是(shi)壹種(zhong)基(ji)於 WST-8的快速、高靈敏度(du)細(xi)胞(bao)活性檢(jian)測(ce)的試(shi)劑盒(he)，廣泛(fan)應(ying)用於細(xi)胞(bao)增殖(zhi)和細(xi)胞(bao)毒性的檢(jian)測(ce)。
CCK-8細(xi)胞(bao)增殖(zhi)及毒性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

NobleRyderCA9098  CCK-8試(shi)劑(ji)盒(he)(細(xi)胞(bao)增殖(zhi)及毒性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產品(pin)貨(huo)號：CA9098

產品(pin)名稱：CCK-8試(shi)劑盒(he)(細(xi)胞(bao)增殖(zhi)及毒性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

英(ying)文(wen)名(ming)稱：CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit

產品(pin)規格：10*1000T/10*500T/1000T/100T/500T

CCK-8細(xi)胞(bao)增殖(zhi)及毒性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒

產品(pin)簡介(jie)：

別(bie)名：CCK-8 WST-8

儲(chu)存(cun)條件：4℃密(mi)封避光(guang)

具體產品(pin)的參數以(yi)收到(dao)產品(pin)說明(ming)書(shu)的參(can)數為(wei)準(zhun)

NobleRyderCA9098  CCK-8試(shi)劑(ji)盒(he)(細(xi)胞(bao)增殖(zhi)及毒性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit  是(shi)壹種(zhong)基(ji)於 WST-8的快速、高靈敏度(du)細(xi)胞(bao)活性檢(jian)測(ce)的試(shi)劑盒(he)，廣泛(fan)應(ying)用於細(xi)胞(bao)增殖(zhi)和細(xi)胞(bao)毒性的檢(jian)測(ce)。WST-8是(shi)壹種(zhong)類似(si)於MTT的化(hua)合物，在電子(zi)耦合試劑存(cun)在(zai)的情(qing)況(kuang)下，可(ke)以(yi)被線粒(li)體內的(de)壹些(xie)脫(tuo)氫(qing)酶還(hai)原(yuan)生(sheng)成橙黃色的(de)水溶性甲臜化合物。細(xi)胞(bao)增殖(zhi)越多(duo)越快，則(ze)顏(yan)色越(yue)深(shen)；細(xi)胞(bao)毒性越大(da)，則顏(yan)色越(yue)淺(qian)。對於同種(zhong)類型細(xi)胞(bao)，顏(yan)色深(shen)淺(qian)與(yu)細(xi)胞(bao)數量(liang)在壹定限(xian)度(du)內呈(cheng)線性關系。

本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)為(wei)即(ji)用型溶液，無(wu)需再行(xing)配(pei)制(zhi)，可(ke)直(zhi)接用於96孔板(ban)細(xi)胞(bao)實驗(yan)，省略了(le)細(xi)胞(bao)洗滌(di)與(yu)收(shou)集等步(bu)驟(zhou)。該(gai)試劑(ji)盒(he)可(ke)用於細(xi)胞(bao)因子(zi)等誘(you)導的細(xi)胞(bao)增殖(zhi)檢(jian)測(ce)，也可(ke)用於抗(kang)癌(ai)藥物(wu)等(deng)對細(xi)胞(bao)有(you)毒試劑(ji)誘(you)導的細(xi)胞(bao)毒性檢(jian)測(ce)，或壹(yi)些藥(yao)物誘導的細(xi)胞(bao)生(sheng)長抑制(zhi)檢(jian)測(ce)。

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)：（僅(jin)供參(can)考）

壹(yi)、制(zhi)作(zuo)標準(zhun)曲(qu)線

1.先(xian)用細(xi)胞(bao)ji數板(ban)計數所(suo)制(zhi)備(bei)的細(xi)胞(bao)懸液中(zhong)的(de)細(xi)胞(bao)數量(liang)，然後(hou)接種(zhong)細(xi)胞(bao)。

2.按(an)比例(li)依(yi)次(ci)用培(pei)養基(ji)等(deng)比稀(xi)釋成壹個(ge)細(xi)胞(bao)濃度(du)梯度(du)，壹(yi)般要做(zuo)3-5個細(xi)胞(bao)濃度(du)梯度(du)，每(mei)組(zu)3-6個復孔。

3.接種(zhong)後(hou)培(pei)養至(zhi)細(xi)胞(bao)貼壁(bi)，然(ran)後(hou)加CCK-8溶液培(pei)養壹(yi)定(ding)時間後(hou)測(ce)定OD值，制(zhi)作(zuo)出(chu)壹條以(yi)細(xi)胞(bao)數量(liang)為橫坐(zuo)標（X軸），OD值為縱坐(zuo)標（Y軸）的標準(zhun)曲(qu)線。

4.根(gen)據此標準(zhun)曲(qu)線可(ke)以(yi)測(ce)定出(chu)未知(zhi)樣品(pin)的細(xi)胞(bao)數量(liang)（試用此標準(zhun)曲(qu)線的(de)前提是(shi)實驗(yan)的條件要(yao)壹致，便(bian)於確(que)定(ding)細(xi)胞(bao)的接種(zhong)數量(liang)以及加入(ru)CCK-8後(hou)的培(pei)養時(shi)間。）

二、細(xi)胞(bao)活性檢(jian)測(ce)

1.在(zai)96孔(kong)板(ban)中接種(zhong)細(xi)胞(bao)懸液（100µL/孔(kong)）。將(jiang)培(pei)養板(ban)放在培(pei)養箱(xiang)中(zhong)預培(pei)養（在(zai)37℃，5%CO2的(de)條件下(xia)）。

2.向(xiang)培(pei)養板(ban)加(jia)入10µL不(bu)同濃度(du)的(de)待(dai)測(ce)物質(zhi)。在培(pei)養箱(xiang)孵(fu)育壹段(duan)時(shi)間（例(li)如(ru)：6、12、24或48小(xiao)時(shi)）。

 3.向(xiang)培(pei)養板(ban)加(jia)入10µL不(bu)同濃度(du)的(de)待(dai)測(ce)物質(zhi)。在培(pei)養箱(xiang)孵(fu)育壹段(duan)時(shi)間（例(li)如(ru)：6、12、24或48小(xiao)時(shi)）。向(xiang)每(mei)孔(kong)加入(ru)10µLCCK-8溶液（註(zhu)意不(bu)要在(zai)孔中(zhong)生(sheng)成氣泡(pao)，它們(men)會影響(xiang) OD 值的讀數）。如(ru)果(guo)待(dai)測(ce)物質(zhi)有(you)氧化(hua)性或還原(yuan)性的話，可(ke)在(zai)加CCK-8溶液之前更(geng)換(huan)新鮮培(pei)養基(ji)（除(chu)去(qu)培(pei)養基(ji)，並(bing)用培(pei)養基(ji)洗滌(di)細(xi)胞(bao)兩次(ci)，然(ran)後(hou)加入(ru)新(xin)的(de)培(pei)養基(ji)），去(qu)掉(diao)藥物(wu)影響(xiang)。

 4.將(jiang)培(pei)養板(ban)在(zai)培(pei)養箱(xiang)內孵(fu)育1-4小(xiao)時(shi)，用酶標儀測(ce)定在(zai)450nm處的(de)吸光(guang)度(du)。

 5.如(ru)果(guo)暫時不(bu)測(ce)定 OD 值，可(ke)以(yi)向每(mei)孔(kong)中加(jia)入(ru)10µL0.1M的(de)HCl或(huo)者(zhe)1%SDS(W/V)溶液，並(bing)遮(zhe)蓋培(pei)養板(ban)避(bi)光(guang)保存在(zai)室溫條件下(xia)。在24小(xiao)時(shi)內吸光(guang)度(du)不(bu)會發(fa)生(sheng)變化。

活(huo)力(li)計算：

細(xi)胞(bao)活力（％）=[A(加(jia)藥)－A(空白(bai))]／[A(0 加藥(yao))－A(空白(bai))]×100

A（加(jia)藥(yao)）：具有(you)細(xi)胞(bao)、CCK-8溶液和(he)藥(yao)物(wu)溶液的(de)孔(kong)的(de)吸光(guang)度(du)

A（空白(bai)）：具有(you)培(pei)養基(ji)和(he) CCK-8溶液而(er)沒(mei)有(you)細(xi)胞(bao)的孔的(de)吸光(guang)度(du)

A（0加(jia)藥(yao)）：具有(you)細(xi)胞(bao)、CCK-8溶液而(er)沒(mei)有(you)藥物(wu)溶液的(de)孔(kong)的(de)吸光(guang)度(du)

細(xi)胞(bao)活力：細(xi)胞(bao)增殖(zhi)活力(li)或細(xi)胞(bao)毒性活力

註(zhu)意事項：

1.本(ben)試(shi)劑(ji)顏(yan)色應(ying)為粉(fen)紅(hong)色(se)，如(ru)果(guo)發(fa)現(xian)溶液變黃應(ying)棄用。

 2.由於使(shi)用96孔板(ban)進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)，如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)培(pei)養時(shi)間較(jiao)長，壹定(ding)要註(zhu)意蒸發(fa)問(wen)題(ti)。由於96孔板(ban)周圍(wei)壹(yi)圈(quan)最容(rong)易蒸發(fa)，可(ke)以(yi)采取棄用周圍(wei)壹(yi)圈(quan)的辦法(fa)，改加(jia)相同量的(de)PBS、水或(huo)培(pei)養液。

 3.本(ben)試(shi)劑(ji)盒(he)的(de)檢(jian)測(ce)依(yi)賴於脫氫(qing)酶催(cui)化的反(fan)應(ying)，所以(yi)還原(yuan)劑(例如(ru)壹些(xie)抗(kang)氧(yang)化(hua)劑(ji))會幹(gan)擾檢(jian)測(ce)，如(ru)果(guo)待(dai)檢(jian)測(ce)體系(xi)中存(cun)在較(jiao)多(duo)的還原(yuan)劑，需設(she)法(fa)去(qu)除。

 4.建(jian)議(yi)先(xian)做(zuo)幾(ji)個(ge)孔(kong)摸(mo)索(suo)接種(zhong)細(xi)胞(bao)的數量(liang)和加入CCK-8試(shi)劑後(hou)的培(pei)養時(shi)間，白(bai)細(xi)胞(bao)可(ke)能(neng)培(pei)養時(shi)間較(jiao)長。

 5.當(dang)使(shi)用標準(zhun)96孔(kong)板(ban)時(shi)，貼壁(bi)細(xi)胞(bao)的最小(xiao)接種(zhong)量(liang)至少為1000個/孔 (100µL培(pei)養基(ji))。檢(jian)測(ce)白(bai)細(xi)胞(bao)時的靈敏度(du)相對較(jiao)低(di)，因(yin)此推薦接種(zhong)量(liang)不(bu)低(di)於2500 個/孔(kong) (100µL培(pei)養基(ji))。如(ru)果(guo)要(yao)使(shi)用24孔板(ban)或(huo)6孔板實驗(yan)，請先(xian)計算每(mei)孔(kong)相應(ying)的接種(zhong)量(liang)，並按(an)照每(mei)孔(kong)培(pei)養基(ji)總(zong)體積(ji)的10%加入(ru)CCK-8溶液。

 6.如(ru)果(guo)沒(mei)有(you)450nm的濾(lv)光(guang)片(pian)，可(ke)以(yi)使(shi)用吸光(guang)度(du)在(zai)430-490nm之間的(de)濾光(guang)片(pian)，但是(shi)450nm檢(jian)測(ce)靈敏度(du)最(zui)高(gao)。

 7.培(pei)養基(ji)中(zhong)酚(fen)紅(hong)的(de)吸光(guang)度(du)可(ke)以(yi)在計算時，通(tong)過(guo)扣(kou)除(chu)空白(bai)孔中(zhong)本(ben)底的吸光(guang)度(du)而(er)消去(qu)，因此不(bu)會對檢(jian)測(ce)造成影響(xiang)。

CCK-8細(xi)胞(bao)增殖(zhi)及毒性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒 

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CA9098  CCK-8試(shi)劑(ji)盒(he)(細(xi)胞(bao)增殖(zhi)及毒性檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒)CCK-8 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit  10*1000T/10*500T/1000T/100T/500T