諾博萊(lai)德(de) RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye) RNA提(ti)取配(pei)套(tao)產(chan)品

RNA 長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)

目(mu)錄號:91118

產(chan)品內(nei)容(rong)：

保(bao)存溫度(du)：

4℃保(bao)存，有效期(qi) 12 個(ge)月(yue)。

具體產(chan)品的(de)參數(shu)以收到(dao)產(chan)品說(shuo)明書的(de)參數(shu)為準(zhun)

產(chan)品簡介：

RNA性質(zhi)不穩(wen)定，極易降(jiang)解(jie)。溶(rong)解(jie)於(yu)無(wu)RNase 的(de)TE 或(huo)水中的純化RNA，即(ji)便(bian)是儲存於-20 ºC也難免降(jiang)解(jie)。為(wei)解(jie)決(jue)這(zhe)壹問題，可(ke)以(yi)將(jiang)RNA 沈(chen)澱(dian)或RNA溶(rong)液(ye)溶解(jie)於(yu)RNA 長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)中，可(ke)以(yi)允許(xu)RNA在4 ºC 過夜(ye)或(huo)-20 ºC 保(bao)存(cun)至(zhi)少1 年而免於(yu)降(jiang)解(jie)。RNA 長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)是RNA 樣品運(yun)輸和中長(chang)期(qi)保(bao)存的(de)zuijia選(xuan)擇(ze)。需(xu)要(yao)時(shi)可(ke)用(yong)常規(gui)乙(yi)醇法沈(chen)澱(dian)回收(shou)RNA，或(huo)直接(jie)吸(xi)取儲存於RNA 溶(rong)解(jie)保(bao)護(hu)液(ye)中的高(gao)濃(nong)度(du)RNA(可(ke)達(da)4 mg/ml)進(jin)行(xing)RNA 電(dian)泳、Northern Blot。

註(zhu)意事(shi)項(xiang)：

1.     RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)可(ke)能抑(yi)制(zhi)逆轉(zhuan)錄酶活性，做(zuo)逆(ni)轉(zhuan)錄反應之(zhi)前，應該用乙(yi)醇沈(chen)澱(dian)RNA。

2.      在(zai)RNA 長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)中的RNA 的(de)終(zhong)濃度(du)不應該超(chao)過4μg /μl。

使(shi)用方法：

壹、用RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)溶解(jie)RNA沈(chen)澱(dian)

1.     對固(gu)體RNA 沈(chen)澱(dian)，每0.4-4μg RNA 沈(chen)澱(dian)加(jia)入(ru)1μl RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)，反復吹打混(hun)勻或(huo)者室溫振(zhen)蕩(dang)15-30 分鐘(zhong)溶(rong)解(jie)沈(chen)澱(dian)。幹(gan)燥(zao)的RNA沈(chen)澱(dian)難以(yi)溶(rong)解(jie)，可(ke)反復吹打混(hun)勻後(hou)50 ºC 加(jia)熱(re)10-15 分鐘(zhong)。最(zui)好先用小體積(ji)無(wu) RNase 的(de)TE 或(huo)水溶(rong)解(jie)RNA 沈(chen)澱(dian)，然後(hou)按液(ye)態RNA 操(cao)作(zuo)。

2.對液(ye)態RNA 溶(rong)液(ye)，每0.4-4μg RNA 溶(rong)液(ye)加(jia)入(ru)1μl RNA 長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)，混(hun)勻。註(zhu)意混(hun)合(he)液(ye)中RNA 長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)的體積(ji)百(bai)分(fen)比不低(di)於(yu)80%。

3.    測(ce)定OD 值。註(zhu)意加(jia)入(ru)相應量的(de)RNA 長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)做(zuo)空(kong)白。

4.    將(jiang)溶解(jie)的(de)RNA 樣品儲存於-20 ºC或者-70 ºC。

二(er)、從RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)中沈(chen)澱(dian)RNA

1.  估(gu)計(ji) RNA 溶(rong)液(ye)終(zhong)體積(ji)。加(jia)入(ru) 4 倍體積(ji)的無(wu)水(shui)乙(yi)醇，混(hun)勻。如果溶(rong)液(ye)體積(ji)過小操(cao)作(zuo)不便(bian)，可(ke)加(jia)入(ru) RNase free water 稀釋(shi) RNA 溶(rong)液(ye),如果溶(rong)液(ye)中 RNA 含(han)量(liang)低(di)於(yu) 0.25μg /μl，可(ke)加(jia)入(ru) 5M NaCl(RNase free) 至(zhi)終(zhong)濃度(du) 0.2M,混(hun)勻，然後(hou)再加(jia)入(ru) 4 倍體積(ji)乙醇。

2.室溫放置(zhi) 5 分(fen)鐘(zhong)。

3.     12,000 rpm 5 min。棄(qi)上(shang)清。風幹(gan)，溶(rong)解(jie)。

4.     重(zhong)新(xin)沈(chen)澱(dian)的RNA 溶(rong)解(jie)後(hou)可(ke)用(yong)於(yu) RT-PCR 反應。也可(ke)用(yong)於(yu)任何其他(ta)實驗(yan)。

三(san)、直(zhi)接使用RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)中的RNA

直(zhi)接吸(xi)取RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)中的RNA ， 進(jin)行(xing)普(pu)通(tong)或甲(jia)醛(quan)變性電(dian)泳(yong)和(he) Northern Blot。進(jin)行(xing)甲(jia)醛(quan)變性電(dian)泳(yong)時(shi)，最(zui)後(hou)上(shang)樣的樣品中的RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)的濃度(du)可(ke)高(gao)達(da)50%。

附(fu)：甲醛(quan)變性電(dian)泳(yong)樣品準(zhun)備(bei)： 臨用前，混(hun)合(he)水(shui)（87μl），甲(jia)醛(quan)（81μl）, 50%甘(gan)油/含(han)0.25 mg/ml溴(xiu)芬蘭(lan)(48μl) 和(he)20X MOPS (24 μl). 將(jiang)上(shang)述(shu)混(hun)合(he)液(ye)和RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye)中的RNA樣品等體積(ji)混(hun)合(he)，55 ºC溫育(yu)10分(fen)鐘(zhong)，按(an)照標(biao)準(zhun)的(de)甲(jia)醛(quan)變性電(dian)泳(yong)過程上(shang)樣。每1ml 裂(lie)解(jie)液(ye)（裂(lie)解(jie)液(ye)RL、裂(lie)解(jie)液(ye) RLS、裂(lie)解(jie)液(ye)PRL、裂(lie)解(jie)液(ye)ARL Plus）

RNA長(chang)期(qi)保(bao)存液(ye) RNA提(ti)取配(pei)套(tao)產(chan)品