堿(jian)性(xing)磷(lin)酸(suan)酶(Alkaline phosphatase，簡(jian)稱(cheng)ALP或AKP)為(wei)壹(yi)類(lei)磷(lin)酸(suan)酯(zhi)酶，廣泛(fan)分(fen)布於哺乳(ru)動(dong)物組(zu)織內，其(qi)活性(xing)所需最適pH 9.2~9.8。
堿性(xing)磷酸(suan)酶(mei)染色(se)試劑盒(he)偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa)

NobleRyder G9268 堿(jian)性磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試(shi)劑盒(he)(偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa))Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

產(chan)品貨(huo)號：G9268

產(chan)品名(ming)稱：堿(jian)性(xing)磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試劑盒(he)(偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa))，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

產(chan)品規(gui)格：4*2ml/4*10ml/4*20ml

堿(jian)性磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試(shi)劑盒(he)偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa)

產(chan)品簡(jian)介(jie)：

中文(wen)名(ming)稱：堿(jian)性(xing)磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試劑盒(he)(偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa))

英(ying)文(wen)名(ming)稱：Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)

規(gui)格：4*2ml ; 4*10ml ; 4*20ml

儲存(cun)條(tiao)件(jian)：-20℃，避光(guang)保存(cun)，有(you)效(xiao)期6個(ge)月(yue)。

具體產(chan)品(pin)的參數以(yi)收(shou)到產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書的參數為(wei)準(zhun)

堿(jian)性磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試(shi)劑盒(he)(偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa))，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)產(chan)品介(jie)紹(shao)

堿(jian)性磷(lin)酸酶(Alkaline phosphatase，簡(jian)稱(cheng)ALP或AKP)為(wei)壹(yi)類(lei)磷(lin)酸(suan)酯(zhi)酶，廣泛(fan)分(fen)布於哺乳(ru)動(dong)物組(zu)織內，其(qi)活性(xing)所需最適pH 9.2~9.8。此酶(mei)主要(yao)存(cun)在(zai)於物質交(jiao)換(huan)活躍(yue)處(細(xi)胞(bao)膜(mo))，如(ru)腸上(shang)皮和(he)腎近(jin)曲小管(guan)的刷(shua)狀(zhuang)緣、附睪(gao)上(shang)皮之靜纖(xian)毛、肝的毛(mao)細(xi)膽(dan)管膜(mo)以(yi)及微(wei)動(dong)脈(mai)和(he)毛細(xi)血(xue)管(guan)動(dong)脈(mai)部(bu)之內皮，還(hai)見(jian)於內質網、高(gao)爾基復合(he)體、吞(tun)飲小泡(pao)、腸上(shang)皮之溶酶體、中性粒細(xi)胞(bao)之中性顆粒以及平滑(hua)肌之細(xi)胞(bao)膜(mo)。

堿(jian)性磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試(shi)劑盒(he)(偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa))采用(yong)偶(ou)氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa)來顯示(shi)堿性(xing)磷酸酶活性，其(qi)原理是在(zai)pH9.2～9.8的堿(jian)性(xing)條(tiao)件(jian)下，細(xi)胞(bao)內堿性(xing)磷酸(suan)酶(mei)可(ke)使底(di)物水解，原位釋放萘(nai)fen與(yu)呈(cheng)色偶(ou)氮(dan)染(ran)料(liao)生(sheng)成(cheng)不(bu)溶有色(se)產(chan)物，定(ding)位於細(xi)胞(bao)質(zhi)中。該染液可用(yong)於血液、骨髓或細(xi)胞(bao)塗片(pian)、冰凍(dong)切(qie)片(pian)等(deng)的堿(jian)性(xing)磷酸(suan)酶染(ran)色(se)，活(huo)性部(bu)位呈(cheng)藍(lan)色，位(wei)於胞(bao)漿(jiang) ，結果較(jiao)金屬(shu)鹽(yan)沈澱(dian)法(fa)準(zhun)確。

自(zi)備材料(liao)：

載(zai)玻(bo)片(pian)、濕盒、普(pu)通光學顯微(wei)鏡(jing)

操(cao)作步(bu)驟(zhou)：(僅供參考) 試劑(C): 核(he)固(gu)紅染色(se)液可能會(hui)由於絮凝(ning)產生(sheng)懸浮(fu)物或少量(liang)沈(chen)澱(dian)，建(jian)議取(qu)上(shang)清(qing)使用(yong)或沸(fei)水浴5-10min後(hou)晾(liang)至30-40℃使用(yong)。（見(jian)註意事項(xiang)3）

(壹(yi)) 樣(yang)本處理：

1、 細(xi)胞(bao)塗片(pian)：取(qu)新(xin)鮮(xian)全血(xue)或骨髓制(zhi)備塗片(pian)，推玻(bo)片(pian)於載(zai)玻(bo)片(pian)保(bao)持(chi)30度，置於血液或細(xi)胞(bao)滴(di)液的正(zheng)前(qian)方(fang)，稍往(wang)後(hou)移(yi)與(yu)血液或細(xi)胞(bao)滴(di)液接觸使後(hou)者沿推片(pian)下(xia)緣散開，再(zai)勻速沿載(zai)玻(bo)片(pian)平(ping)面(mian)平(ping)穩向(xiang)前滑(hua)動(dong)至(zhi)均(jun)勻(yun)鋪(pu)開(kai)為(wei)止(zhi)，自(zi)然晾幹。

2、 貼壁培(pei)養細(xi)胞(bao)、細(xi)胞(bao)爬(pa)片(pian)：吸(xi)去培(pei)養基，1×PBS清洗3-4次(ci)，瀝(li)去(qu)多余(yu)水分(fen)。取(qu)出(chu)細(xi)胞(bao)爬(pa)片(pian)。

3、 冰凍(dong)切(qie)片(pian)：從(cong)冰箱取(qu)出(chu)放(fang)置恢(hui)復室(shi)溫(wen)，浸(jin)入蒸(zheng)餾(liu)水清洗1-2min，瀝去多余(yu)水分(fen)。

(二(er)) 染色(se)孵育：

1、使用(yong)2-8℃預冷(leng)的ALP固(gu)定(ding)液固定(ding)30s-3min，多數情(qing)況(kuang)下(xia)30-60s即(ji)可(ke)。（見(jian)註意事項(xiang)2）

2、蒸(zheng)餾(liu)水洗，瀝去多余(yu)水分(fen)(不宜(yi)過(guo)分(fen)幹燥)。

3、（切(qie)片(pian)處理）滴(di)加ALP孵(fu)育(yu)液覆蓋切(qie)片(pian)，置於濕盒內37℃溫(wen)箱孵育(yu)15-20min，蒸(zheng)餾(liu)水洗。

4、 （貼壁細(xi)胞(bao)）滴(di)加 ALP孵(fu)育(yu)液覆蓋細(xi)胞(bao)，置於37℃溫(wen)箱孵育(yu)15-20min，蒸(zheng)餾(liu)水洗。

5、復染：核(he)固(gu)紅或甲(jia)基綠復染液染色3-5min，對(dui)於冰凍(dong)切(qie)片(pian)，壹(yi)般(ban)染(ran)色1-2min即(ji)可(ke)。

(三(san)) 封片(pian)觀(guan)察：

1、（切(qie)片(pian)處理）蒸(zheng)餾(liu)水稍洗，瀝去多余(yu)水分(fen)，滴(di)加水性封片(pian)劑封片(pian)後(hou)鏡(jing)檢觀(guan)察。

2、（貼壁細(xi)胞(bao)）蒸(zheng)餾(liu)水稍洗，可帶(dai)水或1×PBS鏡下(xia)觀(guan)察。

註(zhu)意事項(xiang)：

1. 血(xue)液或骨髓細(xi)胞(bao)塗片(pian)或其(qi)他樣(yang)本均(jun)應新(xin)鮮(xian)，薄厚適宜(yi)，及(ji)時(shi)固定(ding)，否則(ze)會(hui)影響(xiang)酶(mei)的活(huo)性(xing)。

2. 對(dui)於培(pei)養細(xi)胞(bao)和(he)細(xi)胞(bao)爬(pa)片(pian)，如(ru)果固定(ding)後(hou)有(you)細(xi)胞(bao)漂浮(fu)現(xian)象(xiang)，可(ke)以(yi)使用(yong)4%多聚甲(jia)醛(quan)代替(ti)ALP固定(ding)液進(jin)行固(gu)定(ding)處理，室(shi)溫(wen)固定(ding)10-15min。

3. 試(shi)劑(C): 核(he)固(gu)紅染色(se)液為(wei)膠體性(xing)質(zhi)溶液，低溫(wen)（低於25℃）保存(cun)或長(chang)期儲存(cun)由於絮凝(ning)產生(sheng)懸浮(fu)物或少量(liang)沈(chen)澱(dian)，屬(shu)於正常現(xian)象(xiang)，壹(yi)般(ban)不(bu)影響(xiang)使用(yong)。如(ru)移(yi)液器吸(xi)取(qu)觀(guan)察到明(ming)顯渾(hun)濁(zhuo)，可(ke)擰緊(jin)瓶(ping)蓋沸(fei)水浴5-10min重新(xin)制(zhi)備分(fen)散均(jun)勻(yun)的膠(jiao)體溶液來恢(hui)復使用(yong)。

4. 培(pei)養細(xi)胞(bao)染(ran)色(se)操(cao)作過程中，清洗、染色等步驟(zhou)都應輕(qing)微(wei)，以(yi)免損傷(shang)或丟失(shi)細(xi)胞(bao)。

5. ALP 孵(fu)育液易失效或降低陽(yang)性(xing)強(qiang)度，即(ji)配(pei)即(ji)用(yong)，不(bu)宜(yi)久置。

6. 復染時(shi)，核(he)固(gu)紅染色(se)液或甲(jia)基綠染(ran)色液二者取(qu)其(qi)壹(yi)。

7. 每(mei)次(ci)染(ran)色(se)時(shi)，應有陽(yang)性對(dui)照片(pian)。

堿(jian)性磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試(shi)劑盒(he)偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa) 

產(chan)品訂(ding)購(gou)信(xin)息(xi)：

NobleRyder G9268 堿(jian)性磷(lin)酸酶染(ran)色(se)試(shi)劑盒(he)(偶氮(dan)偶(ou)聯(lian)法(fa))，Alkaline Phophatase Stain Kit(Kaplow’s/Azo Coupling Method)  4*2ml/4*10ml/4*20ml