H2O2 是(shi)生物體內(nei)最(zui)chang見(jian)的(de)活(huo)性(xing)氧分(fen)子，主要(yao)由(you)SOD 和XOD 等催化產(chan)生，由(you) CAT 和POD 等催化降解(jie)。H2O2 不(bu)僅(jin)是(shi)重要(yao)的(de)活性(xing)氧之(zhi)壹(yi)，也是(shi)活性(xing)氧相互轉化(hua)的樞(shu)紐。壹(yi)方面，H2O2 可以直(zhi)接或間接地氧化(hua)細(xi)胞內(nei)核(he)酸，蛋(dan)白(bai)質等生物大分子，並(bing)使(shi)細(xi)胞膜(mo)遭(zao)受(shou)損(sun)害(hai)，從而加(jia)速細(xi)胞的(de)衰(shuai)老和解(jie)體；另(ling)壹(yi)方面H2O2也是(shi)許(xu)多氧化(hua)應急(ji)反應(ying)中的(de)關(guan)鍵調(tiao)節(jie)因子(zi)。
過(guo)氧化(hua)氫含量H2O2試劑(ji)盒(he)

過(guo)氧化(hua)氫含量（H₂O₂）試(shi)劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)

分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa) 50 管(guan)/48 樣

過(guo)氧化(hua)氫含量H2O2試劑(ji)盒(he)

正(zheng)式(shi)測定前務(wu)必取(qu) 2-3 個(ge)預(yu)期差異(yi)較大(da)的樣本做(zuo)預(yu)測定測定意(yi)義：

H2O2 是(shi)生物體內(nei)最(zui)常見(jian)的(de)活(huo)性(xing)氧分(fen)子，主要(yao)由(you)SOD 和XOD 等催化產(chan)生，由(you) CAT 和POD 等催化降解(jie)。H2O2 不(bu)僅(jin)是(shi)重要(yao)的(de)活性(xing)氧之(zhi)壹(yi)，也是(shi)活性(xing)氧相互轉化(hua)的樞(shu)紐。壹(yi)方面，H2O2 可以直(zhi)接或間接地氧化(hua)細(xi)胞內(nei)核(he)酸，蛋(dan)白(bai)質等生物大分子，並(bing)使(shi)細(xi)胞膜(mo)遭(zao)受(shou)損(sun)害(hai)，從而加(jia)速細(xi)胞的(de)衰(shuai)老和解(jie)體；另(ling)壹(yi)方面H2O2也是(shi)許(xu)多氧化(hua)應急(ji)反應(ying)中的(de)關(guan)鍵調(tiao)節(jie)因子(zi)。

測定原(yuan)理：

H2O2 與(yu)硫(liu)酸鈦(tai)生成(cheng)黃色(se)的(de)過(guo)氧化(hua)鈦(tai)復合物，在(zai) 415nm 有(you)特(te)征(zheng)吸(xi)收(shou)。

試(shi)劑(ji)的(de)組(zu)成(cheng)和配(pei)制(zhi)：

試(shi)劑(ji)二(er)：粉(fen)劑(ji)×1 瓶(ping)，4℃保存；臨(lin)用(yong)前加(jia)入 10ml 濃(nong)鹽酸充分(fen)溶(rong)解備用(yong)。用(yong)不完的試(shi)劑 4℃保存；(溶(rong)解時(shi)間(jian)較長(chang)，約(yue) 30min，可 40℃-60℃加(jia)熱溶解，務(wu)必提前準(zhun)備)

自(zi)備儀(yi)器和用(yong)品：

可見(jian)分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)、臺(tai)式(shi)離心(xin)機(ji)、可調(tiao)式(shi)移(yi)液(ye)器、1 ml 玻(bo)璃比(bi)色(se)皿(min)、bing酮 60ml、濃(nong)鹽酸 10ml、研缽和冰(bing)。

H2O2 提取(qu)：

1、細(xi)菌或細(xi)胞樣品的制(zhi)備：收(shou)集(ji)細(xi)菌或細(xi)胞到(dao)離(li)心管(guan)內(nei)，離(li)心後棄(qi)上(shang)清(qing)；按(an)照(zhao)細(xi)菌或細(xi)胞數(shu)量（104個(ge)）：試劑壹(yi)體(ti)積（ml）為 500~1000：1 的(de)比(bi)例（建(jian)議(yi) 500 萬(wan)細(xi)菌或細(xi)胞加(jia)入 1ml 試(shi)劑壹(yi)），超(chao)聲波破(po)碎(sui)細(xi)菌或細(xi)胞（冰(bing)浴(yu)，功率(lv) 20％或 200W，超(chao)聲 3s，間隔(ge) 10s，重復 30 次）；用(yong)試劑(ji)壹(yi)定容至(zhi) 1ml；8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置冰(bing)上(shang)待(dai)測。

2、 組(zu)織樣品的制(zhi)備：按(an)照(zhao)組(zu)織質量(liang)（g）：試(shi)劑(ji)壹(yi)體(ti)積(ml)為 1：5~10 的(de)比(bi)例（建(jian)議(yi)稱取(qu)約(yue) 0.1g 組(zu)織，加(jia)入 1ml 試(shi)劑壹(yi)）進行(xing)冰(bing)浴(yu)勻漿；轉移(yi)至(zhi)EP 管(guan)中(zhong)，用(yong)試劑(ji)壹(yi)定容至(zhi) 1ml，8000g 4℃離(li)心 10min，取(qu)上(shang)清(qing)，置冰(bing)上(shang)待(dai)測。

3、血(xue)清(qing)（漿）樣品：直(zhi)接檢(jian)測。

測定步(bu)驟：

1、分(fen)光(guang)光(guang)度計(ji)預(yu)熱 30min 以上(shang)，調(tiao)節(jie)波長(chang)至(zhi) 415nm，蒸(zheng)餾水調(tiao)零。

2、將試劑(ji)二(er)、三(san)和四(si) 37℃（哺(bu)乳動(dong)物）或 25℃（其它(ta)物種(zhong)）水浴 10min 以上(shang)。

3、在(zai)EP 管(guan)中(zhong)按(an)順(shun)序(xu)加(jia)入下(xia)列(lie)試劑(ji)

4000g，25℃離(li)心(xin) 10min，棄(qi)上(shang)清(qing)，留沈澱

加(jia)入試(shi)劑四(si)溶解(jie)沈澱後，室(shi)溫靜(jing)置(zhi) 5min，倒入比(bi)色(se)皿(min)中(zhong)，測定 415nm 處(chu)吸(xi)光(guang)值(zhi)A。對(dui)照(zhao)管(guan)只(zhi)要(yao)做(zuo)壹(yi)次即可。計(ji)算(suan)ΔA＝A 測定-A 對(dui)照(zhao)。

註(zhu)意(yi)事項:

1、由(you)於試劑(ji)壹(yi)易(yi)揮發(fa)，試(shi)劑(ji)壹(yi)必(bi)須(xu)先(xian)預冷(leng)再加(jia)，研磨(mo)時(shi)必須(xu)在(zai)冰(bing)上(shang)研(yan)磨。

2、本試(shi)劑盒(he)中試劑的揮發(fa)性(xing)較(jiao)高，請(qing)帶壹(yi)次性(xing)手(shou)套和口(kou)罩(zhao)。

H2O2 含量計(ji)算(suan)：

1、標(biao)準(zhun)條件(jian)下測定的(de)回(hui)歸曲線(xian)，y = 0.7488x + 0.0006 (x 為(wei)標(biao)準(zhun)品濃(nong)度，μmol/ml；y 為(wei)ΔA)。

2、血(xue)清(qing)（漿）中(zhong)H2O2 含量的計(ji)算(suan)：

H2O2 含量（μmol/ml）＝(ΔA-0.0006) ÷0.7488=1.34×(ΔA-0.0006)

3、細(xi)菌、細(xi)胞或組(zu)織中H2O2 含量計(ji)算(suan)

按(an)照(zhao)蛋(dan)白(bai)濃(nong)度計(ji)算(suan)

H2O2 含量(μmol/mg prot)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(V1×Cpr)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷Cpr

需(xu)要(yao)另(ling)外(wai)測定，建(jian)議(yi)使(shi)用(yong)本公司BCA 蛋(dan)白(bai)質含量測定試(shi)劑(ji)盒(he)。

按(an)照(zhao)樣本質(zhi)量計(ji)算(suan)

H2O2 含量(μmol/g 鮮重)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(W ×V1÷V2)= 1.34×(ΔA-0.0006)÷W

(3 ) 按(an)照(zhao)細(xi)菌或細(xi)胞密(mi)度計(ji)算(suan)：

H2O2 含量(μmol/10⁴)= [ (ΔA-0.0006) ÷0.7488×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0027×(ΔA-0.0006)

V1：加(jia)入反(fan)應體(ti)系中(zhong)樣本體(ti)積，1ml；V2：加(jia)入提取(qu)液(ye)體(ti)積，1ml；Cpr：樣本蛋(dan)白(bai)質濃(nong)度，mg/ml； W：樣本質(zhi)量，g；500：細(xi)胞或細(xi)菌總數(shu)，500 萬(wan)。

註(zhu)意(yi)：標(biao)曲(qu)線(xian)性(xing)範圍(wei)為 0.1μmol/ml 到(dao) 2μmol/ml，吸(xi)光(guang)度ΔA 線(xian)性(xing)範圍(wei)為 0.07-1.5，若(ruo)ΔA 超(chao)過(guo) 1.5 則(ze)需(xu)要(yao)稀(xi)釋(shi)，計(ji)算(suan)公式(shi)乘(cheng)以相應(ying)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)。

過(guo)氧化(hua)氫含量H2O2試劑(ji)盒(he)