溶酶體是(shi)由壹(yi)層單位膜(mo)包圍，內(nei)含(han)多(duo)種酸(suan)性(xing)水(shui)解酶(mei)的(de)泡(pao)狀(zhuang)結構(gou)。溶酶體含(han)有(you) 40 多(duo)種水(shui)解(jie) 酶(mei)，其中包括(kuo)蛋白(bai)酶(mei)、核酸(suan)降解酶和糖苷酶(mei)等。其(qi)主要功能是(shi)對(dui)細(xi)胞內物(wu)質的(de)消化作(zuo)用(yong)。此(ci) 外溶酶體與(yu)器(qi)官形(xing)成、激(ji)素分(fen)泌的(de)調節(jie)以及(ji)某(mou)些(xie)疾(ji)病(bing)的(de)發(fa)生(sheng)密(mi)切(qie)相(xiang)關。
諾博萊(lai)德 溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒

諾博萊(lai)德 溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒

NobleRyder  EX9018 溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒

產品貨(huo)號(hao)：EX9018

產品名(ming)稱：溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒

產品規(gui)格：50T /100T

產品簡(jian)介：

中文名稱(cheng)：溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒

規格：50T ; 100T

儲(chu)存(cun)條(tiao)件：2-8℃，1 year

具體產品的(de)參(can)數(shu)以(yi)收(shou)到(dao)產品說(shuo)明(ming)書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準

NobleRyder  EX9018 溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒產品介(jie)紹

適(shi)用樣(yang)本(ben)：動物細(xi)胞/組織(zhi)

產品介(jie)紹

溶酶體是(shi)由壹(yi)層單位膜(mo)包圍，內(nei)含(han)多(duo)種酸(suan)性(xing)水(shui)解酶(mei)的(de)泡(pao)狀(zhuang)結構(gou)。溶酶體含(han)有(you) 40 多(duo)種水(shui)解(jie) 酶(mei)，其中包括(kuo)蛋白(bai)酶(mei)、核酸(suan)降解酶和糖苷酶(mei)等。其(qi)主要功能是(shi)對(dui)細(xi)胞內物(wu)質的(de)消化作(zuo)用(yong)。此(ci) 外溶酶體與(yu)器(qi)官形(xing)成、激(ji)素分(fen)泌的(de)調節(jie)以及(ji)某(mou)些(xie)疾(ji)病(bing)的(de)發(fa)生(sheng)密(mi)切(qie)相(xiang)關。

溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒提(ti)供(gong)全套(tao)試劑，可(ke)用(yong)於(yu)各種動物細(xi)胞和實(shi)體 軟(ruan)、硬(ying)組(zu)織(zhi)樣(yang)本(ben)的(de)溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)。適(shi)用於(yu)從各種原代(dai)或(huo)傳(chuan)代(dai)細(xi)胞和各種實(shi)體組(zu)織(zhi)，如(ru)腦、 脊髓(sui)、神(shen)經結(jie)或纖維(wei)、脂(zhi)肪(fang)、肝臟(zang)、消化道、腎臟(zang)、心(xin)臟(zang)、肌肉、血管、結(jie)締組織(zhi)等動物組 織(zhi)中提(ti)取(qu)溶酶體總(zong)蛋白(bai)。

本試(shi)劑(ji)盒含有(you)的(de)du特(te)配方能夠有(you)效(xiao)溶解膜(mo)組份(fen)。本試(shi)劑盒含有(you)的(de)蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑混合(he)物，阻 止(zhi)了(le)蛋白(bai)酶(mei)對(dui)蛋白(bai)的(de)降解，為(wei)提(ti)取(qu)高純度(du)的(de)蛋白(bai)提(ti)供(gong)了(le)保證。 

本試(shi)劑(ji)盒提(ti)取(qu)的(de)蛋白(bai)可(ke)用(yong)於(yu) Western Blotting、蛋白(bai)質(zhi)電(dian)泳(yong)、免(mian)疫沈澱(dian)、ELISA、轉(zhuan)錄(lu)活性(xing) 分(fen)析(xi)、Gel shift 凝膠阻(zu)滯實(shi)驗、酶活性(xing)測(ce)定等下(xia)遊(you)蛋白(bai)研(yan)究實(shi)驗。 

本試(shi)劑(ji)盒提(ti)取(qu)的(de)蛋白(bai)為(wei)具有(you)天然蛋白(bai)構(gou)象的(de)活(huo)性蛋白(bai)。

使用(yong)前請註意(yi)：

1. 蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑未開(kai)蓋使(shi)用前也(ye)可(ke)以(yi)2-8℃儲(chu)存(cun)。開(kai)蓋使(shi)用後(hou)-20℃儲(chu)存(cun)。

2. 蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑在2-8℃低(di)溫(wen)時(shi)是(shi)固體狀(zhuang)態(tai)，從冰箱取(qu)出(chu)後恢復(fu)至(zhi)室溫(wen)或(huo)37℃短(duan)時(shi)間(jian)水(shui)浴，變(bian)成(cheng)液體狀(zhuang)態(tai) 後離心(xin)至(zhi)管底(di)部再開(kai)蓋。

3. 試劑(ji)拆封(feng)後請(qing)盡快(kuai)使用完！

自(zi)備(bei)試劑和儀(yi)器(qi)：

離心(xin)機(ji)、振(zhen)蕩(dang)器(qi)、勻(yun)漿(jiang)機(ji)/勻(yun)漿(jiang)器(qi)、渦(wo)旋(xuan)混勻(yun)器(qi)、移(yi)液器、冰(bing)箱、冰(bing)盒(he)，PBS緩沖液、蛋白(bai)定(ding)量(liang)試(shi)劑盒， 離(li)心(xin)管、吸(xi)頭、壹(yi)次性手套(tao)。

產品特(te)點(dian)：

1. 使用(yong)方便，從(cong)細(xi)胞，組織(zhi)中提(ti)取(qu)蛋白(bai)不需(xu)經過研(yan)磨(mo)、反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)、超聲破碎(sui)等前處理。

2. 提(ti)取(qu)過程簡單方便。

3. 含蛋白(bai)穩(wen)定(ding)劑，提(ti)取(qu)的(de)蛋白(bai)穩(wen)定(ding)。

4. 紫(zi)外(wai)檢測(ce)蛋白(bai)濃度時(shi)，背景幹擾(rao)低。

5. 總蛋白(bai)提(ti)取(qu)液含多(duo)種有(you)效(xiao)成分(fen)，可(ke)以(yi)充(chong)分(fen)釋(shi)放(fang)胞漿(jiang)蛋白(bai)、核蛋白(bai)和膜(mo)蛋白(bai)，又(you)可(ke)結(jie)合(he)釋(shi)出的(de)蛋白(bai)防(fang)止(zhi) 沈澱(dian)。

6. 蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑抑制(zhi)了(le)蛋白(bai)的(de)降解，蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑配方優化。蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑混合(he)物包含(han)6種(zhong)獨立(li)的(de)蛋白(bai) 酶(mei)抑制(zhi)劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、PepstatinA、Bestatin、E-64，每壹(yi)種抑制(zhi)劑可(ke)特(te)異(yi)性(xing)抑制(zhi)某 壹(yi)種或幾(ji)種蛋白(bai)酶(mei)活(huo)性。該混合(he)物優化的(de)組(zu)成使其可(ke)以(yi)抑制(zhi)幾(ji)乎(hu)所(suo)有重(zhong)要的(de)蛋白(bai)酶(mei)活(huo)性，包括(kuo)si氨酸(suan) 蛋白(bai)酶(mei)、半(ban)guang氨(an)酸(suan)蛋白(bai)酶(mei)、天(tian)冬氨酸(suan)蛋白(bai)酶(mei)、丙(bing)氨酰(xian)-氨(an)基肽(tai)酶等。

操作(zuo)步驟：

壹(yi)、使用註意(yi)事項

1. 正(zheng)式(shi)實(shi)驗前請選取幾(ji)個樣(yang)本(ben)做(zuo)預(yu)實(shi)驗，以優化實(shi)驗條(tiao)件，取(qu)得優良實(shi)驗效(xiao)果(guo)

2. 螺旋(xuan)蓋(gai)微(wei)量(liang)試(shi)劑管裝(zhuang)的(de)試(shi)劑在開(kai)蓋前請短暫離心，將蓋(gai)和管內(nei)壁(bi)上的(de)液體離(li)心(xin)至(zhi)管底(di)，避免(mian)開(kai)蓋時(shi)試(shi) 劑(ji)損(sun)失(shi)。

3. 實(shi)驗過程中的(de)所(suo)有試(shi)劑須預(yu)冷；所(suo)有器(qi)具須放(fang)-20℃冰(bing)箱預(yu)冷。整個過程須保持(chi)樣(yang)品(pin)處於(yu)低溫(wen)。

4. 蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑儲(chu)存(cun)期間溶液如果(guo)出現沈澱(dian)，不影響(xiang)使(shi)用(yong)，溶解後正(zheng)常使用。

5. 如果(guo)試劑盒不能短時(shi)間(jian)內(nei)用(yong)完，蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑混合(he)物不可(ke)以(yi)壹(yi)次全部加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液。

6. 可(ke)以(yi)根據(ju)自(zi)己實(shi)驗需要加(jia)入(ru)其(qi)它(ta)蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑單品。

7. 下遊(you)實(shi)驗如果(guo)是(shi)進行(xing)特(te)定(ding)蛋白(bai)酶(mei)或(huo)磷酸(suan)酶(mei)的(de)酶(mei)活性檢測(ce)，提(ti)取(qu)液可(ke)以(yi)不加(jia)蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑或磷酸(suan)酶(mei)抑制(zhi) 劑，註意(yi)提(ti)取(qu)過程保持(chi)低溫(wen)操作(zuo)，縮(suo)短(duan)離(li)心時(shi)間(jian)。

8. 禁(jin)止(zhi)與其他(ta)品(pin)牌(pai)的(de)試(shi)劑混用，否(fou)則會影響(xiang)使(shi)用(yong)效(xiao)果(guo)。

9. 樣(yang)品(pin)或(huo)試劑被(bei)細(xi)菌或真(zhen)菌汙(wu)染或(huo)試(shi)劑交(jiao)叉(cha)汙(wu)染可(ke)能會導(dao)致(zhi)錯誤的(de)結(jie)果(guo)。

二、溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)

提(ti)取(qu)液準備(bei)：

每200μL冷的(de)蛋白(bai)提(ti)取(qu)液C中加(jia)入(ru)2μL蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑混合(he)物，混勻(yun)後(hou)置(zhi)冰(bing)上備(bei)用。

細(xi)胞溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)

1. 取1-2×107個細(xi)胞，在4℃，500×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)2-3min，小心吸(xi)取培養(yang)基，盡可(ke)能吸幹(gan)，收(shou)集(ji)細(xi)胞。

2. 用冷PBS洗滌(di)兩(liang)次，每次洗滌(di)後盡可(ke)能吸幹(gan)上清(qing)。

3. 加(jia)入(ru)500μL-1000μL冷的(de)試(shi)劑A，置冰上振(zhen)蕩(dang)10min。

4. 用Dounce勻(yun)漿(jiang)器(qi)勻(yun)漿(jiang)30-40下(xia)。

5. 在4℃，1000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)5min，棄(qi)沈澱(dian)，留(liu)上清(qing)。

6. 將上清(qing)在(zai)4℃，4000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)10min，棄(qi)沈澱(dian)，留(liu)上清(qing)。

7. 將上清(qing)在(zai)4℃，20000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)20min，棄(qi)上清(qing)，留(liu)沈澱(dian)。

8. 在沈澱(dian)中加(jia)入(ru)500μL冷的(de)試(shi)劑B，混勻(yun)。

9. 在4℃，20000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)20min，棄(qi)上清(qing)，留(liu)沈澱(dian)。

10. 在沈澱(dian)中加(jia)入(ru)100-200μL蛋白(bai)提(ti)取(qu)液C，充(chong)分(fen)混勻(yun)。

11. 輕微(wei)振(zhen)蕩(dang)15-30min。

12. 在4℃，12000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)15min。

13. 將上清(qing)吸(xi)入(ru)另(ling)壹(yi)預冷的(de)幹(gan)凈(jing)離心(xin)管，即(ji)得到(dao)溶酶體總(zong)蛋白(bai)。

14. 將上述(shu)蛋白(bai)提(ti)取(qu)物定量(liang)後(hou)分裝於(yu)-80℃冰箱保存(cun)備(bei)用或直接用於(yu)下遊(you)實(shi)驗。

組織(zhi)溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)：

1. 取50-100mg新鮮動物組織(zhi)樣(yang)本(ben)，用(yong)PBS洗滌(di)幹凈(jing)。

2. 用剪(jian)刀(dao)盡可(ke)能剪碎(sui)，用(yong)冷PBS洗滌(di)兩(liang)次。

3. 加(jia)入(ru)500μL-1000μL冷的(de)試(shi)劑A，置冰上10min。

4. 用Dounce勻(yun)漿(jiang)器(qi)勻(yun)漿(jiang)30-40下(xia)，至(zhi)無(wu)明(ming)顯可(ke)見(jian)固體。

5. 在4℃，1000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)5min，棄(qi)沈澱(dian)，留(liu)上清(qing)。

6. 將上清(qing)在(zai)4℃，4000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)10min，棄(qi)沈澱(dian)，留(liu)上清(qing)。

7. 將上清(qing)在(zai)4℃，20000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)20min，棄(qi)上清(qing)，留(liu)沈澱(dian)。

8. 在沈澱(dian)中加(jia)入(ru)500μL冷的(de)試(shi)劑B，混勻(yun)。

9. 在4℃，20000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)20min，棄(qi)上清(qing)，留(liu)沈澱(dian)。

10. 在沈澱(dian)中加(jia)入(ru)100-200μL蛋白(bai)提(ti)取(qu)液C，充(chong)分(fen)混勻(yun)。

11. 輕微(wei)振(zhen)蕩(dang)15-30min。

12. 在4℃，12000×g條(tiao)件下(xia)離心(xin)15min。

13. 將上清(qing)吸(xi)入(ru)另(ling)壹(yi)預冷的(de)幹(gan)凈(jing)離心(xin)管，即(ji)得到(dao)溶酶體總(zong)蛋白(bai)。

14. 將上述(shu)蛋白(bai)提(ti)取(qu)物定量(liang)後(hou)分裝於(yu)-80℃冰箱保存(cun)備(bei)用或直接用於(yu)下遊(you)實(shi)驗。

註意(yi)事項：

1. 本試(shi)劑(ji)盒僅供(gong)科學(xue)研(yan)究使(shi)用(yong)，不可(ke)用(yong)於(yu)診斷(duan)或治(zhi)療(liao)。

2. 最好使(shi)用(yong)壹(yi)次性吸(xi)頭(tou)、管、瓶(ping)或玻璃器(qi)皿(min)，可(ke)重(zhong)復(fu)使(shi)用的(de)玻(bo)璃器皿必(bi)須(xu)在(zai)使用(yong)前清洗並(bing)che底(di)清除(chu)殘(can)留(liu) 清(qing)潔(jie)劑(ji)。

3. 實(shi)驗完成後所(suo)有樣(yang)品(pin)及(ji)接觸過的(de)器(qi)皿應按照(zhao)規定程序(xu)處理。

4. 避免(mian)皮(pi)膚(fu)或粘(zhan)膜(mo)與試(shi)劑接(jie)觸。

 諾博萊(lai)德 溶酶體蛋白(bai)提(ti)取(qu)試劑盒