gDNA殘留清除劑(ji) RNA提取配套產(chan)品(pin)

gDNA 殘留清除劑(ji)gDNA Eraser Reagent

目(mu)錄(lu)號:91210

產(chan)品(pin)內容：

自備試(shi)劑：

氯(lv)仿(fang)、異丙醇(chun)、RNase-Free H2O、75%乙(yi)醇(chun)（用(yong) RNase-Free H2O 配制）

保存條件(jian)：

2~8℃避(bi)光(guang)保存，有(you)效期 24 個(ge)月(yue)。

具(ju)體產(chan)品(pin)的參數(shu)以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品(pin)說明(ming)書的參數(shu)為(wei)準(zhun)

產(chan)品(pin)簡(jian)介：

非(fei)酶(mei)法清除RNA樣(yang)品(pin)中的基因組DNA汙染。每ml試(shi)劑處理～100μg RNA樣(yang)品(pin)。

很(hen)多(duo)用戶在提取RNA的時候由於(yu)操作(zuo)因(yin)素或(huo)者RNA抽(chou)提試(shi)劑質(zhi)量(liang)問(wen)題，造成(cheng)所得(de)到(dao)的RNA樣品(pin)中混雜(za)基(ji)因(yin)組汙染，在普(pu)通(tong)或(huo)者變(bian)性(xing)電泳的時候直(zhi)接肉眼可見(jian)程(cheng)度不(bu)壹的DNA汙染雜(za)帶(dai)。即(ji)使(shi)用市售(shou)的RNase-free的DNase消(xiao)化(hua) DNA也(ye)不(bu)容易清除完(wan)quan，而(er)且常常導致(zhi)RNA降解。DNAeraser 基(ji)因(yin)組DNA汙染清除劑(ji)不(bu)含(han)DNA酶(mei)，在(zai)強烈(lie)抑(yi)制RNA酶的條件下(xia)徹(che)di清除RNA樣(yang)品(pin)中的汙染DNA雜(za)帶(dai)和蛋(dan)白(bai)質(zhi)汙染，同(tong)時進(jin)壹步(bu)純化(hua)RNA。最後(hou)通(tong)過(guo)異丙醇(chun)沈澱回收的RNA純度極(ji)gao，完quan不(bu)影(ying)響(xiang)原有(you)RNA質量(liang)和下遊應用。

操作(zuo)步(bu)驟

以(yi)下(xia)操作(zuo)以(yi) 100μl RNA 溶(rong)液(ye)為例(li)，為方(fang)便(bian)操作(zuo)可(ke)用 DEPC 處理水將(jiang)不(bu)足(zu) 100μl 的 RNA 樣(yang)品(pin)的體積補(bu)充(chong)到(dao) 100 μl。（RNA 濃度很(hen)低的不(bu)要補水(shui)。）

1.     每 100 μl RNA 溶(rong)液(ye)加入 1ml 基(ji)因(yin)組DNA 汙染清除試(shi)劑。充(chong)分(fen)振蕩混勻(yun)，冰上(shang)放(fang)置 1 分鐘(zhong)。

2.     加(jia)入 200 ul 氯(lv)仿(fang)，蓋好(hao)管蓋，劇(ju)烈(lie)充(chong)分(fen)振蕩 15 sec，冰上(shang)放(fang)置 1 min。

3.    於(yu) 4℃， 12,000 rpm 離(li)心(xin) 10 min。

4.    取(qu)上(shang)清約(yue) 500μl 轉移(yi)到(dao)新管。勿觸動中間(jian)相(xiang)，否(fou)則(ze)重新離(li)心(xin)。

5.    可(ke)選(xuan)步(bu)驟:加(jia)入核酸(suan)助(zhu)沈劑(ji) Ploy Carrier（Cat：R117）2 μl ，充(chong)分(fen)混勻。加(jia)入核酸(suan)助(zhu)沈劑(ji)後(hou) RNA 特(te)別是低濃度 RNA 的回收率(lv)顯(xian)著(zhu)增加，並使 RNA 沈澱容易辨認(ren)。核(he)酸(suan)助沈劑(ji)不(bu)影(ying)響(xiang) RNA 及(ji)其(qi)下遊實(shi)驗(yan)。如(ru)果原樣(yang)品(pin)的 RNA 濃度較高，可以(yi)省略(lve)此步(bu)驟。

6.      加(jia)入等(deng)體積的異丙醇(chun)，顛倒混勻，室溫(wen)放(fang)置 10 min。

7.  於(yu) 4℃，12,000 rpm 離(li)心(xin) 10 min，棄(qi)上(shang)清。

8.      加(jia)入 1ml 75%乙(yi)醇(chun)洗滌(di)沈澱。於(yu) 4℃，12,000 rpm 離(li)心(xin) 3 min，倒出上(shang)清，註(zhu)意不(bu)要倒出沈澱，剩余(yu)的少量(liang)液(ye)體短(duan)暫離(li)心(xin)，然後(hou)用槍(qiang)頭吸出，註(zhu)意不(bu)要吸棄(qi)沈澱。

9.     室(shi)溫(wen)放(fang)置 2~3 min，晾幹。加(jia)入適量(liang)的 RNase-Free ddH2O，吹(chui)打混勻，充(chong)分(fen)溶(rong)解 RNA。（註(zhu)意：沈澱不(bu)要過(guo)分(fen)幹燥，以(yi)免(mian)難(nan)於(yu)溶(rong)解。）

10.  得(de)到(dao)的 RNA，可直接用於(yu)下遊(you)戲實驗(yan)，或(huo)於(yu)-70℃保存，防止(zhi)降解。

相(xiang)關產(chan)品(pin)：

71118-100   Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100   Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500   2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於(yu)所有(you)qPCR 儀)

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