是(shi)利(li)用蛋(dan)白偶(ou)聯技術(shu)使ProteinA（orA/G）共(gong)價(jia)包(bao)被到(dao) NHS 活(huo)化的(de)超(chao)順磁性微球(qiu)表(biao)面(mian)。
抗(kang)體(ti)純化磁珠-常(chang)備(bei)現貨

NobleRyder M0148 抗(kang)體(ti)純化磁珠 Protein A Matrix Antibody Purification Kit

產(chan)品(pin)貨號(hao)：M0148

產(chan)品(pin)名稱(cheng)：抗(kang)體(ti)純化磁珠 Protein A Matrix Antibody Purification Kit

產(chan)品(pin)規(gui)格(ge)：1mL/5mL

產(chan)品(pin)簡介：

具體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參數(shu)以(yi)收到產品(pin)說明(ming)書的(de)參數(shu)為(wei)準

NobleRyder M0148 抗(kang)體(ti)純化磁珠 Protein A Matrix Antibody Purification Kit是(shi)利(li)用蛋(dan)白偶(ou)聯技術(shu)使ProteinA（orA/G）共(gong)價(jia)包(bao)被到(dao) NHS 活(huo)化的(de)超(chao)順磁性微球(qiu)表(biao)面(mian)。該(gai)產品(pin)具有更高(gao)的(de)抗(kang)體(ti)結(jie)合能(neng)力(li)和(he)較低的(de)蛋(dan)白(bai)非特(te)異(yi)吸附率，洗脫(tuo)條(tiao)件(jian)更均(jun)壹，壹步(bu)純化即可從血清(qing)樣(yang)品(pin)中分離(li)出純度大於90%的(de)抗(kang)體(ti)。

本(ben)產(chan)品(pin)為(wei)納(na)米級(ji)磁性微球(qiu)，具有超大(da)比(bi)表(biao)面(mian)積(ji)，可大幅度(du)縮短抗(kang)體(ti)吸(xi)附所(suo)需(xu)的(de)時(shi)間，熟(shu)練操作(zuo)可在 15min 內完成(cheng)抗(kang)體(ti)吸(xi)附過(guo)程(cheng)，30min 內完成(cheng)抗(kang)體(ti)純化流程(cheng)。抗(kang)體(ti)純化磁珠試劑盒配(pei)有經過(guo)優(you)化的(de)預(yu)制緩沖液，為(wei)抗(kang)體(ti)純化實(shi)驗(yan)提供(gong)了最(zui)佳(jia)的(de)反(fan)應(ying)條(tiao)件(jian)，增強(qiang)了抗(kang)體(ti)純化實(shi)驗(yan)的(de)穩定(ding)性(xing)。

適用範(fan)圍：

本(ben)產(chan)品(pin)可重復(fu)使用，適用於血漿、腹水(shui)、組織培(pei)養上(shang)清(qing)液等(deng)樣(yang)品(pin)中的(de)抗(kang)體(ti)純化，也(ye)可用於抗體(ti)固(gu)定(ding)及(ji)其(qi)它相關(guan)研究。

抗(kang)體(ti)純化磁珠-常(chang)備(bei)現貨

操作(zuo)步驟(zhou)（僅(jin)供(gong)參考(kao)）

不(bu)同(tong)種(zhong)類(lei)的(de)免(mian)疫(yi)磁珠具有不同(tong)的(de)抗(kang)體(ti)結(jie)合能(neng)力(li)，在(zai)執(zhi)行抗(kang)體(ti)純化操作(zuo)之(zhi)前，操作(zuo)者應首先估(gu)算(suan)待純化樣(yang)品(pin)中的(de)抗(kang)體(ti)含(han)量（壹(yi)般血(xue)清(qing)樣(yang)品(pin)中抗(kang)體(ti)含(han)量約 2~8mg/mL，細(xi)胞(bao)培(pei)養物(wu)中抗體(ti)濃(nong)度因(yin)表(biao)達量(liang)不同(tong)而(er)變(bian)化較大）；然(ran)後(hou)根(gen)據(ju)所(suo)選(xuan)免(mian)疫(yi)磁珠的(de)抗(kang)體(ti)結(jie)合能(neng)力(li)（見(jian)免疫(yi)磁珠相(xiang)關(guan)產品(pin)列表(biao)或者(zhe)產品(pin)組成(cheng)的(de) AntibodyCapacity 數(shu)據(ju)），計(ji)算免(mian)疫(yi)磁珠的(de)大(da)概(gai)用量(liang)，免疫(yi)磁珠用量(liang)過(guo)多(duo)或(huo)過(guo)少(shao)均(jun)影響(xiang)抗(kang)體(ti)純化的(de)效(xiao)果(guo)，建(jian)議(yi)免(mian)疫(yi)磁珠用量(liang)的(de)最(zui)大(da)載(zai)量應(ying)為(wei)樣(yang)品(pin)抗體(ti)含(han)量的(de) 80%~100%。

以(yi)下(xia)操作(zuo)步驟(zhou)按(an)照(zhao)純化抗體(ti)，取(qu)用 100µLProteinA 抗(kang)體(ti)純化磁珠為(wei)例(li)進行詳(xiang)細(xi)描述(shu)。操作(zuo)者可以(yi)參照(zhao)以(yi)下(xia)步驟(zhou)中(zhong)各(ge)種(zhong)緩沖液的(de)用量(liang)及容器(qi)大小，按(an)比(bi)例調整(zheng)實(shi)際(ji)操作(zuo)中各(ge)成(cheng)分的(de)用量(liang)。

1、樣(yang)品(pin)處理(li)：取(qu)抗體(ti)含(han)量約為(wei) 0.1~0.15mg 的(de)樣(yang)品(pin)置於新的(de) 1.5mLEP 管(guan)中(zhong)，加入抗體(ti)結(jie)合緩沖液（②） 至總(zong)體(ti)積(ji)為(wei) 500µL（如樣(yang)品(pin)體(ti)積(ji)大(da)於 500µL 則無(wu)需(xu)加(jia)入），混合均(jun)勻。

2、、磁珠預(yu)處理(li)：將(jiang)抗(kang)體(ti)純化磁珠（①）漩(xuan)渦振蕩 30s，使磁珠充(chong)分重懸(xuan)；取(qu) 100µL 磁珠懸(xuan)液置於另(ling)壹(yi)新的(de) 1.5mLEP 管(guan)中(zhong)。對磁珠懸(xuan)液進行磁性分離(li)（將(jiang) EP 管放(fang)置(zhi)於磁性分離(li)器(qi)）上，使磁珠吸(xi)附在(zai)管(guan)壁至溶(rong)液澄(cheng)清；該(gai)操作(zuo)描述(shu)以(yi)下(xia)省(sheng)略，棄(qi)上清液。從磁性分離(li)器(qi)上取(qu)下(xia) EP管。用抗(kang)體(ti)結(jie)合緩沖液（②）洗滌 2 次，棄(qi)上(shang)清液，管中磁珠可直接用於抗體(ti)分離(li)）。

3、抗(kang)體(ti)吸(xi)附：在(zai)步(bu)驟(zhou) 2 預(yu)處理(li)的(de)磁珠管(guan)中(zhong)加入步驟(zhou) 1 處理(li)的(de)樣(yang)品(pin)溶液，漩渦振蕩均(jun)勻，在室(shi)溫(wen)下(xia)（約25℃）置(zhi)於翻轉混合儀或者(zhe)手(shou)工輕(qing)輕(qing)翻轉 EP 管(guan)，促(cu)使樣(yang)品(pin)和(he)磁珠充(chong)分接觸(chu)並(bing)吸(xi)附，翻(fan)轉約 15min 後(hou)進行磁性分離(li)，移棄(qi)上(shang)清液。

4、磁珠洗(xi)滌(di)：向 EP 管(guan)中(zhong)加(jia)入 1mL 抗體(ti)結(jie)合緩沖液（②），振蕩重懸(xuan)磁珠後(hou)進行磁性分離(li)，移棄(qi)上(shang)清液； 該操作(zuo)重復(fu) 3 次。

5、抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)（方(fang)式 1-高(gao)鹽(yan)弱酸性(xing)洗(xi)脫(tuo)）：

1） 抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)：在(zai)步(bu)驟(zhou) 4 完成(cheng)磁珠洗(xi)滌(di)的(de) EP 管(guan)中(zhong)加入 0.5~1.0mL 抗體(ti)洗(xi)脫(tuo)緩沖液（③），用移液器(qi)吹(chui)打或(huo)者(zhe)渦旋震蕩下(xia)迅速重懸(xuan)，然(ran)後(hou)在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)（約 25℃）置(zhi)於翻轉混合儀或者(zhe)手(shou)工輕(qing)輕(qing)翻轉 EP 管(guan)，翻(fan)轉 10min 後(hou)進行磁性分離(li)，收集(ji)上(shang)清液至新的(de) EP 管(guan)；

2） 抗(kang)體(ti)透(tou)析： 因(yin)抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)緩沖液（③）含有較高(gao)濃(nong)度的(de)鹽(yan)分，收集(ji)的(de)抗(kang)體(ti)溶(rong)液不能(neng)直(zhi)接用於 SDS-PAGE 檢測，但可以(yi)用抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)緩沖液調零進行抗(kang)體(ti)濃(nong)度測定(ding)。抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)緩沖液呈偏酸性(xing)（pH4.5）， 建(jian)議操作(zuo)者用自行配(pei)制(zhi)的(de)中(zhong)性(xing)低鹽(yan)溶液（即透(tou)析液）立即(ji)對(dui)收集(ji)的(de)抗(kang)體(ti)溶(rong)液進行透(tou)析處理(li)，以(yi)降低(di)抗體(ti)失(shi)活(huo)率，獲得較高(gao)活(huo)性和(he)穩定(ding)性(xing)的(de)抗(kang)體(ti)溶(rong)液。

6、抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)（方(fang)式 2-低(di) pH 洗(xi)脫(tuo)）：

1）抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)：在(zai)步(bu)驟(zhou) 4 完成(cheng)磁珠洗(xi)滌(di)的(de) EP 管(guan)中(zhong)加入 0.5~1.0mL 抗體(ti)洗(xi)脫(tuo)緩沖液（④），用移液器(qi)吹(chui)打或(huo)者(zhe)渦旋震蕩下(xia)迅速重懸(xuan)，然(ran)後(hou)在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)（約 25℃）置(zhi)於翻轉混合儀或者(zhe)手(shou)工輕(qing)輕(qing)翻轉EP 管(guan)，翻(fan)轉 10min 後(hou)進行磁性分離(li)，收集(ji)上(shang)清液至新的(de) EP 管(guan)；

2）抗(kang)體(ti)中(zhong)和(he)： 因(yin)抗(kang)體(ti)洗(xi)脫(tuo)緩沖液（④）pH 值(zhi)較低，收集(ji)的(de)抗(kang)體(ti)溶(rong)液需(xu)要(yao)立即(ji)加(jia)入壹定(ding)量(liang)的(de)抗(kang)體(ti)中(zhong)和(he)緩沖液（⑤），壹般為(wei)收集(ji)抗(kang)體(ti)溶(rong)液體(ti)積(ji)的(de) 1/20~1/10，最(zui)終使洗(xi)脫(tuo)的(de)抗(kang)體(ti)溶(rong)液 pH值(zhi)保(bao)持(chi)中性(xing)環境(jing)，以(yi)降低(di)抗體(ti)失(shi)活(huo)率，獲得較高(gao)活(huo)性和(he)穩定(ding)性(xing)的(de)抗(kang)體(ti)溶(rong)液。收集(ji)的(de)抗(kang)體(ti)可直接用於SDS-PAGE 檢測及抗(kang)體(ti)濃(nong)度的(de)測(ce)定(ding)。

7、磁珠後(hou)處理(li)：使(shi)用後(hou)的(de)磁珠用磁珠洗(xi)滌(di)緩沖液（⑥）進行重懸(xuan)，然(ran)後(hou)執(zhi)行磁性分離(li)，棄(qi)上清(qing)液， 重復(fu)操作(zuo)壹次；加(jia)入 100µL 磁珠儲(chu)存(cun)緩沖液（⑦），置於 2~8℃保(bao)存(cun)。

磁珠再生(sheng)

1、磁珠多(duo)次使(shi)用後(hou)會有沈澱蛋白、強(qiang)疏(shu)水(shui)性蛋(dan)白、脂蛋(dan)白(bai)等(deng)雜(za)質非(fei)特(te)異(yi)性吸(xi)附到(dao)磁珠上(shang)，為(wei)了保(bao)證(zheng)磁珠的(de)使(shi)用效(xiao)率，建議持續(xu)使(shi)用 5 次後(hou)進行磁珠再生(sheng)處理(li)。

2、、按(an)約 1mL 磁珠 5mL 的(de)比(bi)例加入磁珠再生(sheng)緩沖液（⑧），振蕩均(jun)勻，在室(shi)溫(wen)下(xia)置於翻轉混合儀或者(zhe)手(shou)工輕(qing)輕(qing)翻轉混合，10min 後(hou)進行磁性分離(li)，棄(qi)上清(qing)液。

3、按(an)約 1mL 磁珠 5mL 的(de)比(bi)例加入磁珠洗(xi)滌(di)緩沖液（⑥）進行重懸(xuan)，然(ran)後(hou)執(zhi)行磁性分離(li)，棄(qi)上清(qing)液，重復(fu)以(yi)上操作(zuo)兩次。

4、按(an)照(zhao)約 1mL 磁珠1mL 的(de)比(bi)例加入適量(liang)磁珠儲(chu)存(cun)緩沖液（⑦），置於 2~8℃保(bao)存(cun)。

註(zhu)意事(shi)項

1、進行抗(kang)體(ti)純化操作(zuo)之(zhi)前，請務(wu)必認(ren)真閱讀本操作(zuo)說明(ming)書。

2、本(ben)產(chan)品(pin)須與(yu)磁性分離(li)器(qi)配(pei)套使用。

3、磁珠使(shi)用前(qian)應充(chong)分振蕩均(jun)勻。

4、磁珠應(ying)保(bao)存(cun)在儲(chu)存(cun)溶(rong)液中，防止(zhi)幹燥(zao)。

5、請(qing)勿(wu)將磁珠冷(leng)凍或(huo)離心，以(yi)免引起(qi)不可逆聚集(ji)。

6、本(ben)產(chan)品(pin)僅供(gong)研究使用。

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