本(ben)試(shi)劑(ji)盒采用(yong)酶法破碎(sui)酵母細胞(bao)壁(bi)和堿(jian)裂(lie)解(jie)法裂(lie)解(jie)酵母細胞(bao)來提取酵母質(zhi)粒(li)DNA。所采用(yong)的酵母破壁(bi)酶能(neng)有效地破壞酵母細胞(bao)壁(bi)，提高(gao)酵母質(zhi)粒(li)DNA的產量。
酵母質(zhi)粒(li)小(xiao)量提取試(shi)劑(ji)盒 蛋白(bai)提取

NobleRyder D9948 酵母質(zhi)粒(li)小(xiao)量提取試(shi)劑(ji)盒Yeast Plasmid Extraction Kit

產(chan)品(pin)貨(huo)號：D9948

產(chan)品(pin)名(ming)稱：酵母質(zhi)粒(li)小(xiao)量提取試(shi)劑(ji)盒，Yeast Plasmid Extraction Kit

產(chan)品(pin)規(gui)格：50T/100T

酵母質(zhi)粒(li)小(xiao)量提取試(shi)劑(ji)盒 蛋白(bai)提取

產(chan)品(pin)簡介(jie)：

英(ying)文(wen)名(ming)稱：Yeast Plasmid Extraction Kit

規(gui)格：50T ; 100T

儲(chu)存(cun)條件：酶附(fu)件(jian)-20℃，其(qi)它(ta)試(shi)劑(ji)RT，復(fu)檢期1年

具體產(chan)品(pin)的參數(shu)以(yi)收(shou)到產品(pin)說明(ming)書(shu)的參數(shu)為準

NobleRyder D9948 酵母質(zhi)粒(li)小(xiao)量提取試(shi)劑(ji)盒，Yeast Plasmid Extraction Kit

產(chan)品(pin)介紹

本(ben)試(shi)劑(ji)盒采用(yong)酶法破碎(sui)酵母細胞(bao)壁(bi)和堿(jian)裂(lie)解(jie)法裂(lie)解(jie)酵母細胞(bao)來提取酵母質(zhi)粒(li)DNA。所采用(yong)的酵母破壁(bi)酶能(neng)有效地破壞酵母細胞(bao)壁(bi)，提高(gao)酵母質(zhi)粒(li)DNA的產量。吸附(fu)柱(zhu)中(zhong)采用(yong)的矽基(ji)質(zhi)材(cai)料(liao)能(neng)高(gao)效(xiao)、專壹(yi)地吸(xi)附(fu)DNA，可(ke)最(zui)da限(xian)度去(qu)除雜(za)質(zhi)蛋白(bai)質(zhi)及(ji)細胞(bao)中(zhong)其(qi)他(ta)有機(ji)化合物(wu)。使用(yong)本試(shi)劑(ji)盒提取的酵母質(zhi)粒(li)DNA可(ke)適用(yong)於(yu)各種(zhong)常(chang)規(gui)的分子生(sheng)物學(xue)實(shi)驗(yan)，包(bao)括(kuo)酶qie、PCR、測(ce)序、連接和(he)轉化等(deng)試(shi)驗(yan)。本(ben)試劑(ji)盒無需(xu)使(shi)用(yong)酚(fen)、lu仿等(deng)有(you)毒(du)試(shi)劑(ji)，操(cao)作安(an)全(quan)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項：

 1、溶(rong)液(ye)YP1在(zai)使用前先(xian)加(jia)入RNaseA(將(jiang)試劑(ji)盒中(zhong)提供(gong)的RNaseA全(quan)部加(jia)入)，混(hun)勻，置(zhi)於(yu)2-8℃保存。

 2、第(di)壹(yi)次使(shi)用前應按(an)照(zhao)試劑(ji)瓶(ping)標簽的說明(ming)在漂(piao)洗液(ye)中(zhong)加(jia)入無水(shui)乙醇(chun)配制成(cheng)工(gong)作液(ye)(向(xiang)15ml的漂洗液(ye)中(zhong)加(jia)入60ml的無水(shui)乙醇(chun))。

3、使(shi)用(yong)前請(qing)先(xian)檢(jian)查(zha)溶(rong)液(ye)YP2和(he)溶(rong)液(ye)YP3是(shi)否出(chu)現(xian)混(hun)濁(zhuo)，如(ru)有混(hun)濁(zhuo)現(xian)象(xiang)，可(ke)在37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)加(jia)熱(re)幾分鐘(zhong)，待溶(rong)液(ye)恢復澄(cheng)清後(hou)再(zai)使(shi)用。

4、溶(rong)液(ye)YP2、溶(rong)液(ye)YP3和(he)漂洗液(ye)使(shi)用後(hou)應(ying)立即蓋緊(jin)蓋子，如(ru)非指明(ming)，所有(you)離(li)心(xin)步(bu)驟均(jun)為使(shi)用臺式(shi)離(li)心(xin)機(ji)室溫(wen)下進行離(li)心(xin)。

5、質(zhi)粒(li)得率與酵母菌株、質(zhi)粒(li)拷(kao)貝(bei)數(shu)、培養(yang)條件等(deng)因(yin)素(su)有(you)關。通常(chang)酵母質(zhi)粒(li)拷(kao)貝(bei)數(shu)都(dou)很(hen)低，因此(ci)質(zhi)粒(li)得率壹(yi)般為(wei)每5ml菌液(ye)提取1ug左(zuo)右(you)。

6、洗(xi)脫(tuo)緩沖液(ye)的體積最(zui)好(hao)不(bu)少於(yu)50ul，體積過小(xiao)會影(ying)響回收(shou)效(xiao)率；洗脫(tuo)液(ye)的pH值對洗脫(tuo)效率也(ye)有(you)影(ying)響，若需(xu)要(yao)用(yong)水(shui)做(zuo)洗(xi)脫(tuo)液(ye)應(ying)保證其(qi)pH值(zhi)在8.0左右(可(ke)用NaOH將(jiang)水(shui)的pH值調至(zhi)此範圍)，pH值低於(yu)7.0會降(jiang)低洗脫(tuo)效率。

操(cao)作步(bu)驟（僅(jin)供(gong)參(can)考）：

1. 取 1-5mL 酵母培養(yang)物（不(bu)超過(guo)5×107cells）， 12000rpm 離(li)心(xin) 1min，盡(jin)量吸除上清（菌(jun)液(ye)較(jiao) 多時可(ke)以(yi)通過多(duo)次(ci)離(li)心(xin)將(jiang)菌體(ti)沈(chen)澱收(shou)集(ji)到壹(yi)個離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)）。

2. 酵母細胞(bao)壁(bi)的破除：

A、酶法：向酵母菌體中(zhong)加(jia)入470μL山li醇Buffer，充分懸(xuan)浮(fu)菌(jun)體，加入25μL酵母破壁(bi)酶 和(he)5μL巰(qiu)基(ji)還原(yuan)劑(ji)，充分混(hun)勻，30℃處(chu)理1-2h，期間可(ke)顛(dian)倒(dao)離(li)心(xin)管(guan)混(hun)勻數(shu)次。12000rpm離(li)心(xin) 1min，棄(qi)上清，收(shou)集(ji)沈(chen)澱。向(xiang)沈(chen)澱中(zhong)加(jia)入250μL YP1（請(qing)先(xian)檢(jian)查(zha)是(shi)否已(yi)加(jia)入RNaseA），充分懸(xuan)浮(fu)沈(chen)澱。註(zhu)意(yi)：如(ru)果菌塊(kuai)未(wei)che底(di)混(hun)勻，會影(ying)響裂(lie)解(jie)導致(zhi)質(zhi)粒(li)提取量和純度偏低。

B、玻(bo)璃(li)珠法：向酵母菌體中(zhong)加(jia)入250μL YP1（請(qing)先(xian)檢(jian)查(zha)是(shi)否已(yi)加(jia)入RNaseA），充分懸(xuan)浮(fu)沈(chen)澱。加(jia)入(ru)150-200μL酸(suan)洗玻璃(li)珠（自備(bei)），漩渦振蕩10min。簡短(duan)離(li)心(xin)使(shi)玻璃(li)珠沈(chen)降(jiang)到離(li)心(xin) 管(guan)底(di)，吸取上清（如(ru)上清有(you)所損(sun)失(shi)，請(qing)用(yong)YP 1補足至(zhi)250μL）於(yu)另(ling)壹(yi)幹凈(jing)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)。

3. 向(xiang)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)加(jia)入250μL YP2，溫和地上下翻轉6-8次使菌體(ti)充分裂(lie)解(jie)。註(zhu)意(yi)：混(hun)勻壹(yi)定要(yao) 溫和，以(yi)免汙(wu)染酵母基(ji)因組(zu)DNA，此時(shi)菌(jun)液(ye)應(ying)變得清亮(liang)粘稠(chou)，作用時(shi)間不(bu)要超(chao)過(guo)5 min，以(yi) 免質(zhi)粒(li)受到破壞。

4. 向(xiang)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)加(jia)入350μL YP3，立即溫(wen)和(he)地上下翻轉6-8次，充分混(hun)勻，此(ci)時(shi)會出(chu)現(xian)白(bai)色(se)絮 狀沈(chen)澱。12000rpm離(li)心(xin)20 min，用(yong)移液(ye)器(qi)小(xiao)心地將(jiang)上清轉移到另(ling)壹(yi)個幹凈(jing)的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，盡(jin)量 不(bu)要吸(xi)出(chu)沈(chen)澱。註(zhu)意(yi)：YP3 加(jia)入(ru)後(hou)應(ying)立即混(hun)合，避(bi)免產(chan)生(sheng)局部沈(chen)澱。如(ru)果上清中(zhong)還(hai)有微小(xiao)白(bai) 色(se)沈(chen)澱，可(ke)再次(ci)離(li)心(xin)後(hou)取上清。

5. 取上壹(yi)步(bu)上清，加(jia)入(ru)0.4倍(bei)體(ti)積(ji)無水(shui)乙醇(chun)，充分混(hun)勻。（體(ti)積(ji)過多可(ke)分兩(liang)次混(hun)合，然(ran)後(hou)上柱）

6. 將(jiang)上壹(yi)步(bu)所得上清液(ye)加(jia)入吸附柱(zhu)中(zhong)，室(shi)溫放(fang)置(zhi)2min，12000rpm離(li)心(xin)1min，倒(dao)掉(diao)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong) 的廢(fei)液(ye)，將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)重(zhong)新放(fang)回收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)。

7. 向(xiang)吸(xi)附(fu)柱中(zhong)加(jia)入600μL漂洗液(ye)Ⅰ(使(shi)用前請(qing)先(xian)檢(jian)查(zha)是(shi)否已(yi)加(jia)入無水(shui)乙醇(chun))，12000rpm離(li)心(xin)1min， 倒(dao)掉(diao)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)的廢(fei)液(ye)，將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)重(zhong)新放(fang)回收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)。

8. 向(xiang)吸(xi)附(fu)柱中(zhong)加(jia)入 600μL 漂洗液(ye)ⅠⅠ(使(shi)用前請(qing)先(xian)檢(jian)查(zha)是(shi)否已(yi)加(jia)入無水(shui)乙醇(chun))，12000rpm 離(li)心(xin) 1min，棄(qi)廢(fei)液(ye)，將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)放(fang)入(ru)收(shou)集(ji)管(guan)中(zhong)。

9. 重(zhong)復(fu)操(cao)作步(bu)驟8。

10. 12000rpm 離(li)心(xin) 2min，將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)敞(chang)口置(zhi)於(yu)室溫或50℃溫箱(xiang)放(fang)置(zhi)數(shu)分鐘(zhong)，目的是(shi)將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)中(zhong) 殘余的漂洗液(ye)去(qu)除，否則(ze)漂(piao)洗(xi)液(ye)中(zhong)的乙醇(chun)會影(ying)響後(hou)續(xu)的實(shi)驗(yan)如(ru)酶切(qie)、PCR等(deng)。

11. 將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)放(fang)入(ru)壹(yi)個幹凈(jing)的離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)，向(xiang)吸附膜(mo)中(zhong)央(yang)懸(xuan)空滴(di)加(jia)50-200μL經(jing)65℃水(shui)浴(yu)預(yu)熱(re)的 洗脫(tuo)液(ye)，室(shi)溫放(fang)置(zhi)2min，12000rpm離(li)心(xin)1min。

12. (可(ke)選)為了增加質(zhi)粒(li)的回收(shou)效(xiao)率，可(ke)將(jiang)得到的洗脫(tuo)液(ye)重(zhong)新加(jia)入(ru)吸(xi)附柱中(zhong)，室(shi)溫放(fang)置(zhi)2min， 12000rpm 離(li)心(xin)1min。

酵母質(zhi)粒(li)小(xiao)量提取試(shi)劑(ji)盒 蛋白(bai)提取 

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