WestFemto 最(zui)高(gao)靈敏度(du)底(di)物(wu)是(shi)用(yong)於辣(la)根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)(HRP)的(de)增(zeng)強(qiang)型化學(xue)發光底物(wu)
West Femto ECL化(hua)學(xue)發光底物(wu)顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢(jian)測

West Femto ECL化學(xue)發光底物(wu)顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢(jian)測

產(chan)品介(jie)紹：
WestFemto 最(zui)高(gao)靈敏度(du)底(di)物(wu)是(shi)用(yong)於辣(la)根過(guo)氧化(hua)物(wu)酶(mei)(HRP)的(de)增(zeng)強(qiang)型化學(xue)發光底物(wu)
本(ben)產(chan)品特(te)點：
1、 靈敏—使用(yong)適(shi)當(dang)的(de)壹抗和二(er)抗(kang)時(shi)，可(ke)在硝化纖維膜(mo)或 PVDF 膜上(shang)檢(jian)測豐度(du)為(wei)飛(fei)克(ke)級的蛋(dan)白條帶
2、定(ding)量(liang)—所(suo)得信(xin)號(hao)的可(ke)定量(liang)檢(jian)測範圍(wei)跨越(yue)兩(liang)個數量(liang)級。 • 明亮信號—通過(guo)膠(jiao)片(pian)或成(cheng)像系統進行(xing)曝(pu)光(guang)，易於捕獲(huo)圖(tu)像。
3、長信號持(chi)續時(shi)間—優(you)化條件(jian)下，可(ke)檢(jian)測的光信號(hao)輸出長達 8 小時(shi)。
4、穩(wen)定試(shi)劑—試(shi)劑盒組分(fen)能夠在(zai) 4°C 條件(jian)下穩(wen)定放(fang)置(zhi)壹年(nian)，在室(shi)溫下(xia)可(ke)穩定放(fang)置(zhi)6 個月(yue)。
5、價(jia)格(ge)經(jing)濟(ji)—配方(fang)經(jing)過(guo)優化(hua)，可(ke)適用(yong)於濃度(du)極低的(de)抗體(ti)檢(jian)測。
6、1ng至(zhi)0.2μg/mL 壹抗(kang)（以1μg/mL 儲存液稀(xi)釋(shi) 1:5,000 至(zhi) 1:100,000 倍(bei)）
7、 2ng至(zhi)10ng/mL 二(er)抗(kang)（以1μg/mL 儲存液稀(xi)釋(shi) 1:100,000 至(zhi) 1:500,000 倍(bei)） 當(dang) West Femto 底(di)物(wu)與(yu)優(you)化(hua)的抗(kang)體(ti)濃度(du)和封(feng)閉緩(huan)沖液配合(he)使用(yong)時(shi)，可(ke)檢(jian)測到常規(gui) ECL 底(di)物(wu)無法(fa)檢(jian) 測的低豐度(du)靶(ba)標(biao)蛋(dan)白。
使用(yong)方(fang)法(fa)：
註：優(you)化抗(kang)原和抗(kang)體(ti)的濃度(du)。必(bi)須(xu)使用(yong)建(jian)議的(de)抗體(ti)稀(xi)釋(shi)度(du)，以保(bao)證(zheng)陽(yang)性結(jie)果。有關(guan)建(jian)議的(de)稀(xi)釋(shi)度(du)範 圍(wei)請(qing)參考(kao)其他(ta)所(suo)需(xu)材(cai)料(liao)。
1) 將壹(yi)抗(kang)濃度(du)稀(xi)釋(shi)到 1ng 至(zhi) 0.2μg/mL（以 1μg/mL 儲存液稀(xi)釋(shi) 1:5,000 至(zhi) 1:100,000 倍(bei)） 2) 將二(er)抗(kang)濃度(du)稀(xi)釋(shi)到 2ng 至(zhi) 10ng/mL（以 1μg/mL 儲存液稀(xi)釋(shi) 1:100,000 至(zhi) 1:500,000 倍(bei)） 3) 將兩(liang)種(zhong)底物(wu)組(zu)份(fen)按(an) 1:1 比例混(hun)合(he)，制備(bei)底(di)物(wu)工(gong)作液。 註(zhu)：暴漏(lou)於日光(guang)或任(ren)何(he)其他(ta)強(qiang)光可(ke)能損(sun)害(hai)工作液，為(wei)獲(huo)得優(you)良結果，將此工(gong)作液保(bao)存(cun)在琥(hu)珀色(se)瓶(ping)中(zhong)， 並避(bi)免(mian)長期暴(bao)漏於任(ren)何(he)強(qiang)光。短(duan)時(shi)間暴(bao)漏於實(shi)驗室常規(gui)照(zhao)明不(bu)會損(sun)害(hai)該(gai)工(gong)作液。
4) 將印(yin)跡膜(mo)在(zai) WestFemtoECL 底物(wu)工(gong)作液中(zhong)孵育5分(fen)鐘(zhong)。
5) 吸(xi)出多(duo)余試(shi)劑。用(yong)清(qing)潔的塑(su)料膜蓋住(zhu)該(gai)印(yin)跡膜(mo)。
6) 使(shi)印(yin)跡膜(mo)在(zai) X 光膠(jiao)片(pian)上(shang)曝(pu)光(guang)。
蛋(dan)白印(yin)跡法(fa)詳細操(cao)作步驟(zhou)
1) 將印(yin)記膜(mo)從蛋(dan)白轉(zhuan)印(yin)設備(bei)中(zhong)取(qu)出，加入合(he)適的(de)封閉液(ye)在(zai)溫室(shi)下(xia)孵育 20-60 分(fen)鐘(zhong)，同時(shi)振(zhen)蕩(dang)。以封閉膜(mo)上(shang)非特(te)異性蛋(dan)白結合(he)位點(dian)。 請(qing)註意：使用(yong)在(zai)前(qian)文(wen)建(jian)議的(de)抗體(ti)稀(xi)釋(shi)度(du)是(shi)非(fei)常重要(yao)的。
2) 將膜(mo)從封閉液(ye)中(zhong)取(qu)出，與(yu)壹(yi)抗(kang)工作液在(zai)溫室(shi)孵(fu)育 1 小時(shi)，同時(shi)振(zhen)蕩(dang)；或在 28℃孵育過(guo)夜，不(bu)振蕩(dang)。
3) 將足(zu)量(liang)的洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液加至(zhi)膜上(shang)，保(bao)證(zheng)緩(huan)沖液將膜(mo)wan全(quan)覆(fu)蓋(gai)。振(zhen)蕩(dang)孵(fu)育≥5 分(fen)鐘(zhong)，更(geng)換(huan)洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液 並重復該(gai)步(bu)驟(zhou) 4-6 次(ci)。增加(jia)洗滌(di)緩(huan)沖液體積，洗滌(di)次數和洗(xi)滌(di)時(shi)間有助於降(jiang)低背(bei)景信(xin)號。 註：孵(fu)育前(qian)，膜(mo)在洗滌(di)緩(huan)沖液中(zhong)的短(duan)暫(zan)淋(lin)洗會(hui)提高洗(xi)滌(di)效(xiao)率(lv)。 請(qing)註意：使用(yong)在(zai)前(qian)文(wen)建(jian)議的(de) HRP 標(biao)記二(er)抗(kang)稀(xi)釋(shi)度(du)是(shi)非(fei)常重要(yao)的。
4) 將 HRP 標(biao)記的(de)二(er)抗(kang)工作液與(yu)膜(mo)在(zai)溫室(shi)孵(fu)育1小時(shi)，同時(shi)振(zhen)蕩(dang)。
5) 重復步(bu)驟(zhou)3，以除去未結合(he)的HRP 標(biao)記二(er)抗(kang)。 註：膜與(yu)HRP標(biao)記二(er)抗(kang)孵育後必(bi)須(xu)進行(xing)che底洗(xi)滌(di)。
6) 將A溶(rong)液(ye)與(yu)B液(ye)等(deng)比例(li)混(hun)合(he)，制備(bei)成(cheng)工(gong)作液。每(mei)cm2膜使(shi)用(yong) 0.01～0.1ml 工(gong)作液。工(gong)作液可(ke)以 在溫室(shi)下(xia)穩定 8 小時(shi)。 註(zhu)：暴漏雨日光(guang)或任(ren)何(he)其他(ta)強(qiang)光下(xia)可(ke)能損(sun)害(hai)工作液，為(wei)獲(huo)得嘴(zui)角結(jie)果，將此工(gong)作液保(bao)存(cun)在琥(hu)珀色(se)瓶(ping)中(zhong)，並避(bi)免(mian)長期暴(bao)漏雨任(ren)何(he)強(qiang)光。實(shi)驗(yan)室(shi)的常見(jian)照明(ming)不會(hui)損(sun)害(hai)工作液。
7) 將印(yin)記膜(mo)在(zai)工(gong)作液中(zhong)孵育5分(fen)鐘(zhong)。
8) 從工作液中(zhong)取(qu)出印(yin)記膜(mo)，並置(zhi)於壹(yi)個塑料片或清潔的(de)塑(su)料紙（膜）中(zhong)，用(yong)壹(yi)張吸水(shui)紙(zhi)吸除(chu)多(duo)余 的(de)液(ye)體(ti)，並從印(yin)記和塑(su)料(liao)紙之間小(xiao)心地(di)壓(ya)出氣泡(pao)。
9) 將包(bao)在(zai)塑料(liao)紙（膜）中(zhong)的印(yin)記膜(mo)置(zhi)於膠(jiao)片(pian)暗(an)盒中(zhong)，蛋(dan)白質(zhi)面(mian)朝(chao)上(shang)，除適用(yong)於膠(jiao)片(pian)曝(pu)光(guang)的燈(deng)（如 紅色(se)安(an)全燈(deng)）之外，關(guan)閉所(suo)有的燈(deng)。
註(zhu)意：膠(jiao)片(pian)必(bi)須(xu)在曝(pu)光(guang)期間保(bao)持(chi)幹(gan)燥(zao)，為(wei)獲(huo)得優(you)良效(xiao)果，采取(qu)以下措(cuo)施：
* 確保(bao)將多(duo)余的(de)底(di)物(wu)從膜和塑(su)料(liao)紙上(shang)wan全去除(chu)。
* 在(zai)整個膠(jiao)片(pian)處(chu)理(li)期(qi)間，使(shi)用(yong)手(shou)套(tao)。
* 切(qie)莫將印(yin)記膜(mo)置(zhi)於已(yi)顯影的(de)膠(jiao)片(pian)上(shang)，因(yin)為(wei)膠(jiao)片(pian)上(shang)的化學(xue)物(wu)質(zhi)會(hui)減弱(ruo)信號(hao)。
10) 將X光(guang)膠(jiao)片(pian)置(zhi)於膜(mo)的上(shang)面。建(jian)議第壹(yi)次(ci)曝(pu)光(guang) 60 秒。之後可(ke)調(tiao)整曝(pu)光(guang)時(shi)間以達到優(you)良結果。化學(xue)發光反應在底物(wu)孵(fu)育後的前(qian) 5-30 分(fen)鐘(zhong)期(qi)間是(shi)zui強(qiang)烈的。這壹(yi)反(fan)應可(ke)以持(chi)續幾個小時(shi)，但強(qiang)度(du)會(hui)隨(sui)時(shi)間下(xia)降(jiang)，如有底物(wu)孵(fu)育後較長時(shi)間後(hou)曝(pu)光(guang)，曝(pu)光(guang)時(shi)間可(ke)能需(xu)要(yao)延長(chang)以獲(huo)得較強(qiang)信號(hao)。如果(guo)使(shi)用(yong) 磷(lin)光存儲成(cheng)像設備(bei)（如Bio-Rad的(de)分(fen)子(zi)成(cheng)像儀系(xi)統(tong)）或CCD 照相機(ji)可(ke)能需(xu)要(yao)較長的曝(pu)光(guang)時(shi)間。
註(zhu)意：膠(jiao)片(pian)與(yu)膜(mo)之間的(de)任(ren)何(he)移(yi)動(dong)可(ke)能在膠(jiao)片(pian)上(shang)造成(cheng)人為的(de)非特(te)異信號(hao)。 11) 使(shi)用(yong)合(he)適的(de)顯影劑和定(ding)影(ying)劑對膠(jiao)片(pian)進(jin)行(xing)顯影(ying)。如果(guo)信(xin)號(hao)太強(qiang)，則縮短(duan)曝(pu)光(guang)時(shi)間或將印(yin)記膜(mo)進(jin)行(xing) 剝(bo)離(li)並降(jiang)低抗(kang)體濃度(du)重新(xin)檢(jian)測。
重要(yao)提示：
1、為獲(huo)得優(you)良效(xiao)果，必(bi)須(xu)優化(hua)該(gai)系(xi)統(tong)的全部(bu)組分(fen)，包(bao)括(kuo)樣品量(liang)、壹抗(kang)和二(er)抗(kang)濃度(du)以及膜和封(feng)閉試(shi)劑的類(lei)型。
2、使用(yong)該(gai)產(chan)品比(bi)使用(yong)沈(chen)澱比色(se) HRP 底(di)物(wu)檢(jian)測所(suo)需(xu)的抗(kang)體濃度(du)低(di)。為(wei)優(you)化(hua)抗體濃度(du)，請(qing)進行(xing)壹次(ci) 系(xi)統的(de)點(dian)印(yin)跡分(fen)析。
3、沒(mei)有壹種(zhong)封(feng)閉試(shi)劑對所(suo)有系統(tong)而(er)言(yan)都是優良的，所(suo)以為每壹個免疫印(yin)跡檢(jian)測系統找到最(zui)合(he)適的(de) 封閉緩(huan)沖液非常必(bi)需(xu)。封閉試(shi)劑有可(ke)能與(yu)抗(kang)體(ti)產(chan)生(sheng)交(jiao)叉反(fan)應，導致出現(xian)非特(te)異性信(xin)號。封閉緩(huan)沖液同時(shi)也會影響系統(tong)的靈敏性。當(dang)從壹種(zhong)底(di)物(wu)轉(zhuan)換(huan)為(wei)另(ling)壹(yi)種底物(wu)時(shi)，有時(shi)會(hui)出現(xian)信號(hao)衰(shuai)減或背景增(zeng)加(jia) 的現(xian)象(xiang)，原(yuan)因(yin)可(ke)能是封(feng)閉緩(huan)沖液不適合(he)新(xin)的(de)檢(jian)測系統。
4、使用(yong)親(qin)和素(su)/生(sheng)物(wu)su檢(jian)測系統時(shi)，避(bi)免(mian)使用(yong)牛奶作為封(feng)閉試(shi)劑，因(yin)為(wei)牛奶中(zhong)含(han)有不定(ding)量(liang)的內(nei)源性生(sheng)物(wu)su，會(hui)導致高(gao)背(bei)景信(xin)號。
5、保(bao)證(zheng)洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液、封閉緩(huan)沖液、抗體溶液(ye)和底(di)物(wu)工(gong)作液的(de)使用(yong)體(ti)積，以確保(bao)在(zai)整個實驗過(guo)程中(zhong) 印(yin)跡膜(mo)wan全(quan)被液(ye)體覆(fu)蓋(gai)，避(bi)免(mian)膜變幹(gan)。增大封(feng)閉緩(huan)沖液及洗滌(di)緩(huan)沖液的使用(yong)量(liang)可(ke)以降(jiang)低非(fei)特(te)異性的(de) 信號。
6、為(wei)獲(huo)得優(you)良效(xiao)果，在孵育步驟(zhou)請(qing)使用(yong)搖床(chuang)。
7、 將 Tween20(終(zhong)濃度(du) 0.05-0.1%)加(jia)入封閉緩(huan)沖液和稀(xi)釋(shi)的抗體(ti)溶(rong)液，以降(jiang)低非(fei)特(te)異信號(hao)。使(shi)用(yong)高(gao)品質(zhi)的(de)產(chan)品，如去(qu)汙(wu)劑。它保(bao)存(cun)在安瓿中(zhong)，過(guo)氧化(hua)物(wu)和其他(ta)雜(za)質(zhi)含(han)量(liang)很低(di)。
8、不(bu)要(yao)使用(yong)疊(die)氮鈉(na)作為緩(huan)沖液的防腐劑。疊(die)氮鈉(na)是(shi) HRP 的抑(yi)制物(wu)。
9、避(bi)免(mian)手(shou)與(yu)膜(mo)直(zhi)接接(jie)觸(chu)，實驗(yan)過(guo)程應戴(dai)手(shou)套(tao)或使用(yong)幹(gan)凈的鑷(nie)子(zi)。
10、所(suo)有設備(bei)必(bi)須(xu)清潔(jie)且不沾(zhan)染(ran)外來物(wu)質(zhi)。金屬器(qi)械(xie)（如剪(jian)刀(dao)）不得具(ju)有可(ke)見(jian)的銹跡。銹跡可(ke)能導 致斑點(dian)形(xing)成(cheng)和高(gao)背(bei)景。
11、底(di)物(wu)工(gong)作液在(zai)室溫下(xia)可(ke)穩定8小時(shi)。日光(guang)或任(ren)何(he)其他(ta)強(qiang)光下(xia)可(ke)能損(sun)害(hai)底物(wu)，為(wei)獲(huo)得優(you)良結果，將底(di)物(wu)工(gong)作液保(bao)存(cun)在琥(hu)珀色(se)瓶(ping)中(zhong)，並避(bi)免(mian)長期暴(bao)漏在任(ren)何(he)強(qiang)光下(xia)，短(duan)時(shi)間暴(bao)漏於實(shi)驗室常規(gui)照(zhao)明不(bu)會損(sun)害(hai)該(gai)工(gong)作液。

West Femto ECL化(hua)學發光底物(wu)顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢(jian)測