是(shi)壹種(zhong)對(dui)活細胞(bao)進行熒光標記的(de)細胞(bao)染色(se)試劑(ji)，發綠(lv)色(se)熒光(guang)（Ex=490nm,Em=515nm）。
Calcein-AM/PI活細胞(bao)/死(si)細胞(bao)雙(shuang)染試劑(ji)盒(he)檢測

NobleRyder CA9418 Calcein-AM/PI活細胞(bao)/死(si)細胞(bao)雙(shuang)染試劑(ji)盒(he)Calcein-AM/PI，Live/Dead Cell Double Stain Kit

產品(pin)貨(huo)號(hao)：CA9418

產品(pin)名稱：Calcein-AM/PI活細胞(bao)/死(si)細胞(bao)雙(shuang)染試劑(ji)盒(he)Calcein-AM/PI，Live/Dead Cell Double Stain Kit

英(ying)文名稱：Calcein-AM/PI，Live/Dead Cell Double Stain Kit

產品(pin)規格：500T

Calcein-AM/PI活細胞(bao)/死(si)細胞(bao)雙(shuang)染試劑(ji)盒(he)檢測

產品(pin)簡(jian)介：

儲存條(tiao)件：-20℃，避(bi)光(guang)，有(you)效(xiao)期1年。

具(ju)體(ti)產品的(de)參(can)數(shu)以收(shou)到產(chan)品說明書(shu)的(de)參(can)數(shu)為準

NobleRyder CA9418 Calcein-AM/PI活細胞(bao)/死(si)細胞(bao)雙(shuang)染試劑(ji)盒(he)Calcein-AM/PI，Live/Dead Cell Double Stain Kit是壹種(zhong)對(dui)活細胞(bao)進行熒光標記的(de)細胞(bao)染色(se)試劑(ji)，發綠(lv)色(se)熒光(guang)（Ex=490nm,Em=515nm）。因其在(zai)傳統(tong)的(de)Calcein（鈣黃綠(lv)素）基(ji)礎上引入(ru)yi酰(xian)甲氧(yang)基甲(jia)酯(zhi)（AM）基團(tuan)，增加了疏(shu)水性(xing)，使其能夠(gou)輕(qing)易(yi)穿透(tou)活細胞(bao)膜。壹旦進入(ru)細胞(bao)後，Calcein-AM（本身(shen)不發熒(ying)光(guang)）被(bei)細胞(bao)內的(de)酯(zhi)酶剪(jian)切形成(cheng)膜非(fei)滲(shen)透(tou)性(xing)的(de)極性分(fen)子Calcein，從(cong)而(er)被(bei)滯(zhi)留(liu)在細胞(bao)內並(bing)發出(chu)強(qiang)綠(lv)色(se)熒光(guang)。與其它(ta)同類試劑(ji)（如(ru)BCECF-AM和CFDA)相比，由(you)於Calcein,AM細胞(bao)毒性(xing)極低，是(shi)最(zui)shi合(he)用(yong)於活細胞(bao)染色(se)的(de)熒光(guang)探(tan)針(zhen)，而(er)且不會(hui)抑制(zhi)任(ren)何(he)的(de)細胞(bao)功(gong)能，如增殖(zhi)和(he)淋巴(ba)球(qiu)的(de)趨(qu)化(hua)性(xing)。

由於死(si)細胞(bao)缺乏(fa)酯(zhi)酶，Calcein-AM僅(jin)用於對(dui)活細胞(bao)的(de)細胞(bao)生存(cun)能(neng)力(li)測試和(he)短(duan)期標記。因(yin)此，Calcein-AM 常(chang)常(chang)與死(si)細胞(bao)熒光(guang)探(tan)針(zhen)如(ru)碘(dian)化bing啶(ding)（PI）等(deng)聯(lian)合(he)使用，同時進行活細胞(bao)和死(si)細胞(bao)的(de)熒光(guang)雙(shuang)重染色(se)。碘(dian)化bing啶(ding)（Propidiumiodide，PI）不(bu)能穿過(guo)活細胞(bao)的(de)細胞(bao)膜，僅(jin)能(neng)穿過(guo)死(si)細胞(bao)膜的(de)無序區(qu)域而到(dao)達(da)細胞(bao)核，並嵌入(ru)細胞(bao)的(de)DNA雙(shuang)螺旋(xuan)從(cong)而(er)產(chan)生紅色(se)熒光(guang)（Ex=535nm,Em=617nm），因此PI 僅(jin)對(dui)死(si)細胞(bao)染色(se)。由於Calcein和PI-DNA都(dou)可被(bei)490nm激發，因(yin)此(ci)可用(yong)熒(ying)光顯(xian)微(wei)鏡(jing)同(tong)時(shi)觀(guan)察活細胞(bao)和死(si)細胞(bao)。而用(yong)545nm激發，僅(jin)可觀(guan)察到(dao)死(si)細胞(bao)。

本試劑(ji)盒(he)的(de)工作原(yuan)理(li)就(jiu)在於Calcein-AM和PI的(de)雙(shuang)重染料，來進行活細胞(bao)和死(si)細胞(bao)的(de)雙(shuang)重染色(se)標記，從(cong)而進行活細胞(bao)和死(si)細胞(bao)水平的(de)分析(xi)。根據我司(si)優(you)化的(de)實驗(yan)體(ti)系(xi)，單次(ci)就(jiu)100µL細胞(bao)懸液(ye)進(jin)行染色(se)，可以(yi)做(zuo)500次檢(jian)測。

使用方法(fa)（僅(jin)供(gong)參(can)考(kao)）：

1. 工作液(ye)的(de)前處理

(1) 從低(di)溫(wen)冰箱內(nei)取出(chu)10×AssayBuffer，根據單次(ci)用量無菌條(tiao)件取出適量，用(yong)去(qu)離子(zi)水10倍(bei)稀(xi)釋(shi)以(yi)得(de)到(dao)1×AssayBuffer。

(2) 由於Calcein-AM 的(de)穩(wen)定性(xing)受溫(wen)度影(ying)響(xiang)較(jiao)大，建議收(shou)到(dao)貨後(hou)，可分(fen)裝(zhuang)為小(xiao)份(fen)，密封(feng)避光保(bao)存於-20℃，不能(neng)反(fan)復凍(dong)融(rong)。若染色(se)液(ye)經稀(xi)釋(shi)，建議當(dang)天用完(wan)。

2. 細胞(bao)處理(li)

(1) 懸浮(fu)生長(chang)的(de)細胞(bao)，收集至(zhi)離心管，450g ，離心5min，去(qu)除上(shang)清(qing)。用(yong)1x的(de)AssayBuffer洗滌(di)細胞(bao)，450g，離心5min，2次(ci)，去(qu)除殘留(liu)酯(zhi)酶。

(2) 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)經0.25%yi酶(mei)-EDTA消(xiao)化後，收(shou)集細胞(bao)，用1x的(de)AssayBuffer洗滌(di)細胞(bao)，450g，離心5min，2次(ci)，去(qu)除yi酶(mei)及(ji)殘留(liu)的(de)酯(zhi)酶。

3. 染色(se)步(bu)驟

(1) 離心得(de)到(dao)的(de)細胞(bao)沈澱用(yong)1×AssayBuffer重(zhong)懸，使重懸後細胞(bao)懸液(ye)計(ji)數(shu)細胞(bao)量為1×105~6個/ml。

(2) 每(mei)1ml的(de)細胞(bao)量加入(ru)1-2ul的(de)Calcein-AM（原(yuan)液(ye)），吹(chui)打混(hun)勻(yun)，37℃避光(guang)孵(fu)育(yu) 20min-25min。

(3) 將(jiang)試劑(ji)盒(he)自(zi)帶(dai)的(de)PI原(yuan)液(ye)取(qu)3-5ul加入(ru)上(shang)述(shu)染色(se)細胞(bao)中，室溫(wen)避(bi)光染色(se)5min。

(4) 孵育(yu)熒(ying)光(guang)後的(de)細胞(bao)，450g，5min，離心去(qu)除染色(se)液(ye)。

註：細胞(bao)進行熒光染色(se)時建議全(quan)程避(bi)光。

(5) 用1x的(de)PBS清洗(xi)細胞(bao)450g，5min，離心後(hou)用(yong)1xPBS重(zhong)懸細胞(bao)，取3-5ul滴(di)在(zai)潔(jie)凈(jing)的(de)載(zai)玻片上，用(yong)幹凈(jing)的(de)蓋玻片壓片後，請(qing)及時(shi)熒光鏡(jing)檢(jian)。

(6)  熒光(guang)顯(xian)微(wei)鏡(jing)下使用490±10nm激發濾(lv)片同時(shi)檢測活細胞(bao)（黃綠(lv)色(se)熒光(guang)）以及死(si)細胞(bao)（紅色(se)熒光(guang)）。另(ling)外，使用545nm的(de)發射(she)濾(lv)片僅能(neng)觀(guan)察到(dao)死(si)細胞(bao)。也可以(yi)直(zhi)接在熒(ying)光(guang)酶(mei)標儀(yi)下使用合適的(de)濾片進行檢測。

註意(yi)事項：

(1) 為了您(nin)的(de)安全(quan)和健(jian)康(kang)，請(qing)穿實驗(yan)服(fu)並(bing)戴壹次性手(shou)套操作。

(2) 貼(tie)壁(bi)細胞(bao)也可以(yi)不(bu)消化(hua)，直(zhi)接去(qu)除培養(yang)基，經1×AssayBuffer浸(jin)洗2min，2次。按(an)上述(shu)細胞(bao)量和(he)染色(se)液(ye)濃(nong)度比例(li)進(jin)行染色(se)，染色(se)時間(jian)和(he)染色(se)液(ye)工(gong)作濃(nong)度可按(an)實際檢測調整(zheng)。

(3) Calcein-AM 作用(yong)於細胞(bao)，壹般(ban)細胞(bao)量在(zai)1×105-6個時(shi)，Calcein-AM的(de)工作濃(nong)度基(ji)本在(zai)2-4µM（如遇(yu)鏡(jing)檢(jian)熒(ying)光(guang)亮度過(guo)強(qiang)，稀(xi)釋(shi)比例(li)可適當(dang)調整(zheng)在(zai)1:500到1:2000或更(geng)大）；PI的(de)工作濃(nong)度在(zai)5µM左(zuo)右。但由於不同(tong)細胞(bao)系(xi)的(de)優(you)良(liang)染色(se)條件(jian)不同，初(chu)次實驗(yan)建議做(zuo)梯(ti)度實驗(yan)，以確定 Calcein-AM和(he)PI的(de)最(zui)適濃(nong)度。梯(ti)度篩(shai)選(xuan)的(de)原(yuan)則(ze)為使用最(zui)di的(de)探針(zhen)濃(nong)度得(de)到(dao)最(zui)hao的(de)熒光(guang)結果(guo)。

(4) 碘(dian)化丙(bing)啶(ding)（PI）有(you)壹定的(de)致(zhi)癌(ai)性(xing)，操作時(shi)壹定要註意(yi)防護。若(ruo)接觸到(dao)皮(pi)膚，需(xu)要立即(ji)用(yong)自(zi)來水清(qing)洗(xi)。

註：可以(yi)使用以下方法(fa)來優(you)化得(de)到(dao)兩(liang)種(zhong)熒(ying)光(guang)染料針(zhen)對(dui)不(bu)同(tong)細胞(bao)的(de)優(you)良(liang)工作濃(nong)度。

a) 用0.1%皂素(su)或(huo)者(zhe)0.1-0.5%地(di)gao辛(xin)孵育細胞(bao)10min，或者(zhe)用(yong)70%乙(yi)醇(chun)孵(fu)育(yu)細胞(bao)30min，從而(er)制(zhi)備(bei)死(si)細胞(bao)；

b) 用0.1-10µM的(de)PI溶液(ye)進(jin)行死(si)細胞(bao)染色(se)，以得(de)到僅僅(jin)對(dui)細胞(bao)核染色(se)，而不(bu)會(hui)對(dui)細胞(bao)質(zhi)染色(se)的(de)優(you)良(liang)工作濃(nong)度。

c) 用0.1-10µM 的(de)Calcein-AM 進行死(si)細胞(bao)染色(se)，以得(de)到不會(hui)對(dui)細胞(bao)質(zhi)染色(se)的(de)優(you)良(liang)工作濃(nong)度。然後用(yong)此(ci)濃(nong)度進(jin)行活細胞(bao)染色(se)，去(qu)觀(guan)察是(shi)否(fou)活細胞(bao)能被(bei)染色(se)。

Calcein-AM/PI活細胞(bao)/死(si)細胞(bao)雙(shuang)染試劑(ji)盒(he)檢測 

產品(pin)訂購(gou)信息(xi)：

CA9418 Calcein-AM/PI活細胞(bao)/死(si)細胞(bao)雙(shuang)染試劑(ji)盒(he)Calcein-AM/PI，Live/Dead Cell Double Stain Kit  500T