磷酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)用於哺乳(ru)動物(wu)組(zu)織和細胞中(zhong)提(ti)取(qu)總(zong)蛋白(bai)，試(shi)劑盒(he)中(zhong)的裂解液含有(you)蛋白(bai)酶(mei)抑制劑和磷(lin)酸(suan)酶(mei)抑制劑，作用較(jiao)為強烈，可(ke)快速獲(huo)得總(zong)蛋白(bai)，可(ke)用於免疫(yi)印跡實(shi)驗等基(ji)礎研(yan)究實(shi)驗，由(you)於含(han)有(you)上述(shu)的酶(mei)抑制劑，不(bu)能用(yong)於研(yan)究蛋白(bai)激酶(mei)和磷(lin)酸(suan)激酶(mei)的(de)研(yan)究
諾博萊(lai)德(de) 磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)

諾博萊(lai)德(de) 磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he) 

NobleRyder  BC1518 磷酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)

產品(pin)貨號：BC1518

產品(pin)名稱：磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)

產品(pin)規格(ge)：50T / 100T

產品(pin)簡介(jie)：

中(zhong)文名稱：磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)

規格：50T ; 100T

儲存條(tiao)件：-20℃，avoid light，at least 1 year

具體產品(pin)的參數以收到(dao)產品(pin)說明(ming)書的參數為準

NobleRyder  BC1518 磷酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)產品(pin)介紹

磷酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)用於哺乳(ru)動物(wu)組(zu)織和細胞中(zhong)提(ti)取(qu)總(zong)蛋白(bai)，試(shi)劑盒(he)中(zhong)的裂解液含有(you)蛋白(bai)酶(mei)抑制劑和磷(lin)酸(suan)酶(mei)抑制劑，作用較(jiao)為強烈，可(ke)快速獲(huo)得總(zong)蛋白(bai)，可(ke)用於免疫(yi)印跡實(shi)驗等基(ji)礎研(yan)究實(shi)驗，由(you)於含(han)有(you)上述(shu)的酶(mei)抑制劑，不(bu)能用(yong)於研(yan)究蛋白(bai)激酶(mei)和磷(lin)酸(suan)激酶(mei)的(de)研(yan)究。本(ben)品(pin)僅用(yong)於科(ke)研(yan)。

產品(pin)組成(cheng)：

操作方法:
在 1mL 的冷裂解液中(zhong)各(ge)加入(ru) 10µL 的磷(lin)酸(suan)酶(mei)抑制劑、蛋白(bai)酶(mei)抑制劑和 PMSF；混勻，放置(zhi)在冰上備(bei) 用；

1、組織總(zong)蛋白(bai)的提(ti)取(qu)

1) 稱取 0.1g 的新(xin)鮮(xian)組(zu)織，放置(zhi)於玻(bo)璃(li)勻漿(jiang)器(qi)的(de)入(ru)口(kou)緩(huan)沖處(chu)，用眼(yan)科(ke)剪(jian)將組織塊(kuai)盡(jin)可(ke)能的(de)剪(jian)碎(sui)，然(ran) 後加入(ru) 0.5-1mL 的新(xin)配(pei)置(zhi)的(de)裂解液，研(yan)磨直至(zhi)沒有(you)明(ming)顯的組織(zhi)塊(kuai)，這(zhe)個過(guo)程(cheng)註(zhu)意(yi)冰上操(cao)作；

2) 將組織勻(yun)漿(jiang)液移入(ru) 1.5mL 的 EP 管中(zhong)，4 ℃ 12000g 離心(xin) 30min；

3) 吸取(qu)上清(qing)至新(xin)的(de)管中(zhong)；

4) 進(jin)行蛋白(bai)定量(liang)或者變(bian)性進(jin)行蛋白(bai)實驗。 （提(ti)取(qu)好(hao)的蛋白(bai)建議保(bao)存(cun)於-80℃，即(ji)用(yong)即取，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，避(bi)免長時(shi)間(jian)儲存。）

2、細胞總(zong)蛋白(bai)的提(ti)取(qu)

1) 裂解液的用量：10⁷個細胞需要裂解液 1mL；

2) 貼壁(bi)細胞：棄去培(pei)養(yang)基(ji)，用冷(leng)的(de) PBS 洗(xi)兩次(ci)，棄去 PBS，然(ran)後(hou)加入(ru)計算好(hao)的細胞裂解液；在冰上用(yong)細胞刮(gua)刀(dao)進(jin)行刮(gua)離細胞，將刮(gua)離的(de)細胞裂解液移入(ru) EP 管中(zhong)，顛倒裂解 20-30min。

3) 懸浮細胞：4℃ 400g 離心(xin)收集(ji)細胞，用冷的 PBS 洗(xi)兩(liang)次(ci)細胞，同樣按細胞數加入(ru)裂解液，渦(wo)旋(xuan)10s，放置(zhi)冰上裂解 10min，重復(fu) 3-4 次(ci)；

4) 裂解完畢(bi)之(zhi)後，將細胞裂解液 4 ℃12000g 離心(xin) 30min；

5) 將上清(qing)移入(ru)新(xin)的(de) EP 管中(zhong)；進(jin)行蛋白(bai)定量(liang)或者變(bian)性進(jin)行蛋白(bai)實驗。 （提(ti)取(qu)好(hao)的蛋白(bai)建議保(bao)存(cun)於-80℃，即(ji)用(yong)即取，避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，避(bi)免長時(shi)間(jian)儲存。）

註意(yi)事項(xiang)：
1、實驗過程(cheng)，所(suo)有(you)試(shi)劑都(dou)要需(xu)要(yao)預(yu)冷(leng)或(huo)者(zhe)即融(rong)，保證(zheng)操作過程(cheng)中(zhong)的低溫(wen)環(huan)境；2、PSMF（有(you)毒）現用現加，因為PMSF在水(shui)溶(rong)液中(zhong)會快速(su)降(jiang)解；

諾博萊(lai)德(de) 磷(lin)酸(suan)化(hua)蛋白(bai)提(ti)取(qu)試(shi)劑盒(he)