本試劑盒采(cai)用堿裂(lie)解(jie)法(fa)裂(lie)解(jie)細(xi)胞，根據離心(xin)吸附柱在高(gao)鹽(yan)狀態下特(te)異(yi)性地結合溶液中(zhong)的DNA的原(yuan)理特(te)異(yi)性提(ti)取(qu)質(zhi)粒(li)DNA。 離心(xin)吸附柱中(zhong)采用的矽基質材(cai)料能(neng)高效(xiao)、專壹(yi)地(di)吸附DNA，可(ke)最(zui)大限(xian)度(du)去除(chu)雜(za)質(zhi)蛋(dan)白(bai)及(ji)細(xi)胞中(zhong)其(qi)他(ta)有機化(hua)合物(wu)。 使(shi)用本(ben)試(shi)劑盒提(ti)取(qu)的質粒(li)DNA可(ke)適(shi)用於(yu)各種(zhong)常(chang)規(gui)操作(zuo)，包(bao)括(kuo)酶(mei)切、PCR、測(ce)序(xu)、連接和(he)轉化(hua)等試驗。
質粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 質(zhi)粒(li)提(ti)取(qu)

質粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒   質(zhi)粒(li)提(ti)取(qu)

NobleRyder D9988  質(zhi)粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit

產(chan)品(pin)貨號：D9988

產品名(ming)稱(cheng)：質粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit

英(ying)文名(ming)稱(cheng)：Plasmid Extraction Mini Kit

產品(pin)規(gui)格(ge)：50T/100T

產(chan)品簡介：

儲存(cun)條件：酶(mei)附(fu)件-20℃，其(qi)它(ta)試劑RT，有(you)效(xiao)期1年。

具(ju)體產(chan)品(pin)的參數(shu)以(yi)收到(dao)產(chan)品說明(ming)書(shu)的參數(shu)為準

NobleRyderD9988  質粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit本(ben)試(shi)劑盒采(cai)用堿裂(lie)解(jie)法(fa)裂(lie)解(jie)細(xi)胞，根據離心(xin)吸附柱在高(gao)鹽(yan)狀態下特(te)異(yi)性地結合溶液中(zhong)的DNA的原(yuan)理特(te)異(yi)性提(ti)取(qu)質(zhi)粒(li)DNA。 離心(xin)吸附柱中(zhong)采用的矽基質材(cai)料能(neng)高效(xiao)、專壹(yi)地(di)吸附DNA，可(ke)最(zui)大限(xian)度(du)去除(chu)雜(za)質(zhi)蛋(dan)白(bai)及(ji)細(xi)胞中(zhong)其(qi)他(ta)有機化(hua)合物(wu)。 使(shi)用本(ben)試(shi)劑盒提(ti)取(qu)的質粒(li)DNA可(ke)適(shi)用於(yu)各種(zhong)常(chang)規(gui)操作(zuo)，包(bao)括(kuo)酶(mei)切、PCR、測(ce)序(xu)、連接和(he)轉化(hua)等試驗。

使(shi)用前請(qing)先在漂(piao)洗(xi)液中(zhong)加入無水乙醇(chun)，加入體積請(qing)參(can)照瓶體(ti)上的標簽(qian)。溶液Ⅰ在使(shi)用前先(xian)加入RNaseA（將試(shi)劑盒中(zhong)提(ti)供(gong)的 RNaseA 全部(bu)加入），混勻，置於(yu) 2-8℃保存(cun)。如(ru)非(fei)指(zhi)明(ming)，所(suo)有離心(xin)步(bu)驟(zhou)均(jun)為使(shi)用臺(tai)式(shi)離心(xin)機(ji)在室溫下(xia)離心(xin)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)（僅(jin)供(gong)參考(kao)）:

1. 取(qu) 1-5mL 細(xi)菌(jun)培(pei)養(yang)物(wu)，12000rpm 離心(xin) 1min，盡(jin)量吸除(chu)上清(qing)（菌(jun)液(ye)較(jiao)多時可(ke)以(yi)通(tong)過(guo)多次(ci)離心(xin)將菌(jun)體(ti)沈(chen)澱收集(ji)到(dao)壹(yi)個(ge)離心(xin)管中）。

2. 向(xiang)留有(you)菌(jun)體(ti)沈(chen)澱的離心(xin)管中加入250μL溶液Ⅰ(請(qing)先檢(jian)查是否(fou)已(yi)加入RNase A），使(shi)用移液(ye)器或(huo)旋(xuan)渦振(zhen)蕩(dang)器che底(di)懸(xuan)浮細(xi)菌(jun)細(xi)胞沈(chen)澱。註意：如(ru)果菌(jun)塊(kuai)未che底混勻，會(hui)影(ying)響裂解(jie)導致質粒(li)提(ti)取(qu)量和(he)純度(du)偏(pian)低。

3. 向(xiang)離心(xin)管中加入250μL溶液Ⅱ，溫和(he)地上下(xia)翻轉6-8次(ci)使(shi)菌(jun)體(ti)充分(fen)裂解(jie)。註意：混勻壹(yi)定(ding)要溫和(he)，以免(mian)汙(wu)染細(xi)菌(jun)基因(yin)組 DNA，此時菌(jun)液(ye)應(ying)變(bian)得清亮粘(zhan)稠，作(zuo)用時(shi)間(jian)不(bu)要超(chao)過 5min，以免(mian)質粒(li)受(shou)到(dao)破壞(huai)。

4. 向(xiang)離心(xin)管中加入350μL溶液Ⅲ，立即溫和(he)地上下(xia)翻轉6-8次(ci)，充分(fen)混勻，此時會(hui)出(chu)現白色絮(xu)狀沈(chen)澱，12000rpm離心(xin)10min，用移液(ye)器小(xiao)心(xin)地將上清(qing)轉移到(dao)另壹(yi)個(ge)幹凈(jing)的離心(xin)管中，盡(jin)量不(bu)要吸出沈(chen)澱。註意：溶液Ⅲ加入後應(ying)立即混合，避免(mian)產生(sheng)局部(bu)沈(chen)澱。如果上清(qing)中(zhong)還有(you)微小白色沈(chen)澱，可(ke)再(zai)次離心(xin)後(hou)取上清(qing)。

5. 取(qu)上壹(yi)步(bu)上清(qing)，加入0.4倍體(ti)積無水乙醇(chun)，充分(fen)混勻。（體(ti)積(ji)過多可(ke)分(fen)兩(liang)次(ci)混合，然(ran)後上柱）。

6. 將上壹(yi)步(bu)混合液加入吸附柱中(zhong)(吸附柱加入收集(ji)管中)，室溫放(fang)置2min，12000rpm離心(xin)1min，倒掉收集(ji)管中的廢液，將吸附柱重新放回收集(ji)管中(如(ru)果為了提(ti)高(gao)得(de)率，可(ke)將收集(ji)管中的液體加入吸附柱再(zai)次吸附壹(yi)次(ci))。

7. 向吸附柱中(zhong)加入750μL漂洗液(ye)(使(shi)用前請(qing)先檢(jian)查(zha)是否(fou)已(yi)加入無水乙醇(chun))，12000rpm離心(xin)1min，棄(qi)廢液，將吸附柱放(fang)入收集(ji)管中。

8. 向(xiang)吸附柱中(zhong)加入700μL漂洗液(ye)，12000rpm離心(xin)1min，棄(qi)廢液，將吸附柱放(fang)入收集(ji)管中。

9. 12000rpm 離心(xin)2min，將吸附柱敞(chang)口(kou)置於(yu)室溫或(huo)50℃溫箱(xiang)放(fang)置數(shu)分(fen)鐘，目的是將吸附柱中(zhong)殘余的漂洗液(ye)去除(chu)，否(fou)則(ze)漂(piao)洗(xi)液(ye)中(zhong)的乙醇(chun)會(hui)影(ying)響後續(xu)的實(shi)驗，如酶切、PCR等。

10. 將吸附柱放(fang)入壹(yi)個(ge)幹凈(jing)的離心(xin)管中，向(xiang)吸附膜(mo)中(zhong)央懸空(kong)滴加50-200μL經(jing)65℃水浴(yu)預熱的洗脫液，室溫放(fang)置2min，12000rpm離心(xin)1min。

11. 為了增(zeng)加質粒(li)的回收效率，可(ke)將得(de)到(dao)的洗脫液重新加入吸附柱中(zhong)，室溫放(fang)置 2min，12000rpm 離心(xin)1min。

註意事(shi)項(xiang)：

1. 使(shi)用前請(qing)先檢(jian)查(zha)溶液Ⅱ和(he)溶液Ⅲ是否(fou)出(chu)現混濁，如(ru)有(you)混濁現象，可(ke)在 37℃水浴(yu)中加熱幾分(fen)鐘，待溶液恢(hui)復澄(cheng)清後再(zai)使(shi)用。溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、漂(piao)洗液(ye)使(shi)用後(hou)應(ying)立即擰緊蓋(gai)子。

2. 洗脫緩(huan)沖(chong)液(ye)體積不(bu)應(ying)少(shao)於(yu)50μL，體積(ji)過(guo)小(xiao)影(ying)響回收效率；洗脫液的pH值對(dui)洗脫效率也有影(ying)晌，若(ruo)需要用水做洗(xi)脫液應(ying)保證(zheng)其(qi)pH值(zhi)在8.0左(zuo)右(you)(可(ke)用NaOH將水的pH值調(tiao)至此範圍(wei))，pH 值(zhi)低(di)於(yu)7.0會降(jiang)低洗脫效率，DNA產物(wu)應(ying)保存(cun)在-20℃，以(yi)防DNA降(jiang)解(jie)。

3. 如果所(suo)提(ti)質(zhi)粒(li)為低拷貝(bei)質粒(li)或(huo)大於(yu)10kb的大質粒(li)，應(ying)加大菌(jun)體(ti)使(shi)用量，使(shi)用5-10mL過(guo)夜(ye)培(pei)養(yang)物(wu)，同時(shi)按照比例(li)增(zeng)加溶液Ⅰ、溶液Ⅱ和(he)溶液Ⅲ的用量，吸附和(he)洗脫時可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)的延長時(shi)間(jian)，以(yi)增(zeng)加提(ti)取(qu)效(xiao)率。

4. DNA 濃度(du)及(ji)純度(du)檢(jian)測(ce)：得(de)到(dao)的質粒(li)DNA純度(du)與(yu)樣(yang)品(pin)保(bao)存時間(jian)、操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中的剪切力等因(yin)素有關。得到(dao)的 DNA 可(ke)用瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)疑膠電泳和(he)紫外分(fen)光光(guang)度(du)計(ji)檢測(ce)濃(nong)度(du)與(yu)純度(du)。DNA 應(ying)在OD260處(chu)有(you)顯著(zhu)吸收峰，OD260值為1相當(dang)於(yu)大約50ug/mL雙(shuang)鏈(lian)DNA、40ug/mL單鏈DNA。OD260/OD280比(bi)值應(ying)為 1.7-1.9，如果(guo)洗脫時不(bu)使(shi)用洗(xi)脫緩(huan)沖(chong)液(ye)，而使(shi)用去離子水，比值(zhi)會(hui)偏(pian)低，因(yin)為pH值和(he)離子存在會(hui)影(ying)響吸光值(zhi)，但(dan)並不(bu)表(biao)示純度(du)低(di)。

質粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒   質(zhi)粒(li)提(ti)取(qu)

產品(pin)訂購(gou)信(xin)息

D9988  質(zhi)粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit  50T

D9988  質(zhi)粒(li)小(xiao)量提(ti)取(qu)試(shi)劑盒 Plasmid Extraction Mini Kit  100T