FastBeat 土壤 DNA 試劑(ji)盒可(ke)在(zai)不(bu)到(dao) 40 分鐘的時(shi)間內直(zhi)接(jie)從(cong)土(tu)壤(rang)樣(yang)品(pin)中快速高效地(di)分離(li) PCR 即(ji)用型基因組 DNA。設計用於(yu)磁珠(zhu)打(da)漿設備，例(li)如(ru) MP Biomedicals 的 FastPrep® 儀(yi)器，可(ke)在(zai) 40 秒內輕(qing)松(song)裂(lie)解土(tu)壤(rang)生物種(zhong)群。
超(chao)純超(chao)快土(tu)壤(rang)基因組DNA快速提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)he

諾(nuo)博(bo)萊(lai)德(de) 超(chao)純超(chao)快土(tu)壤(rang)基因組DNA快速提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)he 

FastBeat Soil DNA Kit (Bead Beating) FastBeat土(tu)壤(rang) DNA提(ti)qi試(shi)劑(ji)he（珠(zhu)磨(mo)法）

目(mu)錄(lu)號：40415

v Kit Contents and Storage

v 所有試劑(ji)在指(zhi)ding溫度(du)下(xia)儲(chu)存時(shi)，可(ke)穩(wen)定保(bao)存(cun) 9 個(ge)月。

具體(ti)產品的(de)參(can)數以(yi)收到(dao)產品說(shuo)明書的(de)參(can)數為準

描(miao)述

FastBeat 土(tu)壤(rang) DNA 試劑(ji)盒可(ke)在(zai)不(bu)到(dao) 40 分鐘的時(shi)間內直(zhi)接(jie)從(cong)土(tu)壤(rang)樣(yang)品(pin)中快速高效地(di)分離(li) PCR 即(ji)用型基因組 DNA。設計用於(yu)磁珠(zhu)打(da)漿設備，例(li)如(ru) MP Biomedicals 的 FastPrep® 儀(yi)器，可(ke)在(zai) 40 秒內輕(qing)松(song)裂(lie)解土(tu)壤(rang)生物種(zhong)群。將(jiang)樣(yang)品(pin)放入含(han)有 3 種(zhong)珠(zhu)子(zi)的(de) 2.0 ml 管(guan)中，珠(zhu)子(zi)是陶瓷和(he)二(er)氧化矽顆粒(li)的(de)混(hun)合(he)物，旨(zhi)在(zai)有效裂(lie)解所有土壤生物，包(bao)括歷史shang難以(yi)溶解(jie)的(de)來源(yuan)，如(ru)真(zhen)細菌孢(bao)子(zi)和內生孢子(zi)、革蘭氏陽(yang)性菌(jun)、酵母(mu)、藻類(lei)、線蟲和(he)真(zhen)菌(jun)。

v 該(gai)套件(jian)使用壹(yi)種(zhong)新(xin)穎(ying)的(de)專有方法來去(qu)除高腐植(zhi)酸含(han)量，包(bao)括堆(dui)肥、沈積物和(he)糞(fen)便(bian)等難處(chu)理(li)的(de)土壤類(lei)型。分離(li)的 DNA 純度(du)高，可(ke)以(yi)更成功(gong)地(di)從(cong)樣(yang)品(pin)中對生物體(ti)進(jin)行(xing) PCR 擴增。已(yi)經進(jin)行(xing)了(le) PCR 分析(xi)以(yi)檢測(ce)多(duo)種(zhong)生物體(ti)，包(bao)括細菌（例(li)如(ru)枯草芽(ya)孢桿菌、炭(tan)疽桿菌）、真(zhen)菌(jun)（例如酵(jiao)母(mu)、黴(mei)菌）、藻類(lei)和放線(xian)菌(jun)（例(li)如鏈(lian)黴(mei)菌）。

使用前的重要註意(yi)事(shi)項(xiang)

向樣(yang)品(pin)中加入(ru)磷(lin)酸鈉和(he) MT 緩沖(chong)液後(hou)，微(wei)珠(zhu)管(guan)中的填(tian)充(chong)體積應在樣(yang)品(pin)管中留出足(zu)夠(gou)的空氣(qi)空間，以(yi)便進(jin)行(xing)高效的 FastPrep® 儀(yi)器處理(li)。MP Biomedicals 建議使用 500 mg 起始材料(liao)，只(zhi)要試管中有 250 - 500 μl 的空隙(xi)。微(wei)珠(zhu)管(guan)過(guo)量填(tian)充(chong)可(ke)能(neng)導(dao)致樣(yang)品(pin)損失(shi)或(huo)試管(guan)故障。珠(zhu)管(guan)蓋(gai)必須牢固(gu)，但(dan)不(bu)能(neng)擰得過緊(jin)，以(yi)防止(zhi)樣(yang)品(pin)泄(xie)漏(lou)。如果(guo)樣(yang)品(pin)太大(da)而(er)無法在單(dan)個(ge)試(shi)管中處理(li)，請(qing)分(fen)樣(yang)並使用多個(ge)試(shi)管進行(xing)處理(li)。這(zhe)些試(shi)劑(ji)盒已(yi)在 FastPrep® 儀(yi)器中進行(xing)了(le)嚴格(ge)測(ce)試。在(zai) FastPrep® 儀(yi)器中以(yi) 6.0 的速度(du)運(yun)行(xing)壹(yi)次(ci) 40 秒就足(zu)以(yi)裂(lie)解幾乎(hu)所有樣(yang)品(pin)。如果用戶(hu)通過(guo)實(shi)驗確定需(xu)要額外的(de)處理(li)時(shi)間，則應(ying)在連(lian)續(xu)的(de) FastPrep® 儀(yi)器勻漿(jiang)之間將(jiang)樣(yang)品(pin)在微(wei)珠(zhu)管(guan)中的冰(bing)上(shang)孵育(yu)至少(shao) 2 分鐘If you use other bead beater device, please follow instruction manual from manufaturer to set appropriate parameter for good performance.

操(cao)作步驟(zhou)

ð 註(zhu)意(yi)：

1. 首ci使用前，將(jiang)規定量的(de)乙醇加入(ru)PQ溶(rong)液瓶(ping)中，緩沖(chong)WB瓶(ping)中，混(hun)勻，並在瓶(ping)子上(shang)打(da)勾。

2.向微(wei)珠(zhu)管(guan)中加入(ru)多(duo)達(da) 500 mg 的土(tu)壤(rang)樣(yang)品(pin)。

3.將(jiang)980μl 磷酸鈉緩沖(chong)液添加到(dao)磁珠(zhu)管(guan)中的樣(yang)品(pin)中。溫和(he)的(de) votex混(hun)合(he)。加入(ru)120μlMT 緩沖(chong)液。

ð 註(zhu)意(yi)：

檢(jian)查MT緩沖(chong)區。如果MT緩沖(chong)液沈澱，請(qing)在(zai)使用前將(jiang)溶液加熱至(zhi)60°C直至溶解。

在(zai)FastPrep®儀(yi)器中以(yi)6.0的速度(du)設置(zhi)40秒。Centrifuge at 12,000 x g for 5minutes to pellet debris.

將(jiang)上清液轉移(yi)至(zhi)幹(gan)凈(jing)的(de)2.0 ml 離(li)心管(guan)中。加入(ru)250μl PPS 溶(rong)液，用手(shou)搖(yao)動試管(guan)10次混(hun)合(he)。在4°C下(xia)孵育(yu)5分鐘。

在(zai)室溫下(xia)以(yi) 10,000xg離(li)心管(guan)3分鐘。避免(mian)沈澱，將(jiang)最多(duo)900μl上清液轉移(yi)到(dao)幹(gan)凈(jing)的(de)2ml 離(li)心管(guan)中，但不(bu)超過(guo)900μl。

加(jia)入(ru)300μlIRS溶液（1/3 體積）並短(duan)暫渦旋(xuan)。在4°C下(xia)孵育(yu)5分鐘。

在(zai)室溫下(xia)以(yi)10,000xg離(li)心管(guan)1分鐘。避免(mian)沈澱，將(jiang)上清液轉移(yi)到(dao)幹(gan)凈(jing)的(de) 5 ml離(li)心管(guan)中。

向澄(cheng)清的(de)上(shang)清液中加入(ru)1.5體(ti)積的PQ溶(rong)液，並通過(guo)移(yi)液混(hun)合(he)。

示(shi)例：向1100μl 裂(lie)解物中加入(ru)1650μlPQ 溶(rong)液。如果回收的(de)上(shang)清液較少，則相應地(di)減少(shao)PQ溶(rong)液的量。加(jia)入乙(yi)醇後(hou)可(ke)能(neng)會(hui)形成沈(chen)澱，但這(zhe)不(bu)會(hui)影(ying)響程序。

註(zhu)意(yi)：確保(bao)已(yi)將(jiang)乙醇添加(jia)到(dao) PQ 溶液中。

註(zhu)意(yi)：將(jiang) PQ 溶液直接(jie)滴(di)加(jia)到(dao)已澄(cheng)清的(de)上(shang)清液中，並立(li)即(ji)混(hun)勻，這壹(yi)點(dian)很重(zhong)要。2.將(jiang)約(yue) 700 微(wei)升混(hun)合(he)液加入離(li)心過(guo)濾器（置(zhi)於(yu)收集(ji)管中），在室溫下(xia)以(yi) 10,000×g 離(li)心 1 分(fen)鐘。棄去(qu)濾液。再加入(ru) 700 微(wei)升，重(zhong)復(fu)操(cao)作，直(zhi)至所有剩余混(hun)合(he)液都加入離(li)心過(guo)濾器。
註意(yi)：每(mei)個(ge)樣(yang)本處(chu)理(li)可(ke)能(neng)需要(yao) 4 至(zhi) 5 次(ci)加載。3.向離(li)心過(guo)濾器中加入(ru) 600 微(wei)升 WB 緩沖(chong)液，在室溫下(xia)以(yi) 10,000×g 離(li)心 30 秒。棄去(qu)濾液。用另外 600 微(wei)升 WB 緩沖(chong)液重復步驟(zhou) 11。
註意(yi)：確保(bao)向 WB 緩沖(chong)液中加入(ru)乙(yi)醇。4.在室溫下(xia)以(yi) 13000×g 的離(li)心力離(li)心旋(xuan)轉過(guo)濾器 2 分鐘，使旋(xuan)轉過(guo)濾器幹(gan)燥(zao)。5.將(jiang)離(li)心柱過(guo)濾器小心(xin)放入幹(gan)凈(jing)的(de) 1.5 毫升離(li)心管(guan)中。避免(mian)緩沖(chong)液 WB 濺到(dao)離(li)心柱過(guo)濾器上。向柱膜(mo)中心加(jia)入(ru) 100 微(wei)升洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液（可(ke)選(xuan)：將(jiang)水預熱至(zhi) 70 - 90 攝氏度(du)可(ke)提(ti)高 DNA 產量）。在(zai)室溫下(xia)孵育(yu) 3 - 5 分鐘，然(ran)後(hou)以(yi) 13000 x g 離(li)心 1 分(fen)鐘以(yi)洗脫(tuo) DNA。
註(zhu)意(yi)：使用較小體積（最小(xiao) 30 微(wei)升）的(de)洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液可(ke)獲(huo)得更高濃度(du)。
可(ke)選(xuan)：將(jiang)洗脫(tuo)液放回離(li)心柱中再洗脫(tuo)壹(yi)次(ci)。這可(ke)使 DNA 濃度(du)提高約(yue) 10 - 15%。

超(chao)純超(chao)快土(tu)壤(rang)基因組DNA快速提(ti)取(qu)試(shi)劑(ji)he