CAT(EC 1.11.1.6)廣(guang)泛(fan)存(cun)在(zai)於(yu)動物、植物、微生(sheng)物(wu)和(he)培養細(xi)胞(bao)中(zhong)，是最主(zhu)要的H2O2清(qing)除(chu)酶(mei)，在(zai)活性(xing)氧(yang)清(qing)除(chu)系(xi)統(tong)中(zhong)具有(you)重(zhong)要作(zuo)用。
過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)CAT活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)鉬酸(suan)銨(an)法(fa)抗逆(ni)

NobleRyder BC2568過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)（CAT）活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)（鉬酸(suan)銨(an)法(fa)) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

產品(pin)貨(huo)號(hao)：BC2568

產品(pin)名稱(cheng)：過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)（CAT）活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)（鉬酸(suan)銨(an)法(fa)) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

產品(pin)規(gui)格(ge)：50T/24S

過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)CAT活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)鉬酸(suan)銨(an)法(fa)抗逆(ni)

產品(pin)簡(jian)介(jie)：

中(zhong)文名稱(cheng)：過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)（CAT）活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)（鉬酸(suan)銨(an)法(fa)）

英文名稱(cheng)：Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

規(gui)格(ge)：50T/24S

檢(jian)測方法(fa)：可(ke)見分(fen)光光度(du)法(fa) Spectrophotometer

儲存(cun)條件：Store at 2-8℃，6 months

具體(ti)產品(pin)的參(can)數(shu)以(yi)收到產品(pin)說明(ming)書的參(can)數(shu)為(wei)準

NobleRyder BC2568過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)（CAT）活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)（鉬酸(suan)銨(an)法(fa)) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method）

產品(pin)說(shuo)明(ming):

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛(fan)存(cun)在(zai)於(yu)動物、植物、微生(sheng)物(wu)和(he)培養細(xi)胞(bao)中(zhong)，是最主(zhu)要的H₂O₂清(qing)除(chu)酶(mei)，在(zai)活性(xing)氧(yang)清(qing)除(chu)系(xi)統(tong)中(zhong)具有(you)重(zhong)要作(zuo)用。

H₂O₂可(ke)與鉬酸(suan)銨(an)反(fan)應形(xing)成穩(wen)定的黃(huang)色復(fu)合物(wu)，在(zai)405nm處(chu)有強烈吸(xi)收(shou)峰，且(qie)其吸光值(zhi)大小(xiao)與過(guo)氧(yang)化(hua)氫濃度(du)成(cheng)

正(zheng)比(bi)。通(tong)過(guo)測(ce)定反應體(ti)系中(zhong)剩余(yu)的H₂O₂量(liang)，得(de)出(chu)被(bei)CAT催(cui)化(hua)分(fen)解(jie)的H₂O₂量(liang)，進而反映CAT的活(huo)性(xing)。

註意(yi)：實(shi)驗(yan)之(zhi)前建議(yi)選(xuan)擇(ze)2-3個預期差異大的樣(yang)本(ben)做(zuo)預實(shi)驗(yan)。

需(xu)自備(bei)的儀(yi)器(qi)和(he)用品:

可(ke)見分(fen)光光度(du)計(ji)、臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機、可(ke)調(tiao)式(shi)移液(ye)器、恒溫(wen)水浴(yu)鍋、1mL玻(bo)璃(li)比(bi)色皿、研缽(bo)/勻漿器(qi)/細(xi)胞(bao)超聲破碎儀(yi)、冰(bing)和(he)蒸(zheng)餾水。

操作(zuo)步(bu)驟(zhou)：

壹、樣(yang)本(ben)處(chu)理(可(ke)適當(dang)調(tiao)整(zheng)待測樣(yang)本(ben)量，具(ju)體(ti)比例(li)可(ke)以(yi)參(can)考文獻)

1、細菌(jun)、細(xi)胞(bao)或組(zu)織樣(yang)本(ben)的制備(bei):

a、細菌(jun)或(huo)培養細(xi)胞(bao):收集細菌(jun)或(huo)細胞(bao)到離(li)心(xin)管(guan)內(nei)，離(li)心(xin)後(hou)棄(qi)上(shang)清(qing):按(an)照每500萬細菌(jun)或(huo)細(xi)胞(bao)加入1mL提取液(ye)，超聲波破碎細(xi)菌或(huo)細胞(bao)(功(gong)率(lv)200W，超聲3s，間(jian)隔(ge)9s，重(zhong)復(fu)30次(ci)):8000g，4℃離(li)心(xin)10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測。

b、組織:按(an)照組織質(zhi)量(liang)(g):提取液(ye)體(ti)積(ji)(V)=1:5~10(建議(yi)稱(cheng)取(qu)約0.1g組(zu)織，加(jia)入1mL提取液(ye))進行冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿。8000g，4℃離(li)心(xin)10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待測。

2、血清(qing)(漿)樣(yang)本(ben)：直接檢(jian)測。

二、測(ce)定步(bu)驟(zhou)

分(fen)光光度(du)計(ji)預(yu)熱(re)30min以(yi)上(shang)，調(tiao)節(jie)波長至(zhi)405nm，蒸(zheng)餾水調(tiao)零。

1、測定前將(jiang)20μmol/mL標(biao)準(zhun)品與試(shi)劑(ji)壹(yi)在(zai)25C水浴(yu)10min以(yi)上(shang)。

三、CAT活(huo)性(xing)計算(suan)

1、血清(qing)(漿)CAT活(huo)力(li)的計(ji)算(suan):

單(dan)位(wei)的定義:在(zai)25℃條件(jian)下(xia)，每mL血清(qing)(漿)每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)1μmolH₂O₂降解(jie)定義為(wei)壹個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

CAT(U/mL)= (△A÷△A標(biao)準(zhun))x20xV標(biao)準(zhun)+V樣+TxF=10x(△A+△A標(biao)準(zhun))xF

2、組織、細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)中(zhong)CAT活力(li)計算(suan):

1)按(an)樣本(ben)蛋白濃度(du)計(ji)算(suan):

單(dan)位(wei)的定義:在(zai)25℃條件(jian)下(xia)，每mg組(zu)織蛋(dan)白每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)1μmol H₂O₂降解(jie)定義為(wei)壹個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

CAT(U/mg prot)=(△A+△A標(biao)準(zhun))x20xV標(biao)準(zhun)+(CprxV樣) +TxF=10x(AA÷AA標(biao)準(zhun))÷CprxF

2)按(an)樣本(ben)質量(liang)計(ji)算:

單(dan)位(wei)的定義:在(zai)25℃條件(jian)下(xia)，每g組(zu)織每(mei)分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)1μmol H₂O₂降解(jie)定義為(wei)壹個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

CAT(U/g質量(liang))=(△A+△A標(biao)準(zhun))x20xV標(biao)準(zhun)+(V 樣+V 樣總xW) +TxF=10x(△A+ΔA標(biao)準(zhun)) ÷WxF

3)按(an)細菌(jun)或細(xi)胞(bao)數量(liang)計(ji)算:

單(dan)位(wei)的定義:在(zai)25℃條件(jian)下(xia)，每1萬(wan)個細菌(jun)或(huo)細胞(bao)每分(fen)鐘(zhong)催(cui)化(hua)1μmol H₂O₂降解(jie)定義為(wei)壹個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

CAT(U/104cell)= (△A÷△A標(biao)準(zhun))x20xV標(biao)準(zhun)+(V樣+V樣總x500)+TxF=0.02x(△A÷△A標(biao)準(zhun))xF

20:標(biao)準(zhun)品濃度(du)，20μmol/mL:V標(biao)準(zhun):加入標(biao)準(zhun)品體(ti)積(ji)，0.3mL:V樣:加(jia)入樣本體(ti)積(ji)，0.06mL:T:反應時(shi)間(jian)，10min:F:樣(yang)本稀釋(shi)倍(bei)數:Cpr:樣本(ben)蛋白質(zhi)濃度(du)，mg/mL;V樣(yang)總(zong):加(jia)入提取液(ye)體(ti)積(ji)，1mL:W:樣本(ben)質量(liang)，g;500:細胞(bao)或細(xi)菌(jun)總數(shu)，500萬。

註意(yi)事(shi)項(xiang):

1.本試(shi)劑(ji)盒(he)多(duo)給(gei)出(chu)25mL的提取液(ye)，供樣(yang)本(ben)稀釋(shi)使(shi)用。

2.如果(guo)反(fan)應液(ye)有大量氣泡產生，將(jiang)樣本(ben)用提取液(ye)稀釋(shi)後(hou)再進行測(ce)定。

3.如果(guo)樣(yang)本(ben)量過(guo)多(duo)，為(wei)保證反(fan)應時(shi)間(jian)(25℃，10min)的準(zhun)確(que)性(xing)，建議(yi)分(fen)成(cheng)若幹(gan)批(pi)次(ci)檢(jian)測，每(mei)批次(ci)檢(jian)測均(jun)需(xu)配1-2個空白管(guan)與(yu)標(biao)準(zhun)管(guan)。

4.當A測(ce)定小(xiao)於(yu)0.12或(huo)者(zhe)約等(deng)於(yu)A對(dui)照時，建議(yi)將(jiang)樣本(ben)用提取液(ye)稀釋(shi)後(hou)再進行測(ce)定。

5.動物組織如(ru)肝(gan)臟(zang)、腎臟(zang)等(deng)酶(mei)活(huo)性(xing)較高(gao)樣本(ben)，預(yu)實(shi)驗(yan)建議(yi)將(jiang)樣本(ben)用提取液(ye)多個高倍(bei)稀釋(shi)(如(ru)25倍(bei)、50倍(bei)、100倍(bei)等)試(shi)驗(yan)後(hou)，再進行檢(jian)測。

過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)CAT活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)鉬酸(suan)銨(an)法(fa)抗逆(ni) 

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BC2568過(guo)氧(yang)化(hua)氫酶(mei)（CAT）活(huo)性(xing)檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)（鉬酸(suan)銨(an)法(fa)) Catalase (CAT) Activity Assay Kit （Ammonium Molybdate-Chromogenic Method） 50T/24S