SDS-PAGE電泳(yong)後，蛋白質按照分子(zi)量(liang)大小分離，轉移到(dao)固相(xiang)載體（例如硝酸(suan)纖維素(su)薄(bo)膜(mo)）後， 固相(xiang)載體以非共(gong)價鍵形(xing)式吸(xi)附蛋白質，以固相(xiang)載體上(shang)的蛋白質或(huo)多肽(tai)作為(wei)抗(kang)原，與對應的抗體(ti)起(qi)免(mian) 疫(yi)反應，再(zai)與酶標記(ji)的第二抗體起反應，經(jing)過底(di)物(wu)顯(xian)色(se)以檢測(ce)電(dian)泳(yong)分離的特異性的蛋白。
諾(nuo)博萊(lai)德 DAB法(fa)顯(xian)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he) 顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢測(ce)

諾(nuo)博萊(lai)德 DAB法(fa)顯(xian)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he) 顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢測(ce)

NobleRyder  SW9828  DAB法(fa)顯(xian)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)（小鼠(shu)/兔(tu)IgG）,Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產(chan)品貨(huo)號(hao)：SW9828

產(chan)品名(ming)稱：DAB法(fa)顯(xian)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)（小鼠(shu)/兔(tu)IgG）,Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產(chan)品規(gui)格：1盒

產(chan)品簡介：

英(ying)文(wen)名(ming)稱：Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

中(zhong)文(wen)名(ming)稱：DAB法(fa)顯(xian)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he)（小鼠(shu)/兔(tu)IgG）

規(gui)格：1盒

儲(chu)存條(tiao)件(jian)：-20℃，avoid light，1 year

具(ju)體(ti)產品的參數以收(shou)到(dao)產品(pin)說(shuo)明書的參數為(wei)準

保(bao)存：

-20℃避(bi)光密(mi)閉(bi)保(bao)存，壹年(nian)有效(xiao)。若經(jing)常(chang)使(shi)用，可將封(feng)閉(bi)試(shi)劑(ji)，抗(kang)體(ti)稀釋液和 20 倍(bei) DAB 顯(xian)色(se)液B 存(cun)放於 2-8℃以方便使用。

產(chan)品簡介：

SDS-PAGE電(dian)泳(yong)後，蛋白質按照分子(zi)量(liang)大小分離，轉移到(dao)固相(xiang)載體（例如硝酸(suan)纖維素(su)薄(bo)膜(mo)）後， 固相(xiang)載體以非共(gong)價鍵形(xing)式吸(xi)附蛋白質，以固相(xiang)載體上(shang)的蛋白質或(huo)多肽(tai)作為(wei)抗(kang)原，與對應的抗體(ti)起(qi)免(mian) 疫(yi)反應，再(zai)與酶標記(ji)的第二抗體起反應，經(jing)過底(di)物(wu)顯(xian)色(se)以檢測(ce)電(dian)泳(yong)分離的特異性的蛋白。

操(cao)作步驟(zhou)：(僅(jin)供參考)

常(chang)規電(dian)泳(yong)轉膜後:

1) 清(qing)洗(xi)轉印膜(mo)：將膜(mo)剝(bo)離下後，作好(hao)標記(ji)，壹般(ban)在(zai)左(zuo)上(shang)角剪壹缺(que)口(kou)。室溫(wen)用 TBS-T 漂洗(xi) 3 次每(mei)次 5min, 以盡量(liang)洗(xi)去(qu)轉印膜(mo)上(shang)的 SDS，防止(zhi)影(ying)響後面的抗體(ti)結(jie)合。

2) 按 5g 封(feng)閉(bi)試(shi)劑(ji)加(jia) 100ml 雙(shuang)蒸(zheng)水(shui)計(ji)，配(pei)制膜封(feng)閉(bi)液，配(pei)好的膜封(feng)閉(bi)液為(wei)乳白色(se)懸液，將漂(piao)洗(xi)過(guo)的轉印膜(mo)，封(feng)閉(bi)液內，搖(yao)床(chuang)震(zhen)動(dong)，室溫(wen)封(feng)閉(bi) 30min。用 TBS-T ，PH7.6 洗(xi)液，室(shi)溫漂(piao)洗(xi) 3 次每(mei)次 5min。

3) 將 10×抗(kang)體(ti)稀釋液用雙蒸水(shui)稀釋成(cheng) 1×（10ml 10×抗體(ti)稀釋液加(jia)入 90ml 雙(shuang)蒸水(shui)，混(hun)勻(yun)，可 4℃ 保(bao)存三(san)個月(yue)）。此(ci)稀釋液可作(zuo)為壹抗(kang)和二抗的稀釋液。

4) 用 1×的抗體(ti)稀釋液稀釋抗(kang)體。根(gen)據用量(liang)以及(ji)壹抗(kang)的推薦(jian)稀釋濃(nong)度來(lai)稀釋壹抗(kang)。將雜(za)交(jiao)膜(mo)放入雜(za)交袋(dai)中(zhong)，加入壹抗(kang)工(gong)作液，封(feng)口(kou)，4℃孵育(yu)過夜(ye)或 37℃搖(yao)動(dong)孵育(yu) 2h。此(ci)用過的抗體(ti)壹般(ban)可回(hui)收(shou)第二天再使用壹次。

註(zhu)：如果(guo)所(suo)加(jia)壹抗(kang)不同(tong)，可在(zai)此步將膜(mo)沿電(dian)泳(yong)方(fang)向(xiang)剪(jian)成(cheng)條(tiao)，分別(bie)作(zuo)好標記(ji)，分開(kai)孵(fu)育。

5) 用 TBS-T，PH7.6 洗(xi)液，室(shi)溫漂(piao)洗(xi) 3 次每(mei)次 5min。

6) 用稀釋好(hao)的抗體(ti)稀釋液稀釋抗(kang)體。根(gen)據用量(liang)，按 10ml 抗(kang)體稀釋液加(jia)入 1-2ul HRP 標(biao)記(ji)二抗的比(bi)例(li)， 配(pei)制二抗工(gong)作液。將雜(za)交(jiao)膜(mo)放入雜(za)交袋(dai)中(zhong)，加入二抗工(gong)作液，封(feng)口(kou)，37℃搖(yao)動(dong)孵育(yu) 1h。此(ci)用過的抗體(ti)壹般(ban)可回(hui)收(shou)第二天再使用壹次。

7) 用 TBS-T ，PH7.6 洗(xi)液，室(shi)溫漂(piao)洗(xi)3次每(mei)次 10min。

8) 配(pei)制 DAB 顯(xian)色(se)：根(gen)據用量(liang)，取(qu) TBS-T 4ml，加(jia)入 DAB 顯(xian)色(se)液 A、DAB 顯(xian)色(se)液 B 各(ge) 200ul，混(hun)勻(yun)，加 在膜正面，室(shi)溫下(xia)顯(xian)色(se)。在(zai)目標(biao)條帶(dai)顯(xian)出(chu)後，而且(qie)背景未(wei)出(chu)時(shi)，放入水(shui)中(zhong)終(zhong)止(zhi)顯(xian)色(se)。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：

1. 請(qing)根(gen)據壹抗(kang)來(lai)源(yuan)選擇試(shi)劑(ji)盒(he)。

2. western blotting DAB 顯(xian)色(se)法(fa)操(cao)作簡單，但其敏(min)感性與(yu) ECL 發光(guang)發有壹定的差距(ju)，壹般(ban)只(zhi)適(shi)用於豐(feng)度較(jiao)高(gao)的蛋白。

3. 可以根(gen)據顯(xian)色(se)結(jie)果(guo)來(lai)優(you)化實驗反應時(shi)間。如(ru)背景過(guo)深，可延(yan)長膜(mo)封(feng)閉(bi)時(shi)間，加(jia)長最終(zhong)漂(piao)洗(xi)次數(shu)與(yu)時(shi)間。如(ru)果(guo)條(tiao)帶(dai)過(guo)弱，可延(yan)長抗(kang)體孵(fu)育時(shi)間。

4. 如(ru)果(guo)wan全(quan)沒有條帶，請(qing)檢查(zha)前(qian)期蛋白處(chu)理及(ji)實驗過程， 如(ru)果(guo)確認無(wu)誤(wu)，反復兩(liang)次依(yi)舊(jiu)無(wu)結果(guo)， 請(qing)換(huan)用 ECL 發光(guang)法顯(xian)色(se)。

5. TBS-T（0.01M）配(pei)制方(fang)法：稱取(qu) NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸(zheng)水(shui)溶(rong)解，用鹽(yan)酸調(tiao) PH 到(dao) 7.6，再加(jia)入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水(shui) 加(jia)至(zhi) 1000ml，混(hun)勻(yun)即可。（也可按照自己的配制(zhi)習(xi)慣(guan)來配(pei)制）

諾(nuo)博萊(lai)德 DAB法(fa)顯(xian)色(se)試(shi)劑(ji)盒(he) 顯(xian)色(se)與(yu)信(xin)號(hao)檢測(ce)