SOD（EC 1.15.1.1）是(shi)壹(yi)種廣泛(fan)存在(zai)於生(sheng)物(wu)體(ti)內的金屬酶(mei)，是(shi)重(zhong)要(yao)的氧(yang)自由(you)基清除(chu)劑(ji)，能(neng)催(cui)化超氧(yang)化物陰(yin)離(li)子發生(sheng)歧(qi)化作用，生(sheng)成H2O2和O2。SOD不僅是(shi)超氧(yang)化物陰(yin)離(li)子清除(chu)酶(mei)，也(ye)是(shi)H2O2主要生(sheng)成酶，在(zai)生物(wu)抗氧(yang)化系(xi)統(tong)中具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)作用。
超(chao)氧(yang)化物歧(qi)化酶(SOD)活(huo)性檢測試劑(ji)盒 抗逆(ni)

NobleRyder BC8953超(chao)氧化物歧(qi)化酶(SOD)活(huo)性檢測試劑(ji)盒 Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

產(chan)品貨(huo)號(hao)：BC8953

產(chan)品名(ming)稱：超(chao)氧(yang)化物歧(qi)化酶(SOD)活(huo)性檢測試劑(ji)盒 Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

產(chan)品規格(ge)：100T/48S

超(chao)氧化物歧(qi)化酶(SOD)活(huo)性檢測試劑(ji)盒 抗逆(ni)

產(chan)品簡介：

中文名(ming)稱：超(chao)氧(yang)化物歧(qi)化酶(SOD)活(huo)性檢測試劑(ji)盒

英(ying)文名(ming)稱：Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

規格(ge)：100T/48S

檢測方(fang)法(fa)：微量(liang)法(fa) Spectrophotometer/Microplate Reader

儲(chu)存條(tiao)件(jian)：Store at 2-8℃，6 months

具(ju)體(ti)產(chan)品的(de)參(can)數(shu)以(yi)收(shou)到產品(pin)說明(ming)書(shu)的(de)參(can)數為準(zhun)

NobleRyder BC8953超(chao)氧化物歧(qi)化酶(SOD)活(huo)性檢測試劑(ji)盒 Superoxide Dismutase(SOD) Activity Assay Kit

SOD（EC 1.15.1.1）是(shi)壹(yi)種廣泛(fan)存在(zai)於生(sheng)物(wu)體(ti)內的金屬酶(mei)，是(shi)重(zhong)要(yao)的氧(yang)自由(you)基清除(chu)劑(ji)，能(neng)催(cui)化超氧(yang)化物陰(yin)離(li)子發生(sheng)歧(qi)化作用，生(sheng)成H₂O₂和O₂。SOD不僅是(shi)超氧(yang)化物陰(yin)離(li)子清除(chu)酶(mei)，也(ye)是(shi)H₂O₂主要生(sheng)成酶，在(zai)生物(wu)抗氧(yang)化系(xi)統(tong)中具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)作用。

通過黃piao呤(ling)及(ji)黃piao呤(ling)氧化酶反(fan)應(ying)系(xi)統(tong)產(chan)生(sheng)超氧陰(yin)離(li)子(O2-)，O2-可還(hai)原氮(dan)藍(lan)四唑(zuo)生(sheng)成藍(lan)色甲臜(臜)，後(hou)者(zhe)在(zai)560nm處(chu)有(you)吸收(shou)；SOD可清除(chu)O2-，從而抑(yi)制了(le)甲臜(臜)的(de)形(xing)成；反應(ying)液(ye)藍(lan)色越(yue)深，說明(ming)SOD活(huo)性愈(yu)低(di)，反之(zhi)活性越(yue)高。

需自備的儀(yi)器和用品(pin)：

可見(jian)分(fen)光光度計(ji)/酶(mei)標儀(yi)、臺(tai)式(shi)離(li)心機(ji)、可調式(shi)移液器(qi)、微(wei)量(liang)玻璃比(bi)色皿/96孔板(ban)、研(yan)缽(bo)/勻(yun)漿(jiang)器/細(xi)胞超聲(sheng)破(po)碎(sui)儀(yi)、冰(bing)和蒸餾水。

操(cao)作步驟：

壹(yi)、樣本(ben)處(chu)理(li)(可適當(dang)調整待測樣(yang)本(ben)量(liang)，具(ju)體(ti)比(bi)例可以(yi)參(can)考文獻(xian))

1.細(xi)胞、細(xi)菌樣(yang)本(ben)：先(xian)收(shou)集細(xi)菌或(huo)細(xi)胞到離(li)心管(guan)內，離(li)心後(hou)棄上(shang)清，按(an)照(zhao)每(mei)500萬細(xi)菌或(huo)細(xi)胞加入(ru)1mL提取液(ye)，超(chao)聲波破(po)碎(sui)(功率(lv)200w，超(chao)聲(sheng)3s，間隔10s，重(zhong)復(fu)30次)。8000g4C離(li)心10分(fen)鐘，取(qu)上清，置(zhi)冰(bing)上待測。

2.組織樣本(ben)：按照組織質量(liang)(g)：提取液(ye)體(ti)積(ji)(mL)為1：5-10的(de)比(bi)例(建議(yi)稱取(qu)約(yue)0.1g組織，加入(ru)1mL提取液(ye))，進(jin)行冰(bing)浴(yu)勻(yun)漿(jiang)：8000g4℃離(li)心10min，取(qu)上(shang)靖(jing)，置冰(bing)上待測。

3.血(xue)清(漿(jiang))樣本(ben)：直(zhi)接檢測。

二(er)、測定步驟

1.分(fen)光光度計(ji)/酶(mei)標儀(yi)預(yu)熱30min以(yi)上(shang)，調節(jie)波長至(zhi)560nm，分(fen)光光度計(ji)蒸(zheng)餾水調零。

2.臨(lin)用前根(gen)據(ju)樣(yang)本(ben)數(shu)量(liang)取部分(fen)試劑(ji)壹(yi)、試劑(ji)三和試劑(ji)四(si)工作(zuo)液37℃水浴(yu)5min 以(yi)上(shang)。

三、SOD活性計(ji)算(suan)

1、抑(yi)制百(bai)分(fen)率的(de)計(ji)算(suan)

抑(yi)制百(bai)分(fen)率=(ΔA空(kong)白(bai)-△A測(ce)定)÷△A空白(bai)x100%

盡(jin)量(liang)使樣(yang)本的抑制百(bai)分(fen)率在(zai)30-70%範(fan)圍(wei)內，越(yue)靠(kao)近(jin)50%越(yue)準(zhun)確。如果(guo)計(ji)算(suan)出來(lai)的(de)抑(yi)制百(bai)分(fen)率小(xiao)於30%或(huo)大於70%，則(ze)通常(chang)需要(yao)調整加樣量(liang)後重(zhong)新(xin)測定。如果(guo)測(ce)定出來(lai)的(de)抑(yi)制百(bai)分(fen)率偏(pian)高，則需適當(dang)稀(xi)釋樣(yang)本;如果(guo)測(ce)定出來(lai)的(de)抑(yi)制百(bai)分(fen)率偏(pian)低,則(ze)需重(zhong)新(xin)準(zhun)備濃(nong)度比(bi)較(jiao)高的待測樣(yang)本(ben)或者提高操(cao)作表中樣(yang)本(ben)體(ti)積(ji),同時(shi)減(jian)少(shao)相(xiang)同(tong)的(de)蒸(zheng)餾水體(ti)積(ji)。

2、SOD酶(mei)活性單(dan)位(wei)：在(zai)1mL體(ti)系(xi)中，上(shang)述(shu)黃piao呤(ling)氧化酶偶聯反(fan)應(ying)體(ti)系(xi)中抑(yi)制百(bai)分(fen)率為50%時(shi)，反應(ying)體(ti)系(xi)中的(de) SOD酶(mei)活性定義為壹(yi)個酶(mei)活性單(dan)位(wei)。

3、SOD酶(mei)活性計(ji)算(suan)：

(1)血(xue)清(漿(jiang))SOD活性(U/mL)=[抑(yi)制百(bai)分(fen)率+(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)xV 反(fan)總]+1mL÷V 樣(yang)xF

=10x抑(yi)制百(bai)分(fen)率÷(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)xF

(2)組織、細(xi)菌或(huo)培(pei)養(yang)細(xi)胞SOD活性計(ji)算(suan)：

a.按(an)樣本(ben)蛋白(bai)濃(nong)度計(ji)算(suan)

SOD活(huo)性(U/mg prot)=[抑(yi)制百(bai)分(fen)率÷(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)xV 反(fan)總]+1mL +(V 樣(yang)xCpr)xF

=10x抑(yi)制百(bai)分(fen)率+(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)÷CprxF

b.按(an)樣本(ben)質(zhi)量(liang)計(ji)算(suan)

SOD活(huo)性(U/g質(zhi)量(liang))=[抑制百(bai)分(fen)率+(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)xV 反(fan)總]+1mL +(WxV 樣(yang)+V 樣總)xF

=10x抑(yi)制百(bai)分(fen)率+(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)÷WxF

c.按(an)細(xi)菌或(huo)細(xi)胞數量(liang)計(ji)算(suan)

SOD活(huo)性(U/10⁴cell)=[抑(yi)制百(bai)分(fen)率+(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)xV 反(fan)總]+1mL+(NxV 樣(yang)+V 樣總)xF

=10x抑(yi)制百(bai)分(fen)率+(1-抑(yi)制百(bai)分(fen)率)xF÷N

V反(fan)總：反(fan)應(ying)總體(ti)積(ji)，0.2mL;V樣：加入(ru)反應(ying)體(ti)系(xi)中的(de)樣(yang)本體(ti)積(ji)，0.02mL;V樣總：加入(ru)提取液(ye)體(ti)積(ji)1mL：

Cpr：蛋白(bai)樣(yang)本濃(nong)度，mg/mL：W：樣(yang)本(ben)質量(liang)，g;N：細(xi)胞或細(xi)菌總數(shu)，以(yi)萬(wan)計(ji);F：樣(yang)本(ben)稀(xi)釋倍(bei)數：1mL：1mL反應(ying)體(ti)系(xi)。

註(zhu)意事(shi)項(xiang)：

1、樣(yang)本和試劑(ji)二(er)工作(zuo)液使(shi)用時(shi)在(zai)冰(bing)上放(fang)置。

2、樣(yang)本較(jiao)多(duo)時(shi)，可按(an)表格(ge)配制測(ce)定管(guan)工作液(ye)和對照管(guan)工作液(ye)(包含試(shi)劑(ji)壹(yi)、(試劑(ji)二(er)工作(zuo)液)、試(shi)劑(ji)三、蒸餾水)，試(shi)劑(ji)四(si)工作(zuo)液必(bi)須(xu)最(zui)後(hou)加入(ru)。

3、反(fan)應(ying)完(wan)成後，可能(neng)有(you)沈(chen)澱生成，混(hun)勻(yun)後(hou)測(ce)定即可。

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