2× Blue Universal SYBR qPCR Master Mix是使(shi)用SYBR Green I 嵌合熒(ying)光法(fa)進(jin)行(xing)qPCR的2×試(shi)劑(ji)，顏(yan)色(se)為藍(lan)色(se)，具有(you)加樣(yang)示(shi)蹤(zong)的作用。主(zhu)要成(cheng)分(fen)包(bao)括化(hua)學(xue)修飾的Hot Start Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg2+、SYBR Green I和針(zhen)對(dui)qPCR優(you)化(hua)的最適(shi)Buffer。
染(ran)料法qPCRMix 熒(ying)光(guang)定量(liang)

諾博(bo)萊(lai)德 染(ran)料法(fa)qPCRMix

染料(liao)法(fa)qPCRMix 熒光定量(liang)

產品(pin)名(ming)稱(cheng)：染(ran)料(liao)法qPCRMix
產品(pin)內(nei)容(rong)：

產品(pin)簡介
       2× Blue Universal SYBR qPCR Master Mix是(shi)使用(yong)SYBR Green I 嵌合熒(ying)光法(fa)進(jin)行(xing)qPCR的2×試(shi)劑(ji)，顏(yan)色(se)為藍(lan)色(se)，具有(you)加樣(yang)示(shi)蹤(zong)的作用。主(zhu)要成(cheng)分(fen)包(bao)括化(hua)學(xue)修飾的Hot Start Fast Taq DNA Polymerase、dNTP、Mg²⁺、SYBR Green I和針(zhen)對(dui)qPCR優(you)化(hua)的最適(shi)Buffer。本產品(pin)可(ke)在(zai)寬廣的定量(liang)區(qu)域(yu)內(nei)獲得(de)良好的標準曲線，實(shi)驗(yan)結果重(zhong)復(fu)性好、可(ke)信(xin)度(du)高(gao)。另(ling)外(wai)，預混(hun)液體(ti)系(xi)中(zhong)添(tian)加了特(te)殊ROX Reference Dye，適用(yong)於(yu)不同qPCR 儀(yi)器，配置(zhi)反(fan)應體(ti)系(xi)時(shi)只(zhi)需(xu)加入引物和(he)模板(ban)即(ji)可(ke)擴增(zeng)。
註意事項
1. 為了(le)您的安全(quan)和健康，請穿實(shi)驗(yan)服(fu)並戴壹(yi)次性手套(tao)操作。
2. 請於(yu)使用(yong)前(qian)確(que)保(bao)產品(pin)wan全(quan)解(jie)凍(dong)，che底(di)混(hun)勻後(hou)短暫離(li)心(xin)，置(zhi)於(yu)冰(bing)上備(bei)用(yong)。
3. 反(fan)復(fu)凍(dong)融會影響(xiang)產品(pin)性能。
4. 本產品(pin)中(zhong)含(han)熒光染料SYBR Green I，使(shi)用中(zhong)應盡(jin)量(liang)避(bi)免(mian)強光照射。
實(shi)驗流(liu)程(cheng)
配制(zhi)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)
1.    按(an)照下表(biao)配置(zhi)PCR反(fan)應體(ti)系(xi)（註(zhu)：配置(zhi)多個(ge)反(fan)應孔(kong)時(shi)，請為各(ge)組(zu)分(fen)預留10%的余量(liang)，以(yi)免(mian)移液損失。）

*通(tong)常(chang)每條引物終(zhong)濃度(du)為(wei)0.2 μM，也可(ke)根(gen)據情況在(zai)0.1~0.4μM 間(jian)進(jin)行(xing)調整(zheng)。
*微(wei)量(liang)體(ti)積(ji)加樣(yang)時(shi)誤差大，建議(yi)模板(ban)稀(xi)釋(shi)後(hou)再(zai)加入反應體(ti)系(xi)中(zhong)，這(zhe)樣(yang)可(ke)以(yi)有(you)效提(ti)高(gao)實(shi)驗(yan)的重復性；如模板(ban)類(lei)型(xing)為(wei)未(wei)稀釋(shi)cDNA原(yuan)液，使用體(ti)積(ji)不應超過(guo)qPCR反(fan)應總(zong)體(ti)積(ji)的 1/10。
2. 反應體(ti)系(xi)配好後(hou)，蓋好反(fan)應蓋，充分渦(wo)旋(xuan)混(hun)勻，離(li)心，避(bi)免產生氣泡(pao)。
反(fan)應程(cheng)序設(she)置(zhi)
標(biao)準(zhun)程(cheng)序

 
快(kuai)速(su)程(cheng)序

*延伸(shen)時(shi)間請根據(ju)您使用(yong)的Real Time qPCR儀數據采(cai)集(ji)最短時間(jian)限(xian)制(zhi)以(yi)及(ji)PCR產物長(chang)度(du)自(zi)行(xing)調整(zheng)。
*模板(ban)拷(kao)貝(bei)數較(jiao)低時采(cai)用標(biao)準程(cheng)序可(ke)提(ti)高(gao)數據的重現性。
結果分(fen)析(xi)
定量(liang)檢(jian)測(ce)至(zhi)少需(xu)要三(san)個(ge)生物學(xue)重(zhong)復，反(fan)應結束(shu)後(hou)需(xu)要確(que)認(ren)擴增(zeng)曲線的線形，熔解(jie)曲線的峰形。
1. 擴增(zeng)曲線：標(biao)準(zhun)擴增(zeng)曲線為(wei)S型(xing)。
Ct值(zhi)小於(yu)10，需(xu)要將模板(ban)稀(xi)釋(shi)後(hou)，重(zhong)新進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)（每(mei)稀(xi)釋(shi)壹(yi)倍，Ct值(zhi)增(zeng)大1）；
Ct值(zhi)30-35之間(jian)時(shi)，需(xu)要提(ti)高(gao)模板(ban)濃度(du)，或者(zhe)增(zeng)大反應體(ti)系(xi)的體(ti)積(ji)，以提(ti)高(gao)擴增(zeng)效率(lv)，保證結果分(fen)析(xi)的準確性；
Ct值(zhi)大於(yu)35時，檢(jian)測(ce)結果不(bu)可(ke)信(xin)。
2. 熔解(jie)曲線：
熔(rong)解(jie)曲線單(dan)峰，表(biao)明(ming)反應特(te)異(yi)性好可(ke)以(yi)進(jin)行(xing)定量(liang)結果分(fen)析(xi)；若熔解(jie)曲線出(chu)現明(ming)顯雙峰或者(zhe)多峰，則不能進(jin)行(xing)定量(liang)分(fen)析(xi)，需(xu)要重(zhong)新設計(ji)引物。
常(chang)見(jian)問題與解(jie)決方(fang)案(an)
►擴增(zeng)曲線形狀異(yi)常(chang)
①擴增(zeng)曲線不(bu)光(guang)滑(hua)：使用(yong)的八(ba)聯排(pai)管或PCR板(ban)可(ke)能(neng)與設備(bei)不(bu)匹配，設(she)備(bei)光(guang)源(yuan)可(ke)能(neng)松動。
②擴增(zeng)曲線突(tu)然(ran)驟降(jiang)：反應管內(nei)留有(you)氣泡(pao)，樣(yang)本離心後(hou)仔細檢(jian)查反應管內(nei)是否(fou)有(you)氣泡(pao)殘(can)留(liu)。
►反應結束(shu)無擴增(zeng)曲線出(chu)現
①循環(huan)數不夠(gou)：壹(yi)般(ban)設(she)置(zhi)為(wei)40個(ge)循環(huan)。
②確認(ren)程(cheng)序中(zhong)是(shi)否(fou)設置(zhi)了(le)信(xin)號采(cai)集(ji)步驟。
③確認(ren)引物、模板(ban)是(shi)否(fou)降(jiang)解(jie)。
►陰(yin)性對(dui)照出現擴增(zeng)
①反應體(ti)系(xi)汙(wu)染：更換(huan)新的Mix、水(shui)、引物重(zhong)復(fu)實驗(yan)。在(zai)超凈工(gong)作(zuo)臺進(jin)行(xing)反(fan)應體(ti)系(xi)配置(zhi)，減少(shao)氣溶(rong)膠汙(wu)染。
②產生引物二聚(ju)體(ti)，配合(he)溶(rong)解(jie)曲線進(jin)行(xing)分(fen)析(xi)。
③使(shi)用(yong)含(han)UDG/dUTP 防汙(wu)染體(ti)系(xi)的擴增(zeng)試(shi)劑(ji)。
►實(shi)驗重復(fu)性差
①加樣(yang)體(ti)積(ji)失準：建議(yi)使用(yong)大體(ti)積(ji)加樣(yang)以(yi)減少(shao)誤差。
②模板(ban)濃度(du)太低：模板(ban)濃度(du)越(yue)低，重復性越差，減少(shao)模板(ban)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數或增(zeng)加模板(ban)體(ti)積(ji)。
③反應體(ti)系(xi)未(wei)充(chong)分(fen)混(hun)勻：上機(ji)檢(jian)測(ce)前(qian)將反應體(ti)系(xi)充(chong)分(fen)混(hun)勻後(hou)再(zai)離(li)心。

染料(liao)法qPCRMix 熒光定量(liang)