超氧(yang)化物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)（Superoxide Dismutase, SOD）試(shi)劑盒(he)說(shuo)明書（NBT 法）

分光(guang)光(guang)度(du)法 50 管(guan)/48 樣(yang)

超氧(yang)化物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)試劑盒(he) 抗逆

正式(shi)測(ce)定(ding)前(qian)務(wu)必取 2-3 個(ge)預期(qi)差(cha)異較大的樣(yang)本做預測(ce)定(ding)測(ce)定(ding)意義(yi)：

SOD（EC 1.15.1.1）廣(guang)泛存(cun)在(zai)於動物(wu)、植(zhi)物(wu)、微(wei)生物(wu)和(he)培養(yang)細(xi)胞(bao)中，催(cui)化(hua)超氧(yang)化物(wu)陰離子發(fa)生岐化(hua)作(zuo)用(yong)，生成H2O2 和(he)O2。SOD 不僅是(shi)超氧(yang)化物(wu)陰離子清除酶(mei)，也是(shi) H2O2 主要生成酶(mei)，在(zai)生物(wu)抗(kang)氧(yang)化系統(tong)中(zhong)具(ju)有(you)重(zhong)要作(zuo)用(yong)。

測(ce)定(ding)原理(li)：

通(tong)過黃piao呤及黃piao呤氧(yang)化酶(mei)反(fan)應系(xi)統(tong)產(chan)生超氧(yang)陰離子(O^2-.)，O2-.可(ke)還原(yuan)氮(dan)藍四唑(zuo)生成藍色(se)甲臜(臜)，後(hou)者(zhe)在(zai) 560nm 處有吸(xi)收；SOD 可清除 O^2-.，從(cong)而(er)抑(yi)制了(le)甲臜(臜)的形(xing)成；反(fan)應液(ye)藍(lan)色越(yue)深(shen)，說(shuo)明 SOD 活性(xing)愈(yu)低(di)，反(fan)之(zhi)活性(xing)越(yue)高(gao)。

組成：

自備(bei)儀器和(he)用(yong)品(pin)：

可見(jian)分光(guang)光(guang)度(du)計、臺式(shi)離心(xin)機、可調(tiao)式(shi)移液(ye)器、1ml 玻璃比(bi)色(se)皿(min)、研(yan)缽、冰和(he)蒸餾水(shui)

粗酶(mei)液(ye)提取：

1、細(xi)菌(jun)、細(xi)胞(bao)或組織(zhi)樣(yang)品(pin)的制(zhi)備(bei)：

細(xi)菌(jun)或培養(yang)細(xi)胞(bao)：先(xian)收集(ji)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)到離(li)心(xin)管內，離心(xin)後(hou)棄上(shang)清；按(an)照細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)數量(liang)（104 個(ge)）：提取液(ye)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的比(bi)例(li)（建議(yi) 500 萬細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)加入 1ml 提取液(ye)），超聲波破(po)碎細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)（冰浴(yu)，功(gong)率(lv) 20％或 200W，超聲 3s，間(jian)隔(ge) 10s，重(zhong)復 30 次(ci)）；8000g 4℃離(li)心(xin) 10min，取上(shang)清，置冰上(shang)待(dai)測(ce)。

組(zu)織：按(an)照組(zu)織質量（g）：提取液(ye)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的比(bi)例(li)（建議(yi)稱取約(yue) 0.1g 組織，加(jia)入 1ml 提取液(ye)），進行(xing)冰浴(yu)勻漿(jiang)。8000g 4℃離(li)心 10min，取上(shang)清，置冰上(shang)待(dai)測(ce)。

2、血(xue)清（漿(jiang)）樣(yang)品(pin)：直(zhi)接檢測(ce)。

測(ce)定(ding)步驟：

1、分光(guang)光(guang)度(du)計預熱(re) 30min 以上，調節(jie)波長(chang)至 560nm，蒸餾水(shui)調(tiao)零。

2、將試(shi)劑二(er)用(yong)蒸餾水(shui)稀(xi)釋(shi)兩倍，用(yong)多(duo)少(shao)配(pei)多(duo)少(shao)。（試(shi)劑二(er)和(he)蒸餾水(shui) 1：1 稀(xi)釋(shi)）

3、將壹(yi)瓶試(shi)劑四用(yong) 5ml 蒸餾水(shui)溶(rong)解（溶(rong)解後(hou)壹周(zhou)內用(yong)完），再用(yong)蒸餾水(shui)稀(xi)釋(shi) 4 倍，用(yong)多(duo)少(shao)配(pei)多(duo)少(shao)（試(shi)劑四和(he)蒸餾水(shui) 1：3 稀(xi)釋(shi)）。

4、測(ce)定(ding)前(qian)將試(shi)劑壹(yi)、三和(he)四在(zai) 37℃（哺乳(ru)動物(wu)）或 25℃（其他(ta)物(wu)種(zhong)）水(shui)浴(yu) 5min 以上。

5、樣(yang)本測(ce)定(ding)（在(zai)EP 管中(zhong)依(yi)次(ci)加(jia)入下列(lie)試(shi)劑）：

充(chong)分混勻，室(shi)溫靜(jing)置 30min 後(hou)，加入 1ml 玻(bo)璃比(bi)色(se)皿(min)，560nm 處測(ce)定(ding)各(ge)管(guan)吸(xi)光值 A。

註意事項(xiang)：

1、試劑二(er)為(wei)酶(mei)，不可冷(leng)凍(dong)，使用(yong)時(shi)在(zai)冰上(shang)放(fang)置。

2、對照管只需(xu)要(yao)做(zuo)壹管(guan)。

3、若(ruo)對照管吸(xi)光值大於(yu) 2，建議(yi)將試(shi)劑二(er)用(yong)蒸餾水(shui)稀(xi)釋(shi) 7 倍後(hou)使用(yong)（10μl 試(shi)劑二(er)原(yuan)液(ye)+60μl 蒸餾水(shui)）。

4、SOD 為(wei)什麽(me)有(you)的樣(yang)本測(ce)定(ding)管大於(yu)對照管，對照管數值(zhi)在(zai)什麽(me)範(fan)圍？

對照管的範(fan)圍(wei)是(shi) 0.8-2。對照管吸(xi)光值過低可能是(shi)（1）試劑二(er)或試劑四沒(mei)有現配(pei)現用(yong)；（2)沒(mei)有按(an)順序(xu)加試(shi)劑；（3）反(fan)應時(shi)間(jian)不夠(gou)，可(ke)以延(yan)長反(fan)應時(shi)間(jian)（反(fan)應時(shi)間(jian) 30min 可以延(yan)長到 40min）。對照管吸(xi)光值過高(gao)可能是試劑二(er)未(wei)按(an)操作說(shuo)明書稀(xi)釋(shi)相應(ying)倍數。

若(ruo)出(chu)現測(ce)定(ding)管大於(yu)對照管，可能(neng)是(shi)樣(yang)本中雜質的影響(xiang)太(tai)大，為(wei)了(le)降低雜(za)質的影響(xiang)壹(yi)般(ban)將樣(yang)本提取上(shang)清液(ye)用(yong)蒸餾水(shui)或提取液(ye)稀(xi)釋(shi) 10 倍後(hou)再測(ce)，通(tong)常可以使測(ce)定(ding)正常。計算公(gong)式(shi)中乘(cheng)以相應稀(xi)釋(shi)倍數。

SOD 活(huo)性(xing)計算：

1、抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)的計算

抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)＝(A 對照管－A 測(ce)定(ding)管) ÷A 對照管× 100%

盡量(liang)使(shi)樣(yang)本的抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)在(zai) 10-90%範圍(wei)內。如果計算出(chu)來(lai)的抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)小(xiao)於 10%或大於(yu) 90%，則(ze)通(tong)常需要(yao)調(tiao)整加(jia)樣(yang)量後(hou)重(zhong)新(xin)測(ce)定(ding)。如果測(ce)定(ding)出(chu)來(lai)的抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)偏(pian)高(gao)，則(ze)需(xu)將樣(yang)本用(yong)提取液(ye)適(shi)當稀(xi)釋(shi)；如果測(ce)定(ding)出(chu)來(lai)的抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)偏(pian)低，則(ze)需(xu)重(zhong)新(xin)準(zhun)備(bei)濃度(du)比(bi)較(jiao)高(gao)的待(dai)測(ce)樣(yang)本。

2、SOD 酶(mei)活性(xing)單(dan)位(wei)：在(zai)上述(shu)黃(huang)piao呤氧(yang)化酶(mei)藕(ou)聯反(fan)應體(ti)系中(zhong)抑制(zhi)百(bai)分率(lv)為(wei) 50%時(shi)，反(fan)應體(ti)系中(zhong)的 SOD 酶(mei)活力定(ding)義(yi)為(wei)壹個(ge)酶(mei)活力單(dan)位(wei)(U/ml)。

3、SOD 酶(mei)活性(xing)計算：

（1）    血(xue)清（漿(jiang)）SOD 活(huo)性(xing)(U/ml)=[抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv))×V 反(fan)總]÷V 樣(yang)

=11.4×抑制百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv))

（2）    組(zu)織、細(xi)菌(jun)或培養(yang)細(xi)胞(bao)SOD 活力計算：

a.         按(an)樣(yang)本蛋白濃(nong)度(du)計算

SOD 活(huo)性(xing)(U/mg prot)=[抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv))×V 反(fan)總]÷(V 樣(yang)×Cpr)

=11.4×抑制百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv))÷Cpr

需(xu)要另(ling)外測(ce)定(ding)，建議(yi)使用(yong)本(ben)公(gong)司(si)BCA 蛋(dan)白質含量測(ce)定(ding)試劑盒(he)。

b.         按(an)樣(yang)本鮮重(zhong)計算

SOD 活(huo)性(xing)(U/g 鮮重(zhong))=[抑制(zhi)百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv))×V 反(fan)總]÷(W×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)

=11.4×抑制百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv))÷W c.按(an)細(xi)菌(jun)或細(xi)胞(bao)個(ge)數計算

SOD 活(huo)力(U/10⁴ cell)=[抑(yi)制(zhi)百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv)) ×V 反(fan)總]÷(500×V 樣(yang)÷V 樣(yang)總)

=0.0228×抑制百(bai)分率(lv)÷(1－抑(yi)制百(bai)分率(lv))

V 反(fan)總：反(fan)應體(ti)系總(zong)體(ti)積，1.026ml；V 樣(yang)：加入反(fan)應體(ti)系中(zhong)樣(yang)本體(ti)積，0.09ml；V 樣(yang)總：加入提取液(ye)體(ti)積，1 ml；Cpr：樣(yang)本蛋白質濃度(du)，mg/ml ；W：樣(yang)本質量，g；500：細(xi)胞(bao)或細(xi)菌(jun)總(zong)數，500 萬(wan)。

超氧(yang)化物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)試劑盒(he) 抗逆

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BA6001 超氧(yang)化物(wu)歧(qi)化(hua)酶(mei)試劑盒(he) 50管/48樣(yang)