適(shi)用(yong)於快速(su)提取新(xin)鮮血液的總(zong)RNA，RNA可(ke)直接(jie)用(yong)於RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通(tong)轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、RACE等。
超純全(quan)血總(zong)RNA快速(su)提取試劑盒

諾(nuo)博(bo)萊(lai)德 超純全(quan)血總(zong)RNA快速(su)提取試劑盒 

FlashPure Blood Total RNA Mini Kit超純全(quan)血總(zong) RNA 提取試劑盒（離心柱型）

目錄(lu)號：91215

產品(pin)內(nei)容(rong)

自備試劑

無水(shui)乙醇、β-巰(qiu)基(ji)乙醇

保存條件

室溫(wen)（15 ~ 25℃）下，存放 12 個月，不影(ying)響(xiang)使(shi)用(yong)效(xiao)果(guo)。

具(ju)體產品(pin)的參數(shu)以(yi)收到(dao)產品(pin)說(shuo)明書的參數(shu)為(wei)準(zhun)

產品(pin)簡介(jie)

適(shi)用(yong)於快速(su)提取新(xin)鮮血液的總(zong)RNA，RNA可(ke)直接(jie)用(yong)於RT，RT-PCR，RT-qPCR，普(pu)通(tong)轉(zhuan)錄(lu)組(zu)測(ce)序(xu)、RACE等。

產品(pin)特點

1. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全過(guo)程(cheng)僅(jin)需(xu) 20 min！

操(cao)作(zuo)步(bu)驟(zhou)

提示(shi)：

①所有(you)離心步(bu)驟(zhou)均(jun)需要(yao)在(zai)室溫(wen)（15 ~37℃）下進(jin)行(xing)。

②第(di)壹(yi)次使用前，請先(xian)在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加(jia)入指ding量(liang)無水(shui)乙醇。

③操(cao)作(zuo)前，先(xian)用 RNase-Free H2O 將 10X 紅(hong)細(xi)胞裂解(jie)液 RLB 稀釋(shi)到 1X。

1. 在適(shi)合(he)大小(xiao)的 RNase free 離心管中加(jia)入 1 體積（0.5-1 ml）各(ge)種抗(kang)凝劑新(xin)鮮血液 (先(xian)顛倒混(hun)勻後)和 3 體積的紅(hong)細(xi)胞裂解(jie)液 RLB，顛倒混(hun)勻，可(ke)輕彈(dan)管壁(bi)，確(que)保混(hun)勻。

2. 室溫(wen)放置(zhi) 10 分鐘(zhong)（期(qi)間(jian)應該顛(dian)倒輕(qing)彈混勻數(shu)次(ci)幫(bang)助(zhu)裂解(jie)紅(hong)細(xi)胞）。

註意(yi)：如(ru)果(guo) RNA 降(jiang)解(jie)嚴(yan)重(zhong)，可(ke)在冰(bing)上裂解(jie)，時間可(ke)以(yi)長壹(yi)些以(yi)充分裂解(jie)。

3. 12,000 rpm 離心 20 秒，倒棄(qi)紅(hong)色(se)上清(qing)，並(bing)小(xiao)心的盡(jin)可(ke)能(neng)多的吸(xi)棄(qi)上清(qing)

（註意(yi)不要(yao)吸(xi)到(dao)管底的細(xi)胞團），留下(xia)完(wan)整(zheng)的管底白細(xi)胞團。

註意(yi)：離心後在管底應該見(jian)到(dao)白色(se)的白細(xi)胞團，也可(ke)能(neng)有壹(yi)些紅(hong)細(xi)胞殘片(pian)和白細(xi)胞團在壹起(qi)，但是如(ru)果(guo)看到的是大部(bu)分(fen)的紅(hong)色(se)細(xi)胞團，說(shuo)明紅(hong)細(xi)胞裂解(jie)很(hen)不(bu)充分，應該再(zai)加(jia)入紅(hong)細(xi)胞裂解(jie)液，重(zhong)懸後(hou)重(zhong)復步(bu)驟(zhou) 2，3。

註意(yi)：上清(qing)盡(jin)可(ke)能(neng)徹di吸(xi)棄(qi)，殘留過(guo)多會稀釋(shi)裂解(jie)液，造(zao)成裂解(jie)異(yi)常，產(chan)量純度降(jiang)低(di)。

4. 渦旋或(huo)者輕(qing)彈(dan)管壁(bi)將(jiang)白細(xi)胞沈澱wan全松(song)散重(zhong)懸，加(jia)入 1 ml 裂解(jie)液 RL，用移液槍反復吹打(da)，充分裂解(jie)細(xi)胞。

5. 將勻漿樣品劇(ju)烈震蕩(dang)混(hun)勻，在室溫（15 -30℃）條(tiao)件下孵(fu)育 5 min，使(shi)得(de)核(he)酸(suan)蛋白復合(he)物(wu)完(wan)quan分(fen)離。

6. 每1 ml裂解(jie)液 RL 加(jia) 0.2 ml 氯(lv)仿(fang)，蓋(gai)緊(jin)樣(yang)品管蓋(gai)，劇(ju)烈振(zhen)蕩(dang) 15 sec，並(bing)在(zai)室溫下放置(zhi)2min。

7. 12，000rpm 離心 10 min，樣品會(hui)分(fen)成(cheng)三層(ceng)：下(xia)層有(you)機相(xiang)，中間(jian)層(ceng)和上層(ceng)無色(se)的水相(xiang)，RNA 存在於水相(xiang)中。水(shui)相(xiang)層(ceng)的容量(liang)大約(yue)為所(suo)加(jia) RL 體積的 60%，把水(shui)相(xiang)轉(zhuan)移到(dao)新(xin)管中，進(jin)行(xing)下壹(yi)步(bu)操(cao)作(zuo)。

8. 向(xiang)水相(xiang)中加(jia)入等體積 70%乙醇，吹(chui)打(da)混(hun)勻。

9. 每次(ci)轉移(yi)≤700 μl 水(shui)相(xiang)混(hun)合(he)物(wu)至壹(yi)個 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)中（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放入收(shou)集(ji)管中），13,000 rpm 離心1 min，RNA 被吸(xi)附(fu)在(zai)膜上，棄(qi)濾液。重(zhong)復此過(guo)程(cheng)，直到(dao)溶(rong)液全部上柱(zhu)。

10. 加(jia)500μl去蛋白液 RE，室溫放置(zhi) 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，棄(qi)濾液。

11. 加(jia)入500μl漂(piao)洗液RW，13,000 rpm 離心 30 sec，棄(qi)濾液。

12. 重(zhong)復步(bu)驟(zhou) 11。

13. 將 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)放回收(shou)集(ji)管中，13,000 rpm 離心 2 min，徹di除(chu)去(qu)膜上殘留的乙醇。

14. 取出 RNA 吸(xi)附(fu)柱(zhu)，放入壹(yi)個新(xin)的 1.5 ml RNase - free 離心管中，向(xiang)吸(xi)附(fu)膜(mo)的中央(yang)部(bu)位懸(xuan)空(kong)滴(di)加(jia)30-50μl RNase free H2O（事先(xian)在70-90℃水浴中加(jia)熱可(ke)提高產量），室溫(wen)放置(zhi)1min，13,000 rpm 離心1 min，管底即是RNA溶(rong)液。

15. 提取的RNA可(ke)直接(jie)用(yong)於下遊實(shi)驗，或(huo)於-70℃保存，避(bi)免(mian) RNA 降(jiang)解(jie)。

相(xiang)關(guan)產(chan)品：

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適(shi)用(yong)於所有(you)qPCR儀)

 超純全(quan)血總(zong)RNA快速(su)提取試劑盒