SDS-PAGE電泳後(hou)，蛋白(bai)質(zhi)按照分子量(liang)大(da)小分離(li)，轉移(yi)到(dao)固(gu)相載(zai)體（例(li)如硝酸纖(xian)維(wei)素薄(bo)膜）後(hou)，固(gu)相載(zai)體以(yi)非(fei)共價(jia)鍵(jian)形式吸附蛋白(bai)質(zhi)，以(yi)固(gu)相載(zai)體上(shang)的蛋白(bai)質(zhi)或(huo)多(duo)肽作(zuo)為抗(kang)原(yuan)，與(yu)對應的(de)抗體起(qi)免(mian)疫反應(ying)，再與(yu)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)第(di)二(er)抗體起(qi)反(fan)應，加入發光底物後(hou)，能(neng)讓(rang)膠(jiao)片(pian)感(gan)光。經(jing)顯影(ying)和定影(ying)後(hou)，可(ke)以(yi)在(zai)膠(jiao)片(pian)上(shang)顯(xian)示(shi)出條(tiao)帶（抗(kang)原(yuan)所在位置(zhi)）。
ECL化(hua)學發光法(fa)檢(jian)測試(shi)劑盒(he) 顯(xian)色與(yu)信(xin)號檢(jian)測

ECL化(hua)學發光法(fa)檢(jian)測試(shi)劑盒(he) 顯(xian)色與(yu)信(xin)號檢(jian)測

NobleRyder  SW0898  ECL化(hua)學發光法(fa)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)（小鼠(shu)IgG）,Western blotting（小鼠(shu)IgG）

產(chan)品(pin)貨號(hao)：SW0898

產(chan)品(pin)名稱：ECL化(hua)學發光法(fa)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)（小鼠(shu)IgG）,Western blotting（小鼠(shu)IgG）

產(chan)品(pin)規(gui)格：1盒(he)

產(chan)品(pin)簡(jian)介(jie)：

英(ying)文名(ming)稱：Western blotting（小鼠(shu)IgG）

中文名(ming)稱：ECL化(hua)學發光法(fa)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)（小鼠(shu)IgG）

規(gui)格：1盒(he)

儲存(cun)條件(jian)：-20℃，avoid light，1 year

具體(ti)產(chan)品(pin)的參數(shu)以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)的(de)參數(shu)為準(zhun)

NobleRyder  SW0898  ECL化(hua)學發光法(fa)檢(jian)測試(shi)劑盒(he)（小鼠(shu)IgG）,Western blotting（小鼠(shu)IgG）產(chan)品(pin)簡(jian)介(jie)：

SDS-PAGE電泳後(hou)，蛋白(bai)質(zhi)按照分子量(liang)大(da)小分離(li)，轉移(yi)到(dao)固(gu)相載(zai)體（例(li)如硝酸纖(xian)維(wei)素薄(bo)膜）後(hou)，固(gu)相載(zai)體以(yi)非(fei)共價(jia)鍵(jian)形式吸附蛋白(bai)質(zhi)，以(yi)固(gu)相載(zai)體上(shang)的蛋白(bai)質(zhi)或(huo)多(duo)肽作(zuo)為抗(kang)原(yuan)，與(yu)對應的(de)抗體起(qi)免(mian)疫反應(ying)，再與(yu)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)第(di)二(er)抗體起(qi)反(fan)應，加入發光底物後(hou)，能(neng)讓(rang)膠(jiao)片(pian)感(gan)光。經(jing)顯影(ying)和定影(ying)後(hou)，可(ke)以(yi)在(zai)膠(jiao)片(pian)上(shang)顯(xian)示(shi)出條(tiao)帶（抗(kang)原(yuan)所在位置(zhi)）。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：(僅(jin)供參考)

常規(gui)電泳轉(zhuan)膜後(hou):

1) 清(qing)洗轉(zhuan)印(yin)膜：將膜剝(bo)離(li)下後(hou)，作(zuo)好標(biao)記(ji)，壹(yi)般在(zai)左上(shang)角剪(jian)壹(yi)缺(que)口(kou)。室溫(wen)用 TBS-T 漂洗 3 次每次(ci) 5min,以(yi)盡(jin)量(liang)洗 去(qu)轉印(yin)膜上的(de) SDS，防(fang)止(zhi)影(ying)響(xiang)後(hou)面(mian)的抗體(ti)結(jie)合。

2) 按 5g 封閉(bi)試(shi)劑加 100ml 雙蒸(zheng)水(shui)計(ji)，配制(zhi)膜封閉(bi)液(ye)，配(pei)好的膜封閉(bi)液(ye)為乳(ru)白色懸(xuan)液(ye)，將(jiang)漂洗過(guo)的(de)轉印膜放(fang)入(ru)封(feng)閉(bi)液(ye)內，置(zhi)搖床(chuang)孵(fu)育(yu)，室溫(wen)封閉(bi) 30min。用(yong) TBS-T 緩(huan)沖(chong)液(ye)（PH7.6）洗(xi)膜，室溫(wen)漂洗 3 次每次 5min。

3) 將10×抗體(ti)稀(xi)釋液(ye)用(yong)雙蒸(zheng)水(shui)稀(xi)釋成 1×（10ml 10×抗體稀(xi)釋液(ye)加入 90ml 雙蒸(zheng)水(shui)，混勻(yun)，可 4℃保存(cun)三個(ge)月）。此稀(xi)釋液(ye)可(ke)作(zuo)為壹(yi)抗和二抗(kang)的(de)稀(xi)釋液(ye)。

4) 用 1×的抗(kang)體(ti)稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋壹(yi)抗。根(gen)據用(yong)量(liang)以(yi)及壹(yi)抗的(de)推(tui)薦稀(xi)釋濃(nong)度(du)來(lai)稀(xi)釋壹(yi)抗。將(jiang)雜(za)交(jiao)膜放(fang)入(ru)雜(za)交(jiao)袋(dai)中，加入 壹(yi)抗工(gong)作(zuo)液(ye)，封(feng)口(kou)，4℃孵(fu)育(yu)過(guo)夜(ye)或 37℃搖動孵(fu)育(yu) 2h。此用過(guo)的(de)抗體壹(yi)般可(ke)回收(shou)第(di)二(er)天再使用(yong)壹(yi)次。註(zhu)：如果(guo)所 加壹(yi)抗不(bu)同，可在此步將(jiang)膜沿電泳方(fang)向剪(jian)成條，分別(bie)作(zuo)好標(biao)記(ji)，分(fen)開(kai)孵(fu)育(yu)。

5) 用 TBS-T 緩沖(chong)液(ye)（PH7.6）洗(xi)膜，室溫(wen)漂洗3次每次 5min。

6) 用 1×的抗(kang)體(ti)稀(xi)釋液(ye)稀(xi)釋二抗。根(gen)據用(yong)量(liang)，按10ml抗體稀(xi)釋液(ye)加入 1-2 ul HRP 標(biao)記(ji)二(er)抗(kang)的比例，配制(zhi)二(er)抗(kang)工(gong)作(zuo) 液(ye)。將(jiang)雜(za)交(jiao)膜放(fang)入(ru)雜(za)交(jiao)袋(dai)中，加入二抗工(gong)作(zuo)液(ye)，封(feng)口(kou)，37℃搖動孵(fu)育(yu) 1h。此用過(guo)的(de)抗體壹(yi)般可(ke)回收(shou)第(di)二(er)天再使用(yong) 壹(yi)次。

7) 用 TBS-T 緩沖(chong)液(ye)（PH7.6）洗(xi)膜，室溫(wen)漂洗3次每次10min。

8) 根(gen)據用(yong)量(liang)，取 ECL 發光液(ye) A、B 等量(liang)混勻(yun)，加在膜正面(mian)，暗(an)室顯色 1-5 分(fen)種(zhong)。傾(qing)去顯色液(ye)，小心(xin)用紙(zhi)吸去顯色液(ye)，在(zai)上面蓋(gai)壹(yi)層平(ping)整(zheng)的透(tou)明紙(zhi)。再取出感(gan)光膠(jiao)片(pian)，做(zuo)好標(biao)記(ji)，輕輕的放(fang)在(zai)膜上，顯(xian)色 30 秒(miao)到(dao) 1 分鐘(zhong)，取出膠(jiao)片(pian)浸入顯影(ying)液(ye)中，觀(guan)察顯(xian)色情(qing)況，再放(fang)入(ru)定(ding)影(ying)液(ye)中 1 分鐘(zhong)。根(gen)據條(tiao)帶強弱，再次感光時可(ke)減短或者加長(chang)感(gan)光時間（從(cong) 5 秒到(dao) 30 分鐘）以(yi)期(qi)達(da)到理想(xiang)結(jie)果。

註意事(shi)項(xiang)：

1. 請根(gen)據壹(yi)抗來(lai)源(yuan)選(xuan)擇試劑盒(he)。

2. 可以(yi)根(gen)據顯(xian)色結(jie)果來(lai)優(you)化(hua)實驗(yan)反(fan)應時間。如(ru)背景過(guo)深(shen)，可延(yan)長(chang)膜封閉(bi)時(shi)間，加長(chang)最(zui)終(zhong)漂洗次數(shu)與(yu)時間。如(ru)果條(tiao) 帶過(guo)弱(ruo)，可增加抗體濃(nong)度(du)，可延(yan)長(chang)抗(kang)體(ti)孵(fu)育(yu)時間或(huo)加長(chang)感(gan)光時間。

3. TBS-T（0.01M，PH7.6）配制(zhi)方(fang)法(fa)：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的(de)雙蒸(zheng)水(shui)溶解(jie)，用鹽酸調 PH 到 7.6， 再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸(zheng)水(shui) 加至 1000ml，混勻(yun)即(ji)可(ke)。（也可按照自己的(de)配制(zhi)習慣來(lai)配(pei)制(zhi)）

 ECL化(hua)學發光法(fa)檢(jian)測試(shi)劑盒(he) 顯(xian)色與(yu)信(xin)號檢(jian)測