測(ce)定意(yi)義(yi)：GSH是(shi)細(xi)胞(bao)內(nei)最(zui)主(zhu)要的抗(kang)氧(yang)化(hua)巰基(ji)物質，在抗(kang)氧(yang)化(hua)、蛋(dan)白質巰基(ji)保護(hu)和氨基酸(suan)跨(kua)膜運輸(shu)等(deng)中具有重要作(zuo)用。還原型與(yu)氧(yang)化(hua)型比值(zhi)（GSH/GSSG）是(shi)細(xi)胞(bao)氧(yang)化(hua)還原狀(zhuang)態的主(zhu)要動(dong)態指(zhi)標(biao)。因(yin)此，測(ce)定細胞(bao)內(nei)GSH和(he)GSSG含量(liang)以及(ji)GSH/GSSG比值(zhi)，能(neng)夠很(hen)好(hao)地反(fan)映細胞(bao)所處的氧(yang)化(hua)還原狀(zhuang)態。
還(hai)原型谷胱gan肽GSH含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) 抗(kang)逆(ni)

NobleRyder BC9953還(hai)原型谷胱gan肽(GSH)含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

產(chan)品(pin)貨號(hao)：BC9953

產(chan)品(pin)名(ming)稱：還(hai)原型谷胱gan肽(GSH)含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

產(chan)品(pin)規格(ge)：100T/96S

還(hai)原型谷胱gan肽GSH含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) 抗(kang)逆(ni)

產(chan)品(pin)簡介：

中(zhong)文名(ming)稱：還(hai)原型谷胱gan肽(GSH)含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he)

英(ying)文名(ming)稱：Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

別(bie)名(ming)：還原型谷胱gan肽試(shi)劑(ji)盒(he) GSH Kit 還原型谷胱gan肽（GSH）試(shi)劑(ji)盒(he) 還原型谷胱gan肽（GSH）測(ce)試(shi)盒

規格(ge)：100T/96S

檢(jian)測(ce)方(fang)法：微量(liang)法 Spectrophotometer/Microplate Reader

儲存(cun)條(tiao)件：Store at 2-8℃，6 months

具體產(chan)品(pin)的參數(shu)以收到(dao)產(chan)品(pin)說明書的參數(shu)為準(zhun)

NobleRyder BC9953還(hai)原型谷胱gan肽(GSH)含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit

測(ce)定意(yi)義(yi)：GSH是(shi)細(xi)胞(bao)內(nei)最(zui)主(zhu)要的抗(kang)氧(yang)化(hua)巰基(ji)物質，在抗(kang)氧(yang)化(hua)、蛋(dan)白質巰基(ji)保護(hu)和氨基酸(suan)跨(kua)膜運輸(shu)等(deng)中具有重要作(zuo)用。還原型與(yu)氧(yang)化(hua)型比值(zhi)（GSH/GSSG）是(shi)細(xi)胞(bao)氧(yang)化(hua)還原狀(zhuang)態的主(zhu)要動(dong)態指(zhi)標(biao)。因(yin)此，測(ce)定細胞(bao)內(nei)GSH和(he)GSSG含量(liang)以及(ji)GSH/GSSG比值(zhi)，能(neng)夠很(hen)好(hao)地反(fan)映細胞(bao)所處的氧(yang)化(hua)還原狀(zhuang)態。

測(ce)定原理：DTNB與(yu)GSH反應(ying)生(sheng)成(cheng)復(fu)合(he)物，在412nm處(chu)有(you)特征吸(xi)收峰；其吸(xi)光度與(yu)GSH含量(liang)成正(zheng)比。

需(xu)要的儀器(qi)，耗(hao)材(cai):低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機(ji)、水(shui)浴(yu)鍋(guo)、可調節(jie)移(yi)液(ye)器、可見(jian)分(fen)光光度計/酶標(biao)儀、微量(liang)玻璃(li)比色皿(min)/96孔板、和(he)蒸餾水(shui)。

產(chan)品(pin)說明:

谷胱gan肽是由谷an酸(Glu)、半胱(guang)an酸(suan)(Cys)和甘an酸(Gly)組成的天(tian)然(ran)三肽，是壹(yi)種(zhong)含巰基(ji)(-SH)的化(hua)合物，廣泛(fan)存(cun)在於動(dong)物組織(zhi)、植物組織(zhi)、微生(sheng)物和酵(jiao)母(mu)中。谷胱gan肽能和(he)5,5'-二(er)硫代-雙(shuang)-(2-硝基苯(ben)甲酸(suan))(5,5-dithiobis-2-nitrobenoicacid，DTNB)反應(ying)產生2-硝基-5-巰基(ji)苯(ben)甲酸(suan)和谷胱gan肽二(er)硫化(hua)物(GSSG)。2-硝基-5-巰基(ji)苯(ben)甲酸(suan)為黃(huang)色產(chan)物，在波長412nm處(chu)具有最(zui)大(da)光吸(xi)收。

技(ji)術(shu)指(zhi)標(biao):

最(zui)di檢(jian)出(chu)限:3.763μg/mL

線(xian)性(xing)範圍:12.5-400μg/mL

操作(zuo)步(bu)驟:

壹(yi)、樣本處(chu)理(li)(可適(shi)當調(tiao)整(zheng)待(dai)測(ce)樣本量(liang)，具體比例可以參考文獻)

1.組(zu)織(zhi):按照組織(zhi)質量(liang)(g):試(shi)劑(ji)壹(yi)體積(mL)為1:5~10的比例(建(jian)議(yi)稱取約(yue)0.1g組(zu)織(zhi)，加入ImL試(shi)劑(ji)壹(yi))進(jin)行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿(勻漿器/研缽提前放冰(bing)上(shang)預(yu)冷)。12000g，4℃離心(xin)10min，取上(shang)清(qing)液(ye)放置於4℃待測(ce)。若(ruo)暫(zan)時不能完(wan)成(cheng)測(ce)試(shi)可放於-80C保存(cun)(可保存(cun)3天)。

2.細(xi)菌(jun)、細胞(bao):按照細胞(bao)數(shu)量(liang)(106個):試(shi)劑(ji)壹(yi)體積(mL)為5~10:1的比例(建(jian)議(yi)5百萬(wan)細(xi)胞(bao)加入ImL試(shi)劑(ji)壹(yi))，反復(fu)凍(dong)融(rong)2-3次(ci)(可在液(ye)氮中凍結(jie)、37C水(shui)浴(yu)中(zhong)溶(rong)解)或(huo)者(zhe)冰(bing)浴(yu)超聲(sheng)波破(po)碎(sui)細胞(bao)(功率200w，超聲(sheng)3s,間隔(ge)10s，重復(fu)30次(ci))，12000g，4℃離(li)心(xin)10分(fen)鐘，取上(shang)清(qing)置於冰(bing)上(shang)待測(ce)。若(ruo)暫(zan)時不能完(wan)成(cheng)測(ce)試(shi)可放於-80℃保存(cun)(可保存(cun)3天)。

3.血(xue)液(ye)處理(li)

血(xue)漿(jiang):將收(shou)集(ji)的抗(kang)凝(ning)血於4℃，600g離心(xin)10分(fen)鐘，吸(xi)取上(shang)層(ceng)血漿到(dao)另(ling)壹支(zhi)試(shi)管中，加入等(deng)體積(ji)的試(shi)劑(ji)壹(yi)，沸水(shui)浴(yu)5min(纏(chan)封(feng)口膜，防(fang)止(zhi)爆(bao)蓋(gai))。之(zhi)後(hou)12000g，4℃離心(xin)10分(fen)鐘，將上(shang)清(qing)移(yi)入(ru)新的試(shi)管中放置於4C待測(ce)，若(ruo)暫(zan)時不能完(wan)成(cheng)測(ce)試(shi)可放於-80C保存(cun)(可保存(cun)3天)。

血(xue)細(xi)胞(bao):將收(shou)集(ji)的抗(kang)凝(ning)血於4C，600g離心(xin)10分(fen)鐘，棄(qi)去(qu)上層(ceng)血漿用3倍體(ti)積(ji)的PBS清(qing)洗(xi)3次(用PBS重懸(xuan)血細(xi)胞(bao)，600g離(li)心(xin)10分(fen)鐘)，加入等(deng)體積(ji)試(shi)劑(ji)壹(yi)，沸水(shui)浴(yu)5min(纏(chan)封(feng)口膜，防(fang)止(zhi)爆(bao)蓋(gai))。之(zhi)後(hou)12000g，4℃離心(xin)10分(fen)鐘，吸(xi)取上(shang)清(qing)放於4℃待測(ce)，若(ruo)暫(zan)時不能完(wan)成(cheng)測(ce)試(shi)可放於-80C保存(cun)(可保存(cun)3天)。

二(er)、測(ce)定步驟

1、分(fen)光光度計或(huo)酶標(biao)儀預(yu)熱30min以上，調節(jie)波長至(zhi)412nm，分(fen)光光度計蒸餾水(shui)調(tiao)零(ling)。

2、標(biao)準(zhun)品(pin)的準(zhun)備:吸(xi)取10mg/mL標(biao)準(zhun)溶(rong)液(ye),用蒸餾水(shui)稀(xi)釋至300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL。

三、GSH含量(liang)計算

1.標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)的繪制

據(ju)標(biao)準(zhun)管的濃(nong)度(x，μg/mL)和(he)吸(xi)光度△A標(biao)準(zhun)(y，△A標(biao)準(zhun))，建立(li)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)。根(gen)據(ju)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，將△A(y，△A)帶(dai)入公(gong)式(shi)計算樣本濃(nong)度(x，μg/mL).

2.GSH含(han)量(liang)計算:

(1)按蛋(dan)白濃(nong)度計算

GSH含(han)量(liang)(μg/mg prot)=xxV樣+(V樣xCpr) =x-Cpr

(2)按樣本質量(liang)計算

GSH含(han)量(liang)(μg/g質量(liang)) =xxV 樣+(V 樣+V 樣總(zong)xW)=x+W

Solarbio

(3)按細胞(bao)/細(xi)菌(jun)數(shu)量(liang)計算

GSH含(han)量(liang)(μg/106cell) =xxV 樣÷(V 樣÷V 樣總(zong)xN)=x÷N

(4)按血漿(血細(xi)胞(bao))體(ti)積(ji)計算

GSH含(han)量(liang)(μg/mL)=2x

V樣總(zong):上(shang)清液(ye)總(zong)體(ti)積，1mL:V樣:加入反應(ying)體(ti)系(xi)中(zhong)上(shang)清液(ye)體積(ji)，20μL=0.02mL;W:樣本質量(liang)，g:

Cpr:上(shang)清(qing)液(ye)蛋(dan)白質濃(nong)度，mg/mL;N:細(xi)胞(bao)/細(xi)菌(jun)數(shu)量(liang)，以106為單位計;2:稀釋倍數(shu)，血(xue)漿(jiang)(血(xue)細(xi)胞(bao))體(ti)積(ji)被稀釋壹倍。

註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang):

1、若(ruo)不(bu)確定樣本中(zhong)GSH含(han)量(liang)的高低(di)，可稀釋幾(ji)個梯度後(hou)再進(jin)行(xing)測(ce)量(liang)。

2、因(yin)為試(shi)劑(ji)壹(yi)中含有蛋(dan)白質沈澱劑(ji)，因(yin)此上(shang)清液(ye)不能(neng)月(yue)於蛋(dan)白濃(nong)度測(ce)定。如需(xu)測(ce)定蛋(dan)白含(han)量(liang)，需(xu)另取組(zu)織(zhi)。

3、如(ru)果測(ce)定吸(xi)光值(zhi)超過(guo)線(xian)性(xing)範圍吸(xi)光值(zhi)，可以增(zeng)加樣本量(liang)或(huo)者(zhe)稀(xi)釋樣本後(hou)再進(jin)行(xing)測(ce)定。

還(hai)原型谷胱gan肽GSH含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) 抗(kang)逆(ni) 

產(chan)品(pin)訂(ding)購(gou)信(xin)息(xi)：

BC9953還(hai)原型谷胱gan肽(GSH)含量(liang)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)盒(he) Reduced Glutathione(GSH) Content Assay Kit 100T/96S