多(duo)種成(cheng)分均可(ke)以從(cong)細(xi)胞中(zhong)提(ti)取總(zong)蛋(dan)白(bai)，是(shi)采(cai)用壹種經(jing)典的(de)細(xi)胞組織(zhi)快(kuai)速(su)裂解(jie)，並(bing)獲(huo)得(de)總(zong)蛋(dan)白(bai)的(de)裂解(jie)液(ye)，其(qi)裂解(jie)強度大於 NP-40 裂解(jie)液(ye)、RIPA 裂解(jie)液(ye)(中(zhong))。所(suo)獲(huo)得(de)的蛋(dan)白(bai)質(zhi)可(ke)以用於(yu) Western，免疫(yi)沈澱(Immunol Precipitation，IP)等(deng)。
諾(nuo)博萊德 RIPA裂解(jie)液(ye)(強) 樣(yang)本裂解(jie)采(cai)集

諾(nuo)博萊德 RIPA裂解(jie)液(ye)(強) 樣(yang)本裂解(jie)采(cai)集

產品簡(jian)介(jie)：
   
   多(duo)種成(cheng)分均可(ke)以從(cong)細(xi)胞中(zhong)提(ti)取總(zong)蛋(dan)白(bai)，例如 Triton、SDS、NP-40 等(deng)。RIPA 裂解(jie)液(ye)（強） (Enhanced RIPA Lysis Buffer )，是采(cai)用壹種經(jing)典的(de)細(xi)胞組織(zhi)快(kuai)速(su)裂解(jie)，並(bing)獲(huo)得(de)總(zong)蛋(dan)白(bai)的(de)裂解(jie)液(ye)，其(qi)裂解(jie)強度大於 NP-40 裂解(jie)液(ye)、RIPA 裂解(jie)液(ye)(中(zhong))。所(suo)獲(huo)得(de)的蛋(dan)白(bai)質(zhi)可(ke)以用於(yu) Western，免疫(yi)沈澱(Immunol Precipitation，IP)等(deng)。Enhanced RIPA Lysis Buffer 主要(yao)由(you) Tris 、NP-40、sodium deoxycholate 等(deng)組成(cheng)，並含(han)有(you)多種蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑成(cheng)分(fen)，可(ke)以有(you)效(xiao)抑制(zhi)蛋(dan)白(bai)的(de)降解(jie)，並(bing)維(wei)持原(yuan)有(you)的蛋(dan)白(bai)間(jian)相(xiang)互作用。 
 
產品組(zu)成(cheng)：

操(cao)作步(bu)驟(僅(jin)供參考)：
 
(壹)貼(tie)壁培(pei)養細(xi)胞

1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫(wen)溶(rong)解(jie)混勻，加入 PMSF，使(shi) PMSF 終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei) 1mM。
2、 去除(chu)貼(tie)壁細胞的培(pei)養液(ye)，用 PBS、NS 或(huo)無血(xue)清培(pei)養液(ye)清洗(xi) 1 次，低(di)速(su)離心，棄(qi)上(shang)清，留取沈澱。
3、 按(an)照(zhao) 6 孔板(ban)每孔加(jia)入 150～250μl 含(han)有(you) PMSF 的裂解(jie)液(ye)的比(bi)例，加(jia)入 RIPA Lysis Buffer 。移液器(qi)輕(qing)輕吹打(da)，使(shi)裂解(jie)液(ye)和細胞充分(fen)接(jie)觸。置(zhi)於(yu)冰上(shang)或(huo) 4℃裂解(jie) 15～30min，通常(chang)裂解(jie)液(ye)作用於(yu)細胞 1～3 秒內(nei)，細(xi)胞就會(hui)被裂解(jie)。通常(chang) 6 孔板(ban)每孔細(xi)胞加入 150μl 裂解(jie)液(ye)已經(jing)足夠(gou)，但(dan)如果細胞密(mi)度非(fei)常(chang)高(gao)可(ke)以適(shi)當(dang)加(jia)大裂解(jie)液(ye)的用量到 200～250μl。
4、 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低(di)溫(wen)離心機，室溫(wen)下(xia)離心亦可(ke))，取上清(qing)。5、 進行後續的 SDS-PAGE、Western、免(mian)疫(yi)沈澱和免(mian)疫(yi)共(gong)沈(chen)澱等(deng)操(cao)作。
(二(er))懸浮(fu)培(pei)養細(xi)胞
1、 取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室溫(wen)溶(rong)解(jie)混勻，加入 PMSF，使(shi) PMSF 終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei) 1mM。
2、 低(di)速(su)離心懸浮(fu)細胞，棄(qi)上(shang)清，收(shou)集(ji)沈(chen)澱。
3、 用手(shou)指輕(qing)彈細(xi)胞，使其(qi)松散。按(an)照(zhao) 6 孔板(ban)每孔細(xi)胞加入 150～250μl 含(han)有(you) PMSF 的裂解(jie)液(ye)的比(bi)例，加(jia)入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。通常(chang) 6 孔板(ban)每孔細(xi)胞加入 150μl 裂解(jie)液(ye)已經(jing)足夠(gou)，但(dan)如果細胞密(mi)度非(fei)常(chang)高(gao)可(ke)以適(shi)當(dang)加(jia)大裂解(jie)液(ye)的用量到 200～250μl。再(zai)用手(shou)指輕(qing)彈以(yi)充(chong)分(fen)裂解(jie)細(xi)胞，充分(fen)裂解(jie)後(hou)應(ying)沒(mei)有(you)明顯的細(xi)胞沈澱。
4、 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低(di)溫(wen)離心機，室溫(wen)下(xia)離心亦可(ke))，取上清(qing)。5、 進行後續的 SDS-PAGE、Western、免(mian)疫(yi)沈澱和免(mian)疫(yi)共(gong)沈(chen)澱等(deng)操(cao)作。
(三(san))組織(zhi)樣(yang)本
1、取 Enhanced Lysis Buffer 置(zhi)於(yu)室溫(wen)溶(rong)解(jie)混勻，，加入 PMSF，使(shi) PMSF 終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei) 1mM。
2、把(ba)組zhi剪切成(cheng)細(xi)小(xiao)的碎(sui)片，越小(xiao)越好。取在(zai)液(ye)氮(dan)或超(chao)低(di)溫(wen)冰箱(xiang)中(zhong)冷(leng)凍(dong) 30min 以(yi)上(shang)的組(zu)織(zhi)，迅速(su)用液(ye)氮(dan)研(yan)磨(mo)，研(yan)磨(mo)過程(cheng)盡量控制(zhi)在(zai) 1～2min 之(zhi)內(nei)，以(yi)減少蛋(dan)白(bai)的(de)降解(jie)。
3按(an)照(zhao)每(mei) 20mg 組(zu)織(zhi)加(jia)入 150～250μl 裂解(jie)液(ye)的比(bi)例加(jia)入含(han)有(you) PMSF 的裂解(jie)液(ye)。冰上(shang)或(huo) 4℃
裂解(jie) 15-30min。
4、步(bu)驟 3、4 亦(yi)可(ke)以采(cai)用如下過程(cheng)：按(an)照(zhao)每(mei) 20mg 組(zu)織(zhi)加(jia)入 150～250μl 裂解(jie)液(ye)的比(bi)例加(jia)入含(han)有(you) PMSF 的 Enhanced RIPA Lysis Buffer。用玻(bo)璃(li)勻漿器(qi)或(huo)組(zu)織(zhi)研(yan)磨(mo)器(qi)勻漿，直(zhi)至(zhi)充(chong)分(fen)裂解(jie)，該(gai)過程(cheng)盡量控制(zhi)在(zai) 1～2min 之(zhi)內(nei)，以(yi)減少蛋(dan)白(bai)的(de)降解(jie)。
5、 10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低(di)溫(wen)離心機，室溫(wen)下(xia)離心亦可(ke))，取上清(qing)。6、 進行後續的 PAGE、Western、免(mian)疫(yi)沈澱和免(mian)疫(yi)共(gong)沈(chen)澱等(deng)操(cao)作。
 
諾(nuo)博萊德 RIPA裂解(jie)液(ye)(強) 樣(yang)本裂解(jie)采(cai)集

註意(yi)事(shi)項(xiang)：
 
1、 去除(chu)貼(tie)壁細胞的培(pei)養液(ye)後，如果血清(qing)中(zhong)的(de)蛋(dan)白(bai)沒(mei)有(you)幹擾，可(ke)以丌(ji)用清(qing)洗。
2、 如果裂解(jie)丌(ji)充分可(ke)以適(shi)當(dang)增(zeng)加(jia)裂解(jie)液(ye)的用量，如果需要(yao)高濃(nong)度(du)的(de)蛋(dan)白(bai)樣(yang)品，可(ke)以適(shi)當(dang)減
少裂解(jie)液(ye)的用量。
3、 如果細胞量較(jiao)多(duo)，必(bi)需(xu)分裝(zhuang)成 50～100 萬(wan)細胞/離心管(guan)，然(ran)後(hou)再(zai)裂解(jie)。大團的細(xi)胞較(jiao)難(nan)
裂解(jie)充(chong)分，而少量的細(xi)胞由(you)於裂解(jie)液(ye)容易(yi)和(he)細胞充分(fen)接(jie)觸，相(xiang)對比(bi)較(jiao)容易(yi)裂解(jie)充(chong)分。
4、 如果組織(zhi)樣(yang)品本身(shen)非常細小(xiao)，可(ke)以適(shi)當(dang)剪切後(hou)直(zhi)接(jie)加(jia)入裂解(jie)液(ye)裂解(jie)，通過強烈(lie) Vortex使(shi)樣(yang)品裂解(jie)充(chong)分。然後同樣(yang)離心取上清(qing)，用於(yu)後續實(shi)驗。
5、 溶(rong)解(jie) NobleRyder RIPA Lysis Buffer 時，應(ying)盡量縮短(duan)溶(rong)解(jie)時間，避(bi)免有(you)效(xiao)成(cheng)分(fen)失(shi)效(xiao)。
6、 裂解(jie)產物中(zhong)經(jing)常會(hui)出(chu)現(xian)壹小(xiao)團透(tou)明膠(jiao)狀(zhuang)物(wu)，屬正常(chang)現(xian)象。該透(tou)明膠(jiao)狀(zhuang)物(wu)為(wei)含(han)有(you)基因(yin)組 DNA 等(deng)的復(fu)合物(wu)。在(zai)丌(ji)檢(jian)測(ce)和(he)基(ji)因(yin)組(zu) DNA 結合特(te)別緊(jin)密(mi)的蛋(dan)白(bai)的(de)情(qing)況下(xia)，可(ke)以直(zhi)接(jie)離心取上清(qing)用於(yu)後續實(shi)驗；如果需要(yao)檢測(ce)和(he)基(ji)因(yin)組(zu)結合特(te)別緊(jin)密(mi)的蛋(dan)白(bai)，則(ze)可(ke)以通過超聲(sheng)處(chu)理(li)打(da)碎(sui)打(da)散該(gai)透(tou)明膠(jiao)狀(zhuang)物(wu)，隨後離心取上清(qing)用於(yu)後續實(shi)驗。如果檢測(ce)壹些(xie)常見的(de)轉(zhuan)錄因子，例如 NF-KB、p53 等(deng)時，通常(chang)丌(ji)必(bi)進(jin)行超聲(sheng)處(chu)理(li)，就(jiu)可(ke)以檢(jian)測(ce)到(dao)這(zhe)些(xie)轉(zhuan)錄因子。
7、 細(xi)胞裂解(jie)的(de)操(cao)作步(bu)驟，應(ying)置(zhi)於(yu)冰上(shang)或(huo) 4℃進行。
 
 
有(you)效(xiao)期： 12 個月(yue)有(you)效(xiao)。