組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)純化磁珠(zhu)具(ju)有(you)超(chao)順磁性，專(zhuan)為(wei)高(gao)效、快速純化組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)而設計的(de)壹(yi)種新(xin)型(xing)功能(neng)化材料。
His-Tag蛋白(bai)純化磁珠(zhu)鎳離(li)子IDA-Nickel

NobleRyder M0188 His-Tag蛋白(bai)純化磁珠(zhu)(鎳離(li)子） IDA-Nickel

產品貨號(hao)：M0188

產品名稱(cheng)：His-Tag蛋白(bai)純化磁珠(zhu)(鎳離(li)子）IDA-Nickel

產品規格(ge)：2*50mL/5mL

產品簡(jian)介(jie)：

具(ju)體(ti)產品的參(can)數以(yi)收(shou)到產品說明(ming)書(shu)的(de)參(can)數為(wei)準(zhun)

NobleRyder M0188 His-Tag蛋白(bai)純化磁珠(zhu)(鎳離(li)子） IDA-Nickel

組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)純化磁珠(zhu)具(ju)有(you)超(chao)順磁性，專(zhuan)為(wei)高(gao)效、快速純化組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)而設計的(de)壹(yi)種新(xin)型(xing)功能(neng)化材料。可(ke)通過(guo)磁(ci)性分(fen)離(li)方(fang)式直(zhi)接從(cong)生物(wu)樣(yang)品中壹步(bu)純化出高(gao)純度(du)的目標(biao)蛋(dan)白(bai)，極(ji)大地(di)簡(jian)化純化工(gong)藝(yi)和提(ti)高純化效率，適(shi)合科研和(he)工(gong)業(ye)領(ling)域(yu)便(bian)捷(jie)地(di)進(jin)行組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)純化。

His-Tag蛋白(bai)純化磁珠(zhu)鎳離(li)子IDA-Nickel

與(yu)傳(chuan)統(tong)層(ceng)析方式(shi)使(shi)用的金(jin)屬螯(ao)合瓊脂(zhi)糖預(yu)裝柱相(xiang)比(bi)，采用磁珠(zhu)純化組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)，無需對(dui)樣品進(jin)行多(duo)次(ci)長(chang)時間(jian)的(de)高(gao)速(su)離(li)心和(he)濾(lv)膜過濾(lv)、無需控(kong)制(zhi)流(liu)速(su)、更無需高(gao)昂(ang)的(de)層(ceng)析設備。樣品與(yu)磁珠(zhu)的特(te)異(yi)性結(jie)合、洗滌以及(ji)目標蛋白(bai)的(de)洗(xi)脫(tuo)變得簡(jian)單、快速、易(yi)操(cao)作。對(dui)於熟(shu)練(lian)的操(cao)作者(zhe)而言，在 1h 內就(jiu)能獲(huo)得高(gao)純度(du)的目標(biao)蛋(dan)白(bai)，且能(neng)輕(qing)松實(shi)現高(gao)通量(liang)和(he)大規(gui)模樣品的平(ping)行(xing)處(chu)理(li)，為(wei)研究者(zhe)節省(sheng)了(le)時間(jian)和(he)成本。

本產品系(xi)列包括(kuo)鎳(nie)離(li)子（Nickel）、鈷離(li)子（Cobalt）兩(liang)種金(jin)屬離(li)子螯合磁珠(zhu)，它(ta)們(men)在目標(biao)蛋白(bai)結(jie)合量和(he)非(fei)特(te)異(yi)性吸(xi)附(fu)等性能(neng)上(shang)有所區別(bie)，用戶(hu)可(ke)根據目(mu)標蛋(dan)白(bai)與(yu)不同(tong)種類(lei)金(jin)屬的(de)結合性能(neng)，以(yi)及(ji)對(dui)目標(biao)蛋(dan)白(bai)的(de)產量和(he)純度(du)的要求(qiu)，選擇不同(tong)種類(lei)的金(jin)屬離(li)子螯合磁珠(zhu)。

適(shi)用範圍：

適(shi)用於純化細菌(jun)、酵(jiao)母、昆蟲(chong)和哺(bu)乳動(dong)物(wu)細胞(bao)等分(fen)泌(mi)或(huo)胞(bao)內表達(da)的(de)可(ke)溶(rong)性組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)，也(ye)可(ke)用於變(bian)性蛋(dan)白(bai)的(de)純化（包涵(han)體(ti)需(xu)變(bian)性後(hou)再進(jin)行純化）。

操(cao)作步(bu)驟(zhou)：（僅(jin)供(gong)參(can)考）

1、緩(huan)沖(chong)液的準(zhun)備

目標(biao)蛋白(bai)與(yu)組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)純化磁珠(zhu)的結(jie)合性能(neng)將(jiang)直接影(ying)響目(mu)標(biao)蛋白(bai)的(de)純化效率，而各種緩(huan)沖(chong)液配制(zhi)也將(jiang)在壹定(ding)程(cheng)度(du)上(shang)影響目(mu)標(biao)蛋白(bai)的(de)回(hui)收(shou)率和純度(du)。因此，在較大(da)規模(mo)蛋(dan)白(bai)純化之前，用戶(hu)應該(gai)自(zi)行(xing)設計實(shi)驗，篩(shai)選出適(shi)合純化目標(biao)蛋白(bai)的(de)緩(huan)沖(chong)液體(ti)系(xi)，主要(yao)包(bao)括(kuo) BindingBuffer、Washing Buffer、Elution Buffer。

增(zeng)加(jia)咪(mi)唑(zuo)濃(nong)度(du)進(jin)行洗(xi)脫(tuo)是組an酸(suan)標(biao)簽純化磁珠(zhu)最chang用的洗(xi)脫(tuo)方法，首(shou)ci使(shi)用時，在不確(que)定優(you)良(liang)的(de)洗(xi)脫(tuo)咪 唑(zuo)濃(nong)度(du)情況下(xia)，推薦(jian)在緩(huan)沖(chong)液中分(fen)別(bie)加(jia)入(ru) 10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、300mM、400mM、500mM 咪(mi)唑(zuo)，濃(nong)度(du)從(cong)低到高分(fen)別(bie)洗(xi)脫(tuo)，磁吸後(hou)收(shou)集(ji)蛋(dan)白(bai)上(shang)清液，之後(hou)通過(guo) SDS-PAGE 電泳等方(fang)法鑒(jian)定洗(xi)脫(tuo)結果。

2、樣(yang)本處(chu)理(li)

（1）大(da)腸(chang)桿菌(jun)、酵(jiao)母等細胞(bao)內表達(da)蛋(dan)白(bai)：表(biao)達(da)細胞(bao)用適(shi)量的(de) BindingBuffer 稀(xi)釋，加(jia)入蛋白(bai)酶抑制(zhi)劑（如終濃(nong)度(du)為(wei) 1mM 的(de) PMSF），重懸細胞(bao)，冰(bing)浴(yu)超(chao)聲裂(lie)解(jie)細胞(bao)，即為(wei)粗(cu)蛋白(bai)樣(yang)品。如果樣(yang)品過於(yu)粘(zhan)稠，可(ke)根據需(xu)要在粗樣(yang)品中加入(ru)適(shi)量核酸(suan)酶，冰(bing)浴(yu) 30min，以降解(jie)核酸(suan)。另外，用戶(hu)也可(ke)以根(gen)據實(shi)際需要對(dui)蛋白(bai)樣(yang)品進(jin)行離(li)心操(cao)作。

（2）胞(bao)外表(biao)達(da)蛋(dan)白(bai)：取胞外(wai)表達(da)上(shang)清，用等量(liang) BindingBuffer 稀(xi)釋，即為(wei)粗(cu)蛋白(bai)樣(yang)品。

（3）動物(wu)細胞(bao)胞內表達(da)蛋(dan)白(bai)：取適(shi)量動(dong)物細胞(bao)，先用適(shi)量 PBS 洗(xi)滌 1 次，棄上(shang)清；接著(zhe)用適(shi)量含(han) 1%（v/v） TritonX-100 或(huo) 1%（v/v） NP-40 的(de)BindingBuffer 重懸，加(jia)入(ru)蛋白(bai)酶抑制(zhi)劑（如終濃(nong)度(du)為(wei) 1mM 的(de) PMSF），冰(bing)浴(yu)10min，即為(wei)粗(cu)蛋白(bai)樣(yang)品。

3、磁珠(zhu)預(yu)處(chu)理(li)

壹(yi)般情況下(xia)，磁(ci)珠(zhu)的使用量是(shi)由用戶(hu)根據目(mu)標蛋(dan)白(bai)產量和(he)磁(ci)珠載量信息計算獲(huo)得(de)。例如：采用大腸(chang)桿菌(jun)表(biao)達(da)某(mou)目(mu)標(biao)蛋(dan)白(bai)，500mL 發(fa)酵液收(shou)獲(huo) 2g 濕(shi)重(zhong)的(de)菌(jun)體(ti)，通過(guo)預(yu)實(shi)驗估(gu)算其(qi)目標(biao)蛋白(bai)產量為(wei) 10～20mg，用戶(hu)需要(yao)取 5mL 磁珠(zhu)懸液用於目(mu)標(biao)蛋(dan)白(bai)的(de)純化。以下(xia)即以(yi)此為(wei)例進(jin)行詳(xiang)細說(shuo)明(ming)：

（1）將(jiang)磁(ci)珠(zhu)產品置(zhi)於(yu)漩(xuan)渦(wo)混勻(yun)器(qi)上(shang)充分(fen)混(hun)勻(yun)，用移(yi)液器取 5mL 磁珠(zhu)懸液於 15mL 離(li)心管中，進(jin)行磁(ci)性分(fen)離(li)*， 棄上(shang)清液，從(cong)磁(ci)性分(fen)離(li)器(qi)上(shang)取下(xia)離(li)心管。

（2）加入 5mLBindingBuffer 到上(shang)述裝有磁珠(zhu)的離(li)心管中，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)；進(jin)行磁(ci)性分(fen)離(li)，移(yi)去上(shang)清液。重復(fu)洗(xi)滌 2 次。

（*：在磁性分(fen)離(li)過(guo)程(cheng)中，為(wei)了(le)減(jian)少(shao)磁(ci)珠在使用過程(cheng)中的損(sun)耗，待溶(rong)液變澄清(qing)後(hou)，蓋(gai)緊(jin)離(li)心管蓋(gai)子，保(bao)持(chi)離(li)心管 仍在磁性分(fen)離(li)器(qi)上(shang)，手持(chi)磁(ci)性分(fen)離(li)器(qi)與(yu)離(li)心管上(shang)下(xia)翻轉數(shu)次，使澄清(qing)的(de)溶(rong)液涮洗(xi)離(li)心管蓋(gai)上(shang)殘(can)留的磁(ci)珠，靜(jing)置(zhi)片(pian)刻， 使溶(rong)液重新(xin)變(bian)澄清(qing)；以(yi)下(xia)同(tong)。）

4、目(mu)標(biao)蛋白(bai)與(yu)磁珠(zhu)結合

（1）用 10mLBindingBuffer 懸浮(fu) 2g 濕(shi)重(zhong)的(de)菌(jun)體(ti)，進(jin)行破(po)碎(sui)和(he)裂解(jie)之後(hou)，即為(wei)目(mu)標粗蛋白(bai)樣(yang)品，加入(ru)到裝有預(yu)處(chu)理(li)磁(ci)珠的離(li)心管中，將離(li)心管置(zhi)於(yu)漩(xuan)渦(wo)混勻(yun)器(qi)振蕩(dang) 15s。

（2）將(jiang)離(li)心管置(zhi)於(yu)旋(xuan)轉混合儀上(shang)，室溫(wen)旋(xuan)轉混合 20~30min（如果需(xu)要，可(ke)以在 2~8℃ 的低溫(wen)環境(jing)下(xia)，旋(xuan)轉混 1h， 防止目標(biao)蛋白(bai)降解(jie)）。

（3）將離(li)心管置(zhi)於(yu)磁性分(fen)離(li)器(qi)上(shang)進(jin)行磁(ci)性分(fen)離(li)，移(yi)出上(shang)清液至新(xin)的(de)離(li)心管中以備後(hou)續檢(jian)測(ce)，從(cong)磁(ci)性分(fen)離(li)器(qi)上(shang)取下(xia)離(li)心管進(jin)行後(hou)續洗(xi)滌步驟(zhou)。

5、磁(ci)珠(zhu)洗(xi)滌

（1）加入 10mLWashingBuffer 到裝有磁珠(zhu)的離(li)心管中，輕(qing)輕(qing)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，磁(ci)性分(fen)離(li)，移(yi)出清(qing)洗(xi)液到新(xin)的(de)離(li)心管中，以備取樣檢(jian)測(ce)。重(zhong)復此步驟(zhou) 1 次(ci)。

（2）加(jia)入(ru) 10mLWashingBuffer 到裝有磁珠(zhu)的離(li)心管，使磁珠重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，將(jiang)磁(ci)珠懸(xuan)液轉移(yi)到新(xin)的(de)離(li)心管（避免原離(li)心管壁上(shang)非(fei)特(te)異(yi)性吸(xi)附(fu)蛋白(bai)汙(wu)染(ran)目標(biao)蛋白(bai)），磁(ci)性分(fen)離(li)，移(yi)出上(shang)清液到清洗(xi)液收(shou)集(ji)管。

6、目標蛋白(bai)洗(xi)脫(tuo)

（1）用戶(hu)可(ke)根據需(xu)要改(gai)變洗(xi)脫(tuo)體(ti)積調(tiao)整目標(biao)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度(du)，加入 2~10mLElutionBuffer，輕(qing)輕(qing)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)懸(xuan)浮，磁(ci)性分(fen)離(li)，收(shou)集(ji)洗(xi)脫(tuo)液到新(xin)的(de)離(li)心管中，即為(wei)純化的目(mu)標蛋(dan)白(bai)樣(yang)品。

（2）如果需(xu)要，可(ke)以重(zhong)復(fu)上(shang)述步驟(zhou) 1 次(ci)，收(shou)集(ji)樣(yang)品到新(xin)的(de)離(li)心管中，以檢(jian)測(ce)目(mu)標蛋白(bai)是(shi)否洗脫(tuo)wan全(quan)。

7、磁珠(zhu)後(hou)處(chu)理(li)

（1）在裝有磁珠(zhu)的離(li)心管中加入(ru) 5mLElutionBuffer，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)懸(xuan)浮，磁(ci)性分(fen)離(li)， 去除上(shang)清液。

（2）重復(fu)上(shang)述步驟(zhou) 2 次(ci)。

（3）在離(li)心管中加入(ru) 5mLddH2O，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)懸(xuan)浮，磁(ci)性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液。

（4）重復(fu)上(shang)述步驟(zhou) 2 次(ci)。

（5）加(jia)入(ru) StorageBuffer 到磁珠(zhu)中使總(zong)體(ti)積為(wei) 5mL，保(bao)存於 2~30℃（長(chang)期(qi)保(bao)存，置(zhi)於(yu) 2~8℃），可(ke)用於下(xia)壹(yi)次(ci)同(tong)種蛋(dan)白(bai)的(de)純化。

8、磁珠(zhu)再生

磁(ci)珠(zhu)連(lian)續(xu)使(shi)用三次(ci)以(yi)上(shang)，其(qi)結合目標(biao)蛋(dan)白(bai)的(de)能(neng)力可(ke)能會(hui)明(ming)顯(xian)降低，建議(yi)進(jin)行磁(ci)珠(zhu)再生處(chu)理(li)。

Stripping Buffer：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，100 mM EDTA， pH 7.4

Beads Washing Buffer（可(ke)選）：0.5 M NaOH，2M NaCl

Recharge Buffer：100 mM NiSO4 / CoCl2 （該(gai)化學(xue)試劑具(ju)有(you)壹(yi)定(ding)的(de)毒(du)性，可(ke)能造(zao)成過敏(min)反應，使(shi)用時務必(bi)註意(yi)自(zi)身安(an)全(quan)）

Storage Buffer：20%（v/v）乙醇(chun)

以(yi) 5mL10%（v/v）磁(ci)珠(zhu)懸液為(wei)例，詳(xiang)細說(shuo)明(ming)磁(ci)珠(zhu)再生操(cao)作：

（1）將(jiang)磁珠(zhu)懸(xuan)液進(jin)行磁(ci)性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液，從(cong)磁(ci)性分(fen)離(li)器(qi)上(shang)取下(xia)離(li)心管，在離(li)心管中加入(ru) 5mLddH2O， 上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，磁(ci)性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液。

（2）加入(ru) 5mLStripping Buffer，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，室(shi)溫(wen)旋(xuan)轉混合 5min，磁性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液。重復(fu)此(ci)步驟(zhou) 1 次(ci)。

（3）加(jia)入(ru) 5mLddH2O，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，磁(ci)性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液，重復(fu)此(ci)步驟(zhou) 2 次(ci)。

（4）堿(jian)處(chu)理(li)：加(jia)入 5mLBeadsWashingBuffer，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，室(shi)溫(wen)旋(xuan)轉混合 5min，磁性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液。加入(ru) 5mLddH2O，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，磁(ci)性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液。重復(fu) ddH2O 洗(xi)滌步驟(zhou) 3~5 次(ci)，至洗滌液呈(cheng)中性為(wei)止。

（5）加入(ru) 5mLRechargeBuffer，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，室(shi)溫(wen)旋(xuan)轉混合 20min，磁性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液。

（6）加入(ru) 5mLddH2O，上(shang)下(xia)翻轉離(li)心管數次，使磁(ci)珠(zhu)重(zhong)新(xin)懸(xuan)浮(fu)，磁(ci)性分(fen)離(li)，去除上(shang)清液。重復(fu)此(ci)步驟(zhou) 4 次(ci)以(yi)上(shang)，保(bao)證鎳(nie)離(li)子去除wan全(quan)。

（7）加入(ru) Storage Buffer 到磁珠(zhu)中使總(zong)體(ti)積為(wei) 5mL，保(bao)存於 2~30℃（長(chang)期(qi)保(bao)存，置(zhi)於(yu) 2~8℃）。

蛋白(bai)純化流(liu)程(cheng)的優化

以上(shang)操(cao)作流(liu)程(cheng)適(shi)用於大(da)部分(fen)組an酸(suan)標(biao)簽蛋白(bai)的(de)純化，根據目(mu)標蛋(dan)白(bai)與(yu)金(jin)屬離(li)子螯合磁珠(zhu)的(de)結合性能(neng)不(bu)同(tong)， 用戶(hu)可(ke)以從(cong)以(yi)下(xia)幾個方(fang)面(mian)對(dui)純化流(liu)程(cheng)進(jin)行優(you)化，以提(ti)高目(mu)標(biao)蛋(dan)白(bai)的(de)回(hui)收(shou)率和純度(du)。

提高目(mu)標(biao)蛋白(bai)回(hui)收(shou)率的參(can)考方(fang)法：

（1）降低樣品溶(rong)液和BindingBuffer 中的 Imidazole 濃(nong)度(du)；

（2）樣品溶(rong)液和其(qi)它(ta)緩(huan)沖(chong)液中添(tian)加(jia)表(biao)面活性劑(ji)等物(wu)質(zhi)；

（3）添(tian)加(jia)合適(shi)的蛋(dan)白(bai)酶抑制(zhi)劑，防(fang)止目標(biao)蛋白(bai)降解(jie)；

（4）增加磁珠(zhu)用量；

（5）延(yan)長(chang)蛋(dan)白(bai)與(yu)磁珠(zhu)孵育的時間(jian)；

（6）延(yan)長(chang)洗(xi)脫(tuo)目標蛋(dan)白(bai)的(de)時間(jian)或(huo)增(zeng)加洗脫(tuo)次數。

提(ti)高(gao)目標(biao)蛋白(bai)純度(du)的參(can)考方(fang)法：

（1）提(ti)高樣品溶(rong)液和BindingBuffer 中 Imidazole、NaCl 的濃(nong)度(du)；

（2）樣品和緩(huan)沖(chong)液中添(tian)加(jia)表(biao)面活性劑(ji)等物(wu)質(zhi)；

（3）添(tian)加(jia)合適(shi)的蛋(dan)白(bai)酶抑制(zhi)劑，防(fang)止目標(biao)蛋白(bai)降解(jie)；

（4）延長(chang)洗(xi)滌的時間(jian)，增(zeng)加(jia)洗(xi)滌次數；

（5）采用梯(ti)度(du) Imidazole 濃(nong)度(du)洗脫(tuo)目標蛋(dan)白(bai)。

His-Tag蛋白(bai)純化磁珠(zhu)鎳離(li)子IDA-Nickel

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M0188 His-Tag蛋(dan)白(bai)純化磁珠(zhu)(鎳離(li)子） IDA-Nickel  2*50mL/5mL