Total RNA Extraction Reagent (Trizol) 是(shi)壹(yi)種(zhong)包含酚(fen)/異硫(liu)氰suan胍等(deng)物(wu)質的(de)總RNA提qu試(shi)劑，該試(shi)劑可迅速裂(lie)解組(zu)織和細胞(bao)樣本(ben)釋放(fang)出核(he)酸(suan)，有效(xiao)抑(yi)制核(he)酸(suan)酶活(huo)性從而保證RNA的(de)完(wan)整(zheng)性(xing)。
總(zong)RNA提取(qu)試(shi)劑盒(he) 核(he)酸(suan)提取(qu)

總RNA提取(qu)試(shi)劑盒(he)

總RNA提取(qu)試(shi)劑盒(he) 核(he)酸(suan)提取(qu)

產品(pin)貨(huo)號：NAET01

產品(pin)名(ming)稱：總(zong)RNA提取(qu)試(shi)劑盒(he)

產品(pin)規(gui)格(ge)：100ml

產品(pin)簡(jian)介(jie)：

Total RNA Extraction Reagent (Trizol) 是壹(yi)種(zhong)包含酚(fen)/異硫(liu)氰suan胍等(deng)物(wu)質的(de)總RNA提qu試(shi)劑，該試(shi)劑可迅速裂(lie)解組(zu)織和細胞(bao)樣本(ben)釋放(fang)出核(he)酸(suan)，有效(xiao)抑(yi)制核(he)酸(suan)酶活(huo)性從而保證RNA的(de)完(wan)整(zheng)性(xing)。本(ben)產(chan)品(pin)適(shi)用於從(cong)人、動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)、真(zhen)菌、細菌等(deng)各種(zhong)組織(zhi)或(huo)細(xi)胞(bao)中快(kuai)速分(fen)離總(zong)RNA，在保證(zheng)RNA純(chun)度(du)高(gao)、完(wan)整(zheng)性(xing)好(hao)的(de)同(tong)時最(zui)da限(xian)度(du)的去(qu)除了蛋(dan)白質和基因(yin)組DNA等(deng)雜質，提取(qu)流(liu)程可在1 h內完(wan)成(cheng)，產(chan)物(wu)可(ke)直接用於RT-PCR、NorthernBlot、體外(wai)翻(fan)譯(yi)等(deng)實驗(yan)。

產品(pin)特(te)點(dian)

適(shi)用範圍廣(guang)；

操作簡(jian)單快(kuai)速，整(zheng)個過(guo)程可在1 h內完(wan)成(cheng)；

純(chun)度(du)高(gao)、汙(wu)染(ran)少(shao)。

註意(yi)事項

Total RNA Extraction Reagent (Trizol) 是強腐蝕(shi)性物(wu)質，操(cao)作過程中應(ying)穿(chuan)上(shang)實(shi)驗(yan)服，戴好(hao)乳膠(jiao)手套(tao)，避(bi)免沾染(ran)皮(pi)膚、眼睛和衣服(fu)，防止吸入(ru)口(kou)鼻。沾染(ran)皮(pi)膚或眼睛後，請(qing)立即(ji)用清水或生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗(xi)，必(bi)要時尋(xun)求(qiu)醫(yi)生(sheng)的幫助(zhu)。

使(shi)用方法

試(shi)劑準備(bei)

1. 自(zi)備(bei)試(shi)劑：無水乙醇(chun)、氯(lv)仿、異丙(bing)醇(chun)等(deng)。

2. 去酶處(chu)理(li)：RNase是導(dao)致(zhi)RNA降(jiang)解最(zui)主要的物(wu)質，必(bi)須使(shi)用RNase-free的實(shi)驗(yan)器具，包(bao)括槍(qiang)頭(tou)和離心(xin)管，並(bing)且(qie)RNA實驗(yan)用的器(qi)具需(xu)專門使(shi)用，避(bi)免交(jiao)叉汙染(ran)。

3. 樣品(pin)保(bao)存：勻(yun)漿(jiang)後，加氯(lv)仿前(qian)，樣品(pin)可(ke)在-80°C放置壹(yi)個(ge)月以(yi)上(shang)；提取(qu)的(de)RNA樣品(pin)可(ke)以(yi)在70% 酒精中-20°C保(bao)存2個(ge)星期以(yi)上(shang)；如(ru)需(xu)長(chang)期保存，請(qing)置超低溫(wen)冰箱(xiang)中(zhong)保(bao)存。

樣本(ben)準備(bei)

1. 動(dong)物(wu)/植(zhi)物(wu)組(zu)織

取新鮮(xian)組織(zhi)樣品(pin)在液氮中(zhong)速(su)凍(dong)後轉(zhuan)移(yi)至(zhi)研缽中(zhong)迅速充分(fen)研磨(mo)，期間可補充液氮並(bing)研磨(mo)直(zhi)至(zhi)樣本(ben)呈(cheng)粉(fen)末(mo)狀，隨(sui)後以(yi)50~100 mg樣本(ben)使(shi)用1 mL Total RNA Extraction Reagent比例(li)勻(yun)漿(jiang)處理(li)

*樣品(pin)體積壹(yi)般(ban)不要超過(guo)Total RNA Extraction Reagent體積的(de)10%。

2. 貼壁細胞(bao)

2.1 直接裂(lie)解法：倒出培(pei)養(yang)液(ye)，用1×PBS清洗1次(ci)後在培(pei)養(yang)板(ban)中(zhong)加入(ru)Total RNA Extraction Reagent直(zhi)接裂(lie)解細(xi)胞(bao)，或直(zhi)接在培(pei)養(yang)板(ban)中(zhong)加入(ru)Total RNA Extraction Reagent裂(lie)解細(xi)胞(bao)，每(mei)10 cm2培(pei)養(yang)面(mian)積生(sheng)長(chang)的(de)細胞(bao)加1 mL Total RNA Extraction Reagent。用移(yi)液器(qi)反復(fu)吹打(da)混勻(yun)直(zhi)至(zhi)無明顯(xian)沈澱。

*培(pei)養(yang)面(mian)積不超過(guo)10 cm2，細(xi)胞(bao)不超過(guo)1×107。

2.2 胰蛋白bai酶處理(li)法：收集細胞(bao)並大(da)致(zhi)確(que)定細(xi)胞(bao)數(shu)量(liang)，用PBS洗滌後，向(xiang)細(xi)胞(bao)中加入(ru)含有0.1-0.25% 胰蛋bai酶(mei)的(de)PBS處理(li)細胞(bao)，當細(xi)胞(bao)脫離容器(qi)壁後，加入(ru)含有血清的培(pei)養(yang)基(ji)失(shi)活胰蛋bai酶(mei)，將(jiang)細胞(bao)溶液(ye)轉(zhuan)移(yi)至(zhi)無RNase的離心(xin)管中(zhong)，8,000 rpm離心(xin)5 min，收集細胞(bao)沈澱並(bing)去除(chu)上(shang)清。每(mei)10 cm2面積加1 mL Total RNA Extraction Reagent。用移(yi)液器(qi)吹打混勻(yun)。

3. 細胞(bao)懸液(ye)

離心(xin)收集細胞(bao)。每(mei)5×106-107動(dong)物(wu)、植(zhi)物(wu)和酵母(mu)細胞(bao)或每(mei)107細菌(jun)細(xi)胞(bao)加入(ru)1 mL Total RNA Extraction Reagent。

*加入(ru)Total RNA Extraction Reagent前(qian)不要洗滌細胞(bao)，以(yi)免降(jiang)解mRNA。

*對於難以(yi)裂(lie)解的(de)酵母和革蘭(lan)氏陽性(xing)菌(jun)需(xu)要液氮研磨(mo)或(huo)勻(yun)漿(jiang)器勻(yun)漿(jiang)。

4. 血液

取0.5 mL新鮮(xian)或凍(dong)溶(rong)的血液，12,000 rpm離心(xin)5 min，去除(chu)血漿後加入(ru)1 mL Total RNA Extraction Reagent，充(chong)分振蕩(dang)混勻(yun)。

RNA抽提步(bu)驟(zhou)

1. 將(jiang)上(shang)述(shu)裂(lie)解液(ye)或勻(yun)漿(jiang)液室溫靜(jing)置5-10 min使(shi)蛋(dan)白和核酸(suan)充分(fen)分離；

2. 向(xiang)上(shang)述(shu)裂(lie)解液(ye)或勻(yun)漿(jiang)液中加入(ru)1/5 Total RNA Extraction Reagent體積的(de)氯(lv)仿，蓋好管(guan)蓋，劇(ju)烈(lie)振(zhen)蕩(dang)15 s，溶液(ye)呈(cheng)乳濁狀，室(shi)溫(wen)靜置5 min；

* 徹di混(hun)合(he)有利於後續(xu)的相分離。

3. 12,000 rpm 4℃離心(xin)10~15 min。此時樣品(pin)分(fen)為3層，即(ji)上(shang)層無色(se)的(de)水相（含RNA）、中間層和下層有機相。

4. 小(xiao)心(xin)吸取(qu)上(shang)層水相轉(zhuan)移(yi)至(zhi)新的離心(xin)管中(zhong)，加入(ru)等(deng)體積的(de)異丙(bing)醇(chun)上(shang)下(xia)顛倒充(chong)分混勻(yun)，室(shi)溫放置10~20 min；

* 水相體積約占(zhan)Total RNA Extraction Reagent體積的(de)60%，建(jian)議(yi)吸(xi)取400 μL左右(you)，避(bi)免吸(xi)取(qu)到(dao)中間層導(dao)致(zhi)基因(yin)組(zu)DNA的(de)汙染(ran)。

5. 12,000 rpm 4℃離心(xin)10 min，去上(shang)清，此時管底(di)會出現(xian)白色(se)膠(jiao)狀沈澱；

6.使(shi)用1 mL 75% 乙醇(chun) (用RNase-free水配制(zhi)) 洗滌沈澱。12,000 rpm 4℃離心(xin)5min，棄去(qu)上(shang)清；

7. 重(zhong)復(fu)步驟(zhou)6；

8. 室溫晾(liang)幹5~10 min。加入(ru)30~50 μL的(de)RNase-free水溶解(jie)沈澱，必(bi)要時可用移(yi)液器(qi)輕(qing)輕(qing)吹打(da)或在55~60℃孵育5~10 min。待沈澱完(wan)quan溶(rong)解(jie)後將(jiang)所得到的(de)RNA溶液置於-80°C保存或(huo)用於後續(xu)試(shi)驗(yan)。

RNA的分析(xi)和定量(liang)

1. 測定樣品(pin)在260 nm和280 nm的吸(xi)收值確(que)定RNA純(chun)度(du)，按(an)1 OD=40 µg RNA計(ji)算RNA的產率(lv)。

* OD260/280 在1.8-2.0視為抽提RNA的(de)純(chun)度(du)很(hen)高(gao)。

2. 進(jin)行(xing)甲(jia)醛變性瓊(qiong)脂(zhi)糖(tang)電泳(yong)，確(que)定RNA的(de)完(wan)整(zheng)性(xing)和汙染(ran)情況。

常見問題(ti)分(fen)析

1. 提取(qu)的(de)RNA量(liang)較少(shao)

1) 取樣量(liang)少(shao)。

2) 樣品(pin)裂(lie)解或(huo)勻(yun)漿(jiang)處理(li)不徹di，RNA沒有被(bei)完(wan)quan釋放(fang)。

3) 得到的(de)RNA沈澱未(wei)完(wan)quan溶(rong)解(jie)。

2. RNA樣品(pin)的(de)260/ 280比值(zhi)小(xiao)於(yu)1.6

1) 樣本(ben)勻(yun)漿(jiang)或裂(lie)解時Total RNA Extraction Reagent較少(shao)或(huo)加入(ru)試(shi)劑後未(wei)室(shi)溫放(fang)置5 min導(dao)致(zhi)RNA與(yu)蛋白質、DNA未(wei)充分分(fen)離。

2) 水相中混有有機相，從而有蛋白質和DNA汙染(ran)。

3) RNA未用水溶解(jie)，在TE這(zhe)種(zhong)低離子濃度(du)和低pH條(tiao)件下，A280值(zhi)會(hui)偏(pian)高(gao)。

4) 抽提得(de)到(dao)的RNA沈澱未(wei)完(wan)quan溶(rong)解(jie)。

3. 提取(qu)RNA樣品(pin)發生(sheng)部分或(huo)完(wan)quan降(jiang)解

1) 所用組織(zhi)或細(xi)胞(bao)保存不當，樣品(pin)沒有及(ji)時用液氮凍(dong)存，導(dao)致(zhi)組織(zhi)或(huo)細(xi)胞(bao)中的(de)RNA降(jiang)解。

2) 細胞(bao)在胰蛋bai酶(mei)時消化過長(chang)，導(dao)致(zhi)加Total RNA Extraction Reagent前(qian)RNA已經(jing)部分降(jiang)解。

3) 溶液或(huo)離心(xin)管等(deng)耗材(cai)未經(jing)RNase處理(li)，RNase的汙(wu)染(ran)導(dao)致(zhi)RNA被(bei)降(jiang)解。

4. RNA樣品(pin)中(zhong)存在DNA汙染(ran)

1) 樣品(pin)勻(yun)漿(jiang)時加的(de)試(shi)劑體積太少(shao)。

2) 樣品(pin)中(zhong)含組織(zhi)溶(rong)劑（如(ru)乙(yi)醇(chun)等(deng)）或堿(jian)性(xing)溶液(ye)，致(zhi)水相減(jian)少(shao)或(huo)pH升(sheng)高(gao)。

總RNA提取(qu)試(shi)劑盒(he) 核(he)酸(suan)提取(qu)