在(zai)Rubisco的(de)催化(hua)下(xia)，1分子(zi)的(de)核(he)酮(tong)糖(tang)-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子(zi)的(de)CO2結合，產(chan)生(sheng)2分子(zi)的(de)3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通過外(wai)加(jia)的(de)3-磷酸甘油酸激(ji)酶(mei)和甘油醛-3-磷酸脫氫(qing)酶(mei)的(de)作用(yong)，產(chan)生(sheng)甘油醛-3-磷酸，並(bing)使(shi)還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I（NADH）氧化(hua)。因(yin)此，340nm吸(xi)光度的(de)變化(hua)可計(ji)算(suan)還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I氧化(hua)速(su)率(lv)，還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I氧化(hua)速(su)率(lv)可反(fan)應Rubisco的(de)活(huo)性(xing)。
二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)活(huo)性(xing)試(shi)劑盒光合(he)

NobleRyder BC8223  二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)(Rubisco)活(huo)性(xing)檢測試(shi)劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

產(chan)品(pin)貨號(hao)：BC8223

產(chan)品(pin)名(ming)稱：二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)(Rubisco)活(huo)性(xing)檢測試(shi)劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

產(chan)品(pin)規格：100T/96S

二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)活(huo)性(xing)試(shi)劑盒光合(he)

產(chan)品(pin)簡介(jie)：

中文名(ming)稱：二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)(Rubisco)活(huo)性(xing)檢測試(shi)劑盒

英(ying)文名(ming)稱：Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

規格：100T/96S

檢測方(fang)法(fa)：微(wei)量(liang)法(fa) Spectrophotometer/Microplate Reader

儲存條件(jian)：Store at -20℃，6 months

具體產(chan)品(pin)的(de)參(can)數以收到產(chan)品(pin)說明(ming)書(shu)的(de)參(can)數為準(zhun)

NobleRyder BC8223二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)(Rubisco)活(huo)性(xing)檢測試(shi)劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit

測定(ding)原(yuan)理：

在(zai)Rubisco的(de)催化(hua)下(xia)，1分子(zi)的(de)核(he)酮(tong)糖(tang)-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子(zi)的(de)CO2結合，產(chan)生(sheng)2分子(zi)的(de)3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通過外(wai)加(jia)的(de)3-磷酸甘油酸激(ji)酶(mei)和甘油醛-3-磷酸脫氫(qing)酶(mei)的(de)作用(yong)，產(chan)生(sheng)甘油醛-3-磷酸，並(bing)使(shi)還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I（NADH）氧化(hua)。因(yin)此，340nm吸(xi)光度的(de)變化(hua)可計(ji)算(suan)還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I氧化(hua)速(su)率(lv)，還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I氧化(hua)速(su)率(lv)可反(fan)應Rubisco的(de)活(huo)性(xing)。

需(xu)要(yao)的(de)儀(yi)器(qi)，耗(hao)材(cai)：分光光度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀、臺(tai)式(shi)離(li)心機(ji)、水(shui)浴鍋、可調式(shi)移(yi)液器(qi)、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)/96孔板(ban)、研缽、冰(bing)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

測定(ding)意(yi)義：

核(he)酮(tong)糖(tang)-1,5-二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)/加(jia)氧酶(mei)（EC 4.1.1.39）是(shi)植物(wu)光合(he)作用(yong)中(zhong)的(de)壹個關(guan)鍵(jian)酶(mei)，既控制著CO2的(de)固定，同時又(you)制約著碳素向Calvin循(xun)環和光呼吸循(xun)環分流(liu)，其(qi)活(huo)性(xing)的(de)大(da)小直接影(ying)響(xiang)著光合(he)速(su)率(lv)。

測定(ding)原(yuan)理：

在(zai)Rubisco的(de)催化(hua)下(xia)，1分子(zi)的(de)核(he)酮(tong)糖(tang)-1，5-二磷酸（RuBP）與1分子(zi)的(de)CO2結合，產(chan)生(sheng)2分子(zi)的(de)3-磷酸甘油酸（PGA），PGA可通過外(wai)加(jia)的(de)3-磷酸甘油酸激(ji)酶(mei)和甘油醛-3-磷酸脫氫(qing)酶(mei)的(de)作用(yong)，產(chan)生(sheng)甘油醛-3-磷酸，並(bing)使(shi)還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I（NADH）氧化(hua)。因(yin)此，340nm吸(xi)光度的(de)變化(hua)可計(ji)算(suan)還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I氧化(hua)速(su)率(lv)，還(hai)原(yuan)型輔(fu)酶(mei)I氧化(hua)速(su)率(lv)可反(fan)應Rubisco的(de)活(huo)性(xing)。需(xu)要(yao)的(de)儀(yi)器(qi)，耗(hao)材(cai)：分光光度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀、臺(tai)式(shi)離(li)心機(ji)、水(shui)浴鍋、可調式(shi)移(yi)液器(qi)、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)/96孔板(ban)、研缽、冰(bing)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

產(chan)品(pin)說明(ming)：

1,5-二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)/加(jia)氧酶(mei)(Rubisco,EC4.1.1.39)是(shi)植物(wu)光合(he)作用(yong)中(zhong)的(de)壹個關(guan)鍵(jian)酶(mei)，既控制著CO2的(de)固定，同時又(you)制約著碳素向Calvin循(xun)環和光呼吸循(xun)環分流(liu)，其(qi)活(huo)性(xing)的(de)大(da)小直接影(ying)響(xiang)著光合(he)速(su)率(lv)。

在(zai)Rubisco的(de)催化(hua)下(xia),1分子(zi)的(de)核(he)酮(tong)糖(tang)-1,5-二磷酸(RuBP)與1分子(zi)的(de)CO2結合，產(chan)生(sheng)2分子(zi)的(de)3-磷酸甘油酸(PGA)：PGA可通過外(wai)加(jia)的(de)3-磷酸甘油酸激(ji)酶(mei)和甘油醛-3-磷酸脫氫(qing)酶(mei)的(de)作用(yong)，產(chan)生(sheng)甘油醛-3-磷酸，伴隨(sui)著NADH氧化(hua)生(sheng)成(cheng)NAD*：在(zai)340nm NADH有(you)特(te)征(zheng)吸(xi)收峰(feng)，而NAD+沒(mei)有(you)此吸(xi)收峰(feng)，因(yin)此測定(ding)340nm吸(xi)光度下降速(su)率(lv)可以代(dai)表Rubisco的(de)羧化(hua)酶(mei)活(huo)性(xing)。

註意：實驗之前建(jian)議選擇(ze)2-3個(ge)預期差(cha)異大(da)的(de)樣(yang)本做(zuo)預實驗。

需(xu)自(zi)備(bei)的(de)儀(yi)器(qi)和用(yong)品(pin)：

紫外分光光度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀、臺(tai)式(shi)離(li)心機(ji)、水(shui)浴鍋、可調式(shi)移(yi)液器(qi)、微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)/96孔UV板(ban)、研缽/勻漿(jiang)器(qi)、冰(bing)和蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

操作步(bu)驟(zhou)：

壹、樣(yang)本處(chu)理(可適當(dang)調整(zheng)待(dai)測樣(yang)本量(liang)，具體比例可以參(can)考文獻)

1、細菌或細胞(bao)樣(yang)本的(de)制備(bei)：收(shou)集(ji)細菌或細胞(bao)到離(li)心管內，離(li)心後棄(qi)上(shang)清(qing)：按(an)照每500萬(wan)細菌或細胞(bao)加(jia)入(ru)lmL提(ti)取(qu)液(ye)，超聲(sheng)波(bo)破碎(sui)細菌或細胞(bao)(功率200W，超聲(sheng)3s，間(jian)隔10s，重(zhong)復30次(ci))：10000g4℃離(li)心10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測。

2、稱取(qu)約0.1g組織(zhi)加(jia)入(ru)1mL提(ti)取(qu)液(ye)，冰(bing)浴中勻漿(jiang)。10000g，4℃離(li)心10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置(zhi)冰(bing)上(shang)待(dai)測。建(jian)議選取(qu)新鮮的(de)植(zhi)物(wu)樣(yang)本。

二、測定(ding)步(bu)驟

1、分光光度計(ji)/酶(mei)標(biao)儀預(yu)熱(re)30min以上(shang)，調節波(bo)長(chang)至(zhi)340nm，蒸(zheng)餾(liu)水(shui)調零。

三(san)、Rubisco活(huo)性(xing)計(ji)算(suan)

a.使(shi)用(yong)微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如下：

1.按(an)樣(yang)本蛋(dan)白濃度計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義：25C中(zhong)每毫克蛋(dan)白(bai)每分鐘(zhong)氧化(hua)1nmolNADH為(wei)壹個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

Rubisco活(huo)力(U/mg prot) =[AAxV反(fan)總÷(εxd) x10°]+(CprxV樣(yang)) +T =344x△A+Cpr

2.按(an)樣(yang)本質量計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義：25℃中(zhong)每g組織(zhi)每分鐘(zhong)氧化(hua)1nmolNADH為(wei)壹個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

Rubisco活(huo)力(U/g質量)=[ΔAxV反(fan)總÷ (εxd) x10°]÷(V樣(yang)÷V樣(yang)總xW)+T=344xΔA+W

3.按(an)細菌或細胞(bao)數量計(ji)算(suan)

單(dan)位(wei)的(de)定(ding)義：25C中(zhong)每1萬(wan)個細菌或細胞(bao)每分鐘(zhong)氧化(hua)1nmolNADH為(wei)壹個酶(mei)活(huo)力單(dan)位(wei)。

Rubisco活(huo)力(U/104cell) =[ΔAxV反(fan)總÷ (εxd) x10°]÷(V樣(yang)÷V樣(yang)總x500)÷T=0.69x△A

V反(fan)總：反(fan)應體系(xi)總體積(ji)，2.14x10-L;ε：NADH摩爾消光系(xi)數，6.22x103L/molcm;d：微(wei)量(liang)石(shi)英(ying)比(bi)色皿(min)光徑(jing)，

1cm：V樣(yang)：加(jia)入(ru)樣(yang)本體積(ji)，0.02mL：V樣(yang)總：加(jia)入(ru)提(ti)取(qu)液(ye)體積(ji)，1mL;T：反(fan)應時間(jian)，5min;W：樣(yang)本質量，g;500：細胞(bao)或細菌總數，500萬(wan);109：單(dan)位(wei)換算(suan)系(xi)數，Imol=10°nmol。

b.使(shi)用(yong)96孔UV板(ban)測定(ding)的(de)計(ji)算(suan)公(gong)式(shi)如下：

將上(shang)述(shu)公(gong)式(shi)中(zhong)光徑(jing)d-1cm改(gai)為(wei)d-0.6cm(96孔UV板(ban)光徑(jing))進(jin)行(xing)計(ji)算(suan)。

二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)活(huo)性(xing)試(shi)劑盒光合(he) 

產(chan)品(pin)訂購信(xin)息(xi)：

BC8223二磷酸核(he)酮(tong)糖(tang)羧化(hua)酶(mei)/加(jia)氧酶(mei)(Rubisco)活(huo)性(xing)檢測試(shi)劑盒 Rubisco-Bisphosphate Carboxylase/Oxygenase (Rubisco) Activity Assay Kit 100T/96S