Mag NHS和(he) Magrose NHS都(dou)是(shi)表(biao)面為NHS基(ji)團(tuan)修(xiu)飾(shi)，能(neng)夠(gou)與帶(dai)有(you)伯胺(an)基(ji)團(tuan)的蛋(dan)白(bai)和(he)其(qi)他(ta)分(fen)子形成(cheng)穩(wen)定(ding)的肽(tai)鍵，用於親和(he)純化抗(kang)體、抗(kang)原(yuan)和(he)其(qi)他(ta)生(sheng)物分(fen)子。
NHS磁(ci)珠(zhu)Mag NHS-常備現貨

NobleRyder M0238 NHS磁(ci)珠(zhu)Mag NHS NHS magnetic beads

NHS磁(ci)珠(zhu)Mag NHS-常備現貨

產品(pin)貨(huo)號(hao)：M0238

產品(pin)名稱：NHS磁(ci)珠(zhu)Mag NHS NHS magnetic beads

英文(wen)名稱：NHS magnetic beads

產品(pin)規(gui)格(ge)：1ml/5ml

產品(pin)簡(jian)介：

說明(ming)：10mg/mL

具(ju)體產(chan)品(pin)的參(can)數以(yi)收(shou)到(dao)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)的參(can)數為準(zhun)

NobleRyder M0238 NHS磁(ci)珠(zhu)Mag NHS NHS magnetic beads

Mag NHS和(he) Magrose NHS都(dou)是(shi)表(biao)面為NHS基(ji)團(tuan)修(xiu)飾(shi)，能(neng)夠(gou)與帶(dai)有(you)伯胺(an)基(ji)團(tuan)的蛋(dan)白(bai)和(he)其(qi)他(ta)分(fen)子形成(cheng)穩(wen)定(ding)的肽(tai)鍵，用於親和(he)純化抗(kang)體、抗(kang)原(yuan)和(he)其(qi)他(ta)生(sheng)物分(fen)子。與傳(chuan)統的羧基(ji)、an基(ji)磁(ci)珠(zhu)相比(bi)，表(biao)面含(han)NHS基(ji)團(tuan)的磁(ci)珠(zhu)無需事先采(cai)用EDC/NHS 或(huo)戊(wu)二(er)醛進(jin)行(xing)活(huo)化，只需簡單(dan)地(di)將(jiang)含(han)伯氨(an)基(ji)的生(sheng)物配體溶解(jie)在試(shi)劑盒(he)自(zi)帶的Coupling Buffer 中(zhong)，室溫(wen)下將(jiang)蛋(dan)白(bai)與NHS磁(ci)珠(zhu)混(hun)合1~2h便(bian)可(ke)將生(sheng)物配體共價偶聯(lian)到(dao)磁(ci)珠(zhu)上(shang)，具(ju)有(you)操(cao)作(zuo)簡(jian)單(dan)、偶聯條件溫(wen)和(he)、生(sheng)物配體偶(ou)聯(lian)快速高(gao)效(xiao)等(deng)優點(dian)。磁(ci)珠(zhu)偶(ou)聯(lian)過程(cheng)必(bi)需在不含(han)任何氨基(ji)的緩(huan)沖溶劑(ji)中(zhong)進行(xing)。人工(gong)操(cao)作時(shi)，使用磁(ci)性(xing)分(fen)離(li)架實(shi)現磁(ci)珠(zhu)與溶劑(ji)分(fen)離(li)。也可(ke)采(cai)用自(zi)動(dong)化設(she)備操作，自(zi)動(dong)化操(cao)作(zuo)適(shi)合用(yong)於(yu)多(duo)樣品(pin)的篩(shai)選。

蛋白(bai)偶(ou)聯(lian)操(cao)作(zuo)流程(cheng)及優化點(dian)（僅(jin)供(gong)參(can)考）

1.蛋白(bai)溶液的配制

2.磁(ci)珠(zhu)的洗(xi)滌

3.蛋白(bai)偶(ou)聯(lian)：（優化）

(1) Coupling Buffer 的種(zhong)類(lei)。首先通(tong)過實(shi)驗確定(ding)最合適(shi)的CouplingBuffer

 (2) 確定(ding)合適(shi)的 CouplingBuffer 後，再(zai)通過(guo)實(shi)驗優化蛋(dan)白(bai)溶液的濃(nong)度

4.封(feng)閉(bi)

5.磁(ci)珠(zhu)保(bao)存

6.註(zhu)意事項(xiang)：

(1) 其(qi)中(zhong)磁(ci)珠(zhu)洗(xi)滌要嚴格(ge)按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)采(cai)用冷(leng)卻的 WashingBufferA快(kuai)速洗(xi)滌 ，以(yi)防(fang)磁(ci)珠(zhu)在(zai)洗(xi)滌過(guo)程(cheng)中 NHS 基(ji)團(tuan)水(shui)解(jie)；

(2) 蛋白(bai)偶(ou)聯(lian)過(guo)程(cheng)中，首先要通過(guo)實(shi)驗確定(ding)合適(shi)的 CouplingBuffer（主(zhu)要包(bao)括 CouplingBufferA、Coupling Buffer B、50mM 硼(peng)酸(suan)溶液，pH8.5、100mM磷酸(suan)緩(huan)沖液，100mMNaCl，pH7.4 這四種(zhong)）

(3) 確定(ding)合適(shi)的 CouplingBuffer 後，再(zai)以此(ci) CouplingBuffer 為基(ji)礎，確定(ding)合適(shi)的偶(ou)聯蛋白(bai)濃(nong)度，因(yin)為蛋白(bai)濃(nong)度越高(gao)，偶(ou)聯(lian)到(dao)磁(ci)珠(zhu)上(shang)的蛋(dan)白(bai)的量(liang)會(hui)越大（這是由(you)於(yu) NHS 基(ji)團(tuan)跟(gen)蛋(dan)白(bai)偶(ou)聯(lian)和(he) NHS基(ji)團(tuan)本(ben)身水(shui)解(jie)是壹(yi)對(dui)競(jing)爭(zheng)反(fan)應(ying)）。當(dang)然此(ci)處要綜合考慮(lv)使(shi)用(yong)性(xing)能(neng)和(he)成(cheng)本(ben)，有(you)些(xie)客(ke)戶(hu)偶聯少(shao)量(liang)的蛋(dan)白(bai)便(bian)可(ke)滿足使用(yong)需求，這(zhe)時(shi)采(cai)用低(di)濃(nong)度的蛋(dan)白(bai)便(bian)可(ke)，這樣可(ke)以降低(di)成(cheng)本(ben)。

(4) 封(feng)閉(bi)這(zhe)壹(yi)步(bu)可(ke)以采(cai)用試(shi)劑盒(he)中(zhong)自(zi)帶的 3M 乙(yi)醇(chun)胺(an)，也可(ke)使用 Tris 緩(huan)沖液（100mMTris-HCl,150 mMNaCl, pH 8.0），封(feng)閉(bi)時(shi)間不得(de)低於 2h，如果化學(xue)封(feng)閉(bi)後背(bei)景仍然很(hen)高(gao)，還(hai)可(ke)以額(e)外(wai)加(jia)壹(yi)步(bu) BSA 封(feng)閉(bi)。

蛋白(bai)偶(ou)聯(lian)操(cao)作(zuo)步驟（僅供(gong)參(can)考）

壹(yi)、使(shi)用(yong)前準(zhun)備(bei)

以下(xia)操(cao)作過程(cheng)以取(qu)磁(ci)珠(zhu)樣(yang)品(pin) 500μL，采(cai)用 1.5mLEP 管為例(li)介紹。用戶(hu)可(ke)根(gen)據(ju)自(zi)身需求按(an)比(bi)例(li)調整：

1. 蛋白(bai)溶液配制：

取(qu)適(shi)量(liang)待(dai)偶(ou)聯(lian)蛋白(bai)用(yong) CouplingBuffer 溶解(jie)，配成(cheng)濃(nong)度為0.1-3.0mg/mL 的蛋(dan)白(bai)溶液。已經保(bao)存於 buffer 中的蛋(dan)白(bai)，需要通過(guo)透(tou)析(xi)或(huo)者(zhe)脫(tuo)鹽的方法(fa)徹di除(chu)去原(yuan)有(you) buffer 裏(li)含(han)伯胺(an)基(ji)的物質，然後

再用(yong) CouplingBuffer 配成(cheng)濃(nong)度為0.1-3.0 mg/mL 的蛋(dan)白(bai)溶液，將配制好(hao)的蛋(dan)白(bai)溶液於 4ºC 保存備用。

註(zhu)： (1)為了(le)達到(dao)更(geng)好(hao)的性(xing)能(neng)，蛋白(bai)濃(nong)度≥2.0mg/mL，這(zhe)樣(yang)偶聯(lian)效(xiao)率(lv)會(hui)更高(gao)，此(ci)處需綜合考慮(lv)成(cheng)本(ben)和(he)使用(yong)要求；

(2)蛋白(bai)溶液中不能含(han)有(you)帶(dai)伯氨(an)基(ji)的成(cheng)分(fen)，比(bi)如Tris，甘an酸(suan)，明(ming)膠，BSA 等(deng)；

2.磁(ci)珠(zhu)清(qing)洗(xi)：

(1) 取(qu) 500μL 磁(ci)珠(zhu)於(yu) 1.5mLEP 管中(zhong)。

註(zhu)：磁(ci)珠(zhu)取(qu)樣前要反復顛(dian)倒、使用渦(wo)旋振蕩(dang)器使(shi)其(qi)混(hun)合均(jun)勻，以(yi)保證(zheng)實(shi)驗的同(tong)壹(yi)性(xing)。

(2) 將 EP管置於磁(ci)性(xing)分(fen)離(li)架內，富(fu)集磁(ci)珠(zhu)，去除上(shang)清(qing)液。

(3) 加(jia) 1mL2~8ºC 預冷(leng)的WashingBufferA於(yu)1.5mLEP管中(zhong)，渦(wo)旋15s，使磁(ci)珠(zhu)混(hun)合均(jun)勻。

(4) 將 EP 管置於磁(ci)性(xing)分(fen)離(li)架內，富(fu)集磁(ci)珠(zhu)，去除上(shang)清(qing)液。

2. 生(sheng)物配體固定(ding)：

(1) 加(jia) 500μL 蛋(dan)白(bai)溶液於EP管中(zhong)，渦(wo)旋30s，使其(qi)混(hun)合均(jun)勻。

註(zhu)：磁(ci)珠(zhu)洗(xi)滌後要立即加(jia)入(ru)蛋(dan)白(bai)溶液。

(2) 將 EP 管渦(wo)旋15s，置於垂(chui)直混合儀(yi)上(shang)，室溫(wen)混合1~2h。如果垂直混合不(bu)均(jun)勻，則(ze)反(fan)應(ying)前30min，每隔(ge)5min取(qu)下EP管渦(wo)旋15s。此後，每(mei)隔15min，取(qu)下EP管渦(wo)旋15s。

註(zhu)：如有(you)需要可(ke)以4ºC過夜反(fan)應(ying)。

(3) 采(cai)用磁(ci)性(xing)分(fen)離(li)架富集磁(ci)珠(zhu)，保(bao)存流穿液

3. 磁(ci)珠(zhu)封(feng)閉(bi)：

(1) 加(jia) 500μLBlocking Buffer 於(yu) EP 管中(zhong)，渦(wo)旋30s，將 EP 管置於磁(ci)性(xing)分(fen)離(li)架內，富(fu)集磁(ci)珠(zhu)，棄(qi)上(shang)清(qing)液。

註(zhu)：Blocking Buffer 除了(le)試(shi)劑盒(he)中(zhong)提(ti)供(gong)的3M乙(yi)醇(chun)胺(an)外(wai)，也可(ke)以使用100mMTris-HCl,150mMNaCl, pH 8.0 等(deng)其(qi)它封(feng)端試(shi)劑。

(2) 重復“步(bu)驟 （1）"四次。

(3) 加(jia) 500μLBlocking Buffer 於(yu) EP 管中(zhong)，渦(wo)旋 30s，將 EP 管置於垂(chui)直混合儀(yi)中(zhong)室溫(wen)反應(ying)2h。

(4) 將 EP 管置於磁(ci)性(xing)分(fen)離(li)架內，富(fu)集磁(ci)珠(zhu)，棄(qi)上(shang)清(qing)液。

(5) 加(jia) 1mL 超純水(shui)於 EP 管中(zhong)，充分(fen)混合，用(yong)磁(ci)力架富集磁(ci)珠(zhu)，棄(qi)上(shang)清(qing)液。

4. 保存：

(1) 加(jia) 1mLStorage Buffer（需客(ke)戶(hu)自(zi)備，比(bi)如含(han)0.05%疊dan化(hua)na或(huo)0.1%proclin-300的PBS 緩(huan)沖液，或(huo)者(zhe)客(ke)戶(hu)根(gen)據(ju)自(zi)己(ji)實(shi)際(ji)需求選擇合適(shi)的保(bao)存溶液 ）於EP管中(zhong)，充分(fen)混合，用(yong)磁(ci)力架富集磁(ci)珠(zhu)，棄(qi)上(shang)清(qing)液。重復該(gai)操作(zuo) 2 次。

(2) 加(jia)入(ru)0.5mLStorage Buffer 於(yu) EP 管中(zhong)，充分(fen)混合，4ºC保(bao)存備用。

註(zhu)：最終偶聯蛋(dan)白(bai)的磁(ci)珠(zhu)濃(nong)度為10mg/mL.

註(zhu)意事項(xiang)：

1. 磁(ci)珠(zhu)對(dui)水(shui)分(fen)敏感。為了(le)保證(zheng)產品(pin)質量，在(zai)取(qu)樣之後需立即蓋上(shang)瓶(ping)蓋，並用(yong)封(feng)口(kou)膜密(mi)封(feng)，於(yu) 4℃保(bao)存。

2. 禁止(zhi)將(jiang)磁(ci)珠(zhu)幹燥或(huo)冷(leng)凍。幹燥和(he)冷(leng)凍操作(zuo)可(ke)能導致磁(ci)珠(zhu)的聚(ju)集從而喪失(shi)結(jie)合活(huo)性(xing)。

3. 使用(yong)280nm附(fu)近的波(bo)長來(lai)測定(ding)蛋白(bai)含(han)量(liang)是不可(ke)取(qu)的，因(yin)為 NHS 基(ji)團(tuan)在(zai)280nm波(bo)長(chang)附(fu)近(jin)有(you)很(hen)強(qiang)的吸(xi)收，會(hui)嚴重(zhong)幹擾(rao)檢(jian)測結(jie)果。

4. 緩(huan)沖液中含(han)有(you)帶(dai)伯胺(an)的物質會(hui)抑制蛋(dan)白(bai)質偶聯(lian)到(dao)磁(ci)珠(zhu)表(biao)面，去除伯胺(an)物質可(ke)采(cai)用透(tou)析(xi)和(he)脫鹽的方法(fa)。

5. 蛋白(bai)穩(wen)定(ding)劑（如BSA，gelatin）會(hui)抑制抗(kang)體與磁(ci)珠(zhu)的結(jie)合，因(yin)此(ci)在磁(ci)珠(zhu)偶(ou)聯(lian)抗(kang)體過(guo)程(cheng)中，需要確保抗(kang)體保(bao)存體系中不(bu)存在含(han)伯氨(an)基(ji)的蛋(dan)白(bai)穩(wen)定(ding)劑。

6. NHS 基(ji)團(tuan)易(yi)水(shui)解(jie)，故在(zai)用 WashingBufferA 洗(xi)滌時(shi)，壹(yi)定(ding)要參(can)照說(shuo)明(ming)書(shu)進(jin)行(xing)。

7. 蛋白(bai)溶液要預先(xian)配制好(hao)，WashingBufferA 洗(xi)滌完(wan)畢(bi)後，要立即加(jia)入(ru)蛋(dan)白(bai)溶液進行(xing)偶(ou)聯反(fan)應(ying)。

8.蛋白(bai)質和(he)磁(ci)珠(zhu)的偶(ou)聯效(xiao)率(lv)因蛋(dan)白(bai)質種類(lei)和(he)性(xing)質差異而不(bu)同。壹(yi)般(ban)而(er)言，蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度為0.1-3.0 mg/mL 時(shi)利(li)於(yu)蛋(dan)白(bai)質偶聯(lian)；然而(er)，對(dui)於不同(tong)的蛋(dan)白(bai)其(qi)濃(nong)度需要優化。

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