SDS-PAGE電泳後，蛋白(bai)質按(an)照分(fen)子量(liang)大小(xiao)分離(li)，轉(zhuan)移(yi)到(dao)固相(xiang)載(zai)體(ti)（例(li)如硝酸纖(xian)維(wei)素薄(bo)膜(mo)）後，固相(xiang)載(zai)體(ti)以(yi)非共(gong)價(jia)鍵形式(shi)吸附蛋白(bai)質，以(yi)固相(xiang)載(zai)體(ti)上的(de)蛋白(bai)質或(huo)多肽作為抗(kang)原，與(yu)對(dui)應的(de)抗(kang)體起(qi)免疫反應，再與(yu)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)第二(er)抗(kang)體起(qi)反(fan)應(ying)，經(jing)過底(di)物(wu)顯(xian)色(se)以檢(jian)測電泳分離(li)的(de)特(te)異性(xing)的(de)蛋白(bai)。
諾(nuo)博萊(lai)德(de) DAB法(fa)顯(xian)色(se)試劑(ji)盒 顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢(jian)測

諾博萊(lai)德(de) DAB法(fa)顯(xian)色(se)試劑(ji)盒 顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢(jian)測

NobleRyder  SW9818  DAB法(fa)顯(xian)色(se)試劑(ji)盒（山羊(yang)IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產品貨(huo)號(hao)：SW9818

產(chan)品名(ming)稱(cheng)：DAB法(fa)顯(xian)色(se)試劑(ji)盒（山羊(yang)IgG）,Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產品規(gui)格：1盒

產品簡介：

英(ying)文(wen)名(ming)稱(cheng)：Western Blotting Goat IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

中文(wen)名(ming)稱(cheng)：DAB法(fa)顯(xian)色(se)試劑(ji)盒（山羊(yang)IgG）

規格：1盒

儲存條件(jian)：-20℃，avoid light，1 year

具(ju)體(ti)產品的(de)參(can)數(shu)以(yi)收到產(chan)品說明書(shu)的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

保存：

-20℃避光密(mi)閉(bi)保存，壹(yi)年(nian)有(you)效(xiao)。若(ruo)經(jing)常(chang)使用(yong)，可(ke)將封閉(bi)試(shi)劑(ji)，抗(kang)體稀釋(shi)液(ye)和(he) 20 倍(bei) DAB 顯(xian)色(se)液(ye)B 存放(fang)於 2-8℃以(yi)方(fang)便(bian)使用(yong)。

產品簡介：

SDS-PAGE電泳後，蛋白(bai)質按(an)照分(fen)子量(liang)大小(xiao)分離(li)，轉(zhuan)移(yi)到(dao)固相(xiang)載(zai)體(ti)（例(li)如硝酸纖(xian)維(wei)素薄(bo)膜(mo)）後，固相(xiang)載(zai)體(ti)以(yi)非共(gong)價(jia)鍵形式(shi)吸附蛋白(bai)質，以(yi)固相(xiang)載(zai)體(ti)上的(de)蛋白(bai)質或(huo)多肽作為抗(kang)原，與(yu)對(dui)應的(de)抗(kang)體起(qi)免疫反應，再與(yu)酶(mei)標(biao)記(ji)的(de)第二(er)抗(kang)體起(qi)反(fan)應(ying)，經(jing)過底(di)物(wu)顯(xian)色(se)以檢(jian)測電泳分離(li)的(de)特(te)異性(xing)的(de)蛋白(bai)。

操作步(bu)驟(zhou)：(僅供參(can)考(kao))

常(chang)規(gui)電泳轉(zhuan)膜(mo)後:

1) 清(qing)洗(xi)轉(zhuan)印膜(mo)：將(jiang)膜(mo)剝離(li)下後，作好標(biao)記，壹(yi)般在左(zuo)上角(jiao)剪(jian)壹(yi)缺(que)口(kou)。室(shi)溫(wen)用(yong) TBS-T 漂洗(xi) 3 次每(mei)次 5min, 以盡(jin)量(liang)洗(xi)去(qu)轉(zhuan)印膜(mo)上的(de) SDS，防(fang)止(zhi)影響(xiang)後面的(de)抗(kang)體結(jie)合(he)。

2) 按(an) 5g 封閉(bi)試(shi)劑(ji)加(jia)100ml 雙蒸水計(ji)，配(pei)制膜(mo)封(feng)閉(bi)液(ye)，配好的(de)膜(mo)封(feng)閉(bi)液(ye)為乳(ru)白(bai)色(se)懸(xuan)液(ye)，將漂(piao)洗(xi)過的(de)轉(zhuan)印膜(mo)，封(feng)閉(bi)液(ye)內(nei)，搖(yao)床(chuang)震動(dong)，室溫(wen)封閉(bi) 30min。用(yong) TBS-T ，PH7.6 洗(xi)液(ye)，室溫(wen)漂洗(xi) 3 次每(mei)次 5min。

3) 將 10×抗(kang)體稀釋(shi)液(ye)用(yong)雙蒸水稀釋(shi)成(cheng) 1×（10ml 10×抗(kang)體稀釋(shi)液(ye)加(jia)入(ru) 90ml 雙蒸水，混勻，可(ke) 4℃ 保存三(san)個月(yue)）。此稀釋(shi)液(ye)可(ke)作為壹(yi)抗(kang)和(he)二(er)抗(kang)的(de)稀釋(shi)液(ye)。

4) 用(yong) 1×的(de)抗(kang)體稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)抗(kang)體。根據用(yong)量(liang)以(yi)及(ji)壹(yi)抗(kang)的(de)推(tui)薦(jian)稀釋(shi)濃(nong)度來稀釋(shi)壹(yi)抗(kang)。將雜交膜(mo)放(fang)入(ru)雜交袋中(zhong)，加(jia)入(ru)壹(yi)抗(kang)工作液(ye)，封口(kou)，4℃孵(fu)育(yu)過夜或(huo) 37℃搖(yao)動(dong)孵育(yu) 2h。此(ci)用(yong)過的(de)抗(kang)體壹(yi)般可(ke)回收第二(er) 天再使用(yong)壹(yi)次。註：如果所加(jia)壹(yi)抗(kang)不同，可(ke)在此(ci)步(bu)將(jiang)膜(mo)沿電泳方向剪(jian)成(cheng)條，分別作好標(biao)記，分開孵育(yu)。

5) 用(yong) TBS-T，PH7.6洗(xi)液(ye)，室溫(wen)漂洗(xi) 3 次每(mei)次 5min。

6) 用(yong)稀釋(shi)好的(de)抗(kang)體稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)抗(kang)體。根據用(yong)量(liang)，按(an) 10ml 抗(kang)體稀釋(shi)液(ye)加(jia)入(ru) 1-2ul HRP 標記二(er)抗(kang)的(de)比(bi)例(li)，配(pei)制二(er)抗(kang)工作液(ye)。將雜交膜(mo)放(fang)入(ru)雜交袋中(zhong)，加(jia)入(ru)二抗(kang)工作液(ye)，封口(kou)，37℃搖(yao)動(dong)孵育(yu) 1h。此(ci)用(yong)過的(de)抗(kang)體壹(yi)般可(ke)回收第二(er)天再使用(yong)壹(yi)次。

7) 用(yong) TBS-T ，PH7.6 洗(xi)液(ye)，室溫(wen)漂洗(xi) 3 次每(mei)次 10min。

8) 配制 DAB 顯(xian)色(se)：根據用(yong)量(liang)，取(qu) TBS-T 4ml，加(jia)入(ru) DAB 顯(xian)色(se)液(ye) A、DAB 顯(xian)色(se)液(ye) B 各200ul，混勻，加(jia) 在膜(mo)正(zheng)面(mian)，室溫(wen)下顯(xian)色(se)。在目(mu)標條帶顯(xian)出(chu)後，而且背(bei)景未(wei)出(chu)時，放(fang)入(ru)水中終止(zhi)顯(xian)色(se)。

註意事項：

1. 請(qing)根據壹(yi)抗(kang)來源選(xuan)擇(ze)試劑(ji)盒。

2. western blotting DAB 顯(xian)色(se)法(fa)操作簡單，但(dan)其(qi)敏(min)感性(xing)與(yu) ECL 發(fa)光發(fa)有(you)壹(yi)定(ding)的(de)差距(ju)，壹(yi)般只(zhi)適(shi)用(yong)於豐 度較(jiao)高(gao)的(de)蛋白(bai)。

3. 可(ke)以根據顯(xian)色(se)結(jie)果(guo)來(lai)優化實(shi)驗(yan)反應(ying)時間。如背(bei)景過深，可(ke)延長膜(mo)封(feng)閉(bi)時間，加(jia)長最(zui)終漂(piao)洗(xi)次數(shu)與(yu) 時間。如果條帶過弱，可(ke)延長抗(kang)體孵育(yu)時間。

4. 如果wan全(quan)沒(mei)有(you)條帶，請(qing)檢(jian)查(zha)前(qian)期蛋白(bai)處(chu)理及(ji)實(shi)驗(yan)過程， 如果確認無誤(wu)，反復兩(liang)次依舊無結(jie)果(guo)， 請(qing)換(huan)用(yong) ECL 發(fa)光法(fa)顯(xian)色(se)。

5. TBS-T（0.01M）配制方(fang)法(fa)：稱(cheng)取(qu) NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用(yong) 800ml 的(de)雙(shuang)蒸水溶解，用(yong)鹽酸(suan)調 PH 到(dao) 7.6，再加(jia)入(ru) 0.5ml Tween－20，用(yong)雙蒸水 加(jia)至 1000ml，混勻即(ji)可(ke)。（也可(ke)按(an)照自(zi)己的(de)配(pei)制習慣來配(pei)制）

 諾博萊(lai)德(de) DAB法(fa)顯(xian)色(se)試劑(ji)盒 顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢(jian)測