)度：＞90%

來(lai)源(yuan)：放(fang)線(xian)菌發酵(jiao)產(chan)品

酶活/效(xiao)價(jia)：≥950U/mg

溶解性(xing)：100mg/ml in Water

具(ju)體(ti)產(chan)品的(de)參數(shu)以收到產(chan)品說(shuo)明書的(de)參數(shu)為(wei)準

NobleRyder H6869 潮(chao)黴(mei)素(su)B（幹粉(fen)），濕(shi)黴(mei)素(su)乙 效(xiao)高素(su) 潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen)，Hygromycin B

產(chan)品介紹(shao)

本(ben)品是(shi)潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen)，用於(yu)細(xi)胞(bao)培養實(shi)驗溶(rong)解後(hou)過(guo)濾除菌。推(tui)薦溶劑水(shui)，PBS溶液(ye)。

說(shuo)明：蛋白質合(he)成(cheng)抑制劑，可用於(yu)植物細(xi)胞(bao)培養等(deng)生化(hua)研(yan)究(jiu)。

潮(chao)黴(mei)素(su)B（Hygromycin B）是(shi)由(you)吸水鏈(lian)黴(mei)菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chan)生的(de)壹(yi)種(zhong)氨(an)基糖苷(gan)類抗(kang)生素(su)，通(tong)過(guo)幹(gan)擾(rao)70S核糖(tang)體(ti)易(yi)位(wei)和誘導(dao)對mRNA模(mo)板(ban)的(de)錯(cuo)讀(du)而(er)抑制蛋白(bai)合(he)成(cheng)，從而(er)殺(sha)死原(yuan)核（如(ru)細(xi)菌）、真核(he)（如(ru)酵(jiao)母(mu)菌，真菌）和高等(deng)哺乳(ru)動物真核細胞(bao)。

大(da)腸(chang)桿菌（ Escherichia coli.）來(lai)源(yuan)的(de)潮(chao)黴(mei)素(su)抗性(xing)基(ji)因（hyg或hph），編碼潮(chao)黴(mei)素(su)B磷酸(suan)轉移酶，將(jiang)潮(chao)黴(mei)素(su)B轉化成(cheng)不具(ju)有(you)生物(wu)活性(xing)的(de)磷(lin)酸化(hua)產(chan)物，從而(er)起到解毒(du)作(zuo)用。針對這(zhe)壹(yi)原理，潮(chao)黴(mei)素(su)B是(shi)壹(yi)種(zhong)非(fei)常有用的(de)選(xuan)擇性(xing)標記，用來(lai)篩(shai)選(xuan)和維持(chi)培養成(cheng)功(gong)轉染(ran)潮(chao)黴(mei)素(su)抗性(xing)基(ji)因的(de)原(yuan)核或者(zhe)真核(he)細胞(bao)。另(ling)外，由(you)於(yu)作(zuo)用模式(shi)的(de)差(cha)異(yi)，常與G418，Zeocin和Blasticidin S聯(lian)合使用進(jin)行雙(shuang)抗性(xing)陽性(xing)細(xi)胞(bao)株(zhu)的(de)選(xuan)擇。潮(chao)黴(mei)素(su)B還(hai)能(neng)用作(zuo)抗(kang)病(bing)毒劑，因其選(xuan)擇性(xing)滲(shen)透進(jin)入因病(bing)毒感(gan)染(ran)增強通(tong)透性(xing)的(de)細(xi)胞(bao)，且(qie)具(ju)有(you)抑(yi)制(zhi)翻(fan)譯(yi)的(de)功(gong)效(xiao)。還(hai)可混(hun)合(he)入動物(wu)飼(si)料中(zhong)起到驅蟲功(gong)能(neng)。

使用方(fang)法(fa)

1. 常用篩(shai)選(xuan)濃(nong)度(du)

註意：潮(chao)黴(mei)素(su)B用來(lai)篩(shai)選(xuan)穩(wen)轉株(zhu)的(de)工(gong)作(zuo)濃(nong)度(du)需要(yao)根據細(xi)胞(bao)類型(xing)，培養基(ji)，生長(chang)條(tiao)件(jian)和細胞(bao)代謝率而變(bian)化(hua)，推(tui)薦使用濃(nong)度(du)為50-1000μg/mL。對於(yu)第(di)壹(yi)次(ci)使用的(de)實(shi)驗體(ti)系(xi)建(jian)議通(tong)過(guo)建(jian)立(li)殺(sha)滅(mie)曲(qu)線(xian)（kill curve），即劑量反應性(xing)曲(qu)線(xian)，來(lai)確定(ding)最(zui)佳(jia)篩(shai)選(xuan)濃(nong)度(du)。

壹(yi)般而言，哺乳(ru)動物細胞(bao)50-500μg/mL；細(xi)菌/植物細(xi)胞(bao)20-200μg/mL；真(zhen)菌300-1000μg/mL。

2. 殺(sha)滅(mie)曲(qu)線(xian)的(de)建(jian)立(li)

註意：為(wei)了篩(shai)選(xuan)得(de)到穩定(ding)表(biao)達(da)目的(de)蛋(dan)白的(de)細(xi)胞(bao)株(zhu)，需(xu)要確定(ding)能(neng)夠殺(sha)死未(wei)轉染(ran)宿(xiu)主細(xi)胞(bao)的(de)抗(kang)生素(su)最(zui)di濃(nong)度(du)，可通(tong)過(guo)建(jian)立(li)殺(sha)滅(mie)曲(qu)線(xian)（劑量反應曲(qu)線(xian)）來(lai)實(shi)現，至(zhi)少(shao)選(xuan)擇5個(ge)濃(nong)度(du)。

1） 第壹(yi)天(tian)：未(wei)轉化的(de)細(xi)胞(bao)按(an)照20-25%的(de)細(xi)胞(bao)密(mi)度鋪(pu)在(zai)合適的(de)培養板(ban)上(shang)，37℃，CO2培養過(guo)夜(ye)；註(zhu)：對於(yu)需(xu)要更高密(mi)度來(lai)檢(jian)測(ce)活力(li)的(de)細(xi)胞(bao)，可增加接(jie)種(zhong)量。

2） 根據細(xi)胞(bao)類型(xing)，設(she)定(ding)合適範圍(wei)內(nei)的(de)濃(nong)度(du)梯度(du)。以哺乳(ru)動物細胞(bao)為(wei)例(li)，可設(she)定(ding)50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子(zi)水(shui)或者(zhe)PBS buffer按(an)照1:10的(de)比(bi)例(li)將(jiang)母液(ye)稀釋(shi)到5 mg/ml，然後(hou)按(an)照下(xia)表(biao)稀(xi)釋到相應濃(nong)度(du)的(de)工(gong)作(zuo)液(ye)。

3） 第二天(tian)：替換舊(jiu)的(de)培養基(ji)，換用新鮮(xian)配(pei)制(zhi)的(de)含(han)有相應濃(nong)度(du)藥(yao)物(wu)的(de)培養基(ji)。每(mei)個(ge)濃(nong)度(du)做三個(ge)平行孔(kong)。

4） 接下來(lai)每(mei)3-4天(tian)更換新(xin)的(de)含(han)藥(yao)物(wu)培養基(ji)。

5） 按(an)照固(gu)定(ding)的(de)周期(qi)（如每(mei)2天(tian)）進(jin)行活細胞(bao)計(ji)數來(lai)確定(ding)阻止(zhi)未(wei)轉染(ran)細(xi)胞(bao)生長(chang)的(de)恰(qia)當濃(nong)度(du)。選(xuan)擇在理想(xiang)的(de)天(tian)數（通(tong)常是(shi)7-10天(tian)）內能(neng)夠殺(sha)死絕(jue)大(da)多數(shu)細胞(bao)的(de)最(zui)di濃(nong)度(du)為穩(wen)定(ding)轉染(ran)細(xi)胞(bao)篩(shai)選(xuan)用的(de)工(gong)作(zuo)濃(nong)度(du)。

3. 穩定(ding)轉染(ran)細(xi)胞(bao)的(de)篩(shai)選(xuan)

1） 轉染(ran)48h後(hou)，用含有適當濃(nong)度(du)的(de)潮(chao)黴(mei)素(su)B篩(shai)選(xuan)培養基(ji)來(lai)傳(chuan)代細胞(bao)（直接傳代或者(zhe)稀釋(shi)後(hou)傳(chuan)代）。

註意：細(xi)胞(bao)處(chu)於(yu)活躍分裂(lie)狀態時抗生素(su)的(de)殺(sha)傷效(xiao)guo最(zui)hao。則(ze)當細胞(bao)過(guo)於(yu)稠(chou)密(mi)，其效(xiao)率會降(jiang)低(di)。為了得到較(jiao)好的(de)篩(shai)選(xuan)xiao果(guo)，最(zui)好(hao)將(jiang)細胞(bao)稀(xi)釋(shi)至(zhi)豐度(du)不超過(guo)25%。

2） 每(mei)隔3-4天(tian)更換含(han)有藥(yao)物(wu)的(de)篩(shai)選(xuan)培養液(ye)。

3） 篩(shai)選(xuan)7天(tian)後(hou)觀(guan)察(cha)並(bing)評估(gu)細胞(bao)克(ke)隆(long)（集落(luo)）的(de)形(xing)成(cheng)情況。集落(luo)的(de)形(xing)成(cheng)可能(neng)還(hai)需(xu)要(yao)壹(yi)周或者(zhe)更多(duo)的(de)時(shi)間，這(zhe)取決(jue)於(yu)宿(xiu)主細胞(bao)類型(xing)，轉染(ran)，以及篩(shai)選(xuan)效(xiao)果。

4） 挑取並(bing)轉移5-10個(ge)抗性(xing)克(ke)隆(long)於(yu)35mm細(xi)胞(bao)培養板(ban)，繼(ji)續(xu)用含藥(yao)物(wu)的(de)篩(shai)選(xuan)培養液(ye)維持(chi)培養7天(tian)。

5） 之(zhi)後(hou)更(geng)換(huan)正(zheng)常培養基(ji)培養即可。

註意事(shi)項(xiang)

1） 潮(chao)黴(mei)素(su)B的(de)抗(kang)性(xing)基(ji)因（hyg或hph）除了來(lai)自E. Coli.之(zhi)外，還(hai)發現於(yu)其他的(de)菌株(zhu)，包括(kuo)Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。

2） 本(ben)品為有(you)毒化合(he)物(wu)，避(bi)免(mian)與皮(pi)膚和眼睛(jing)接(jie)觸，請小心操作(zuo)。

3） 為了您的(de)安(an)全和健康，請(qing)穿(chuan)實(shi)驗服(fu)並(bing)戴(dai)壹(yi)次(ci)性(xing)手(shou)套(tao)操(cao)作(zuo)。

備(bei)註(zhu)：產(chan)品信息可能(neng)會有優化升(sheng)級(ji)。請(qing)以實(shi)際(ji)標簽信息為準。

潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen) 農桿菌培養 

產(chan)品訂(ding)購信息：

NobleRyder H6869 潮(chao)黴(mei)素(su)B（幹粉(fen)），濕(shi)黴(mei)素(su)乙 效(xiao)高素(su) 潮(chao)黴(mei)素(su)B幹粉(fen)，Hygromycin B 1g