普通的手(shou)提(ti)或者(zhe)試劑(ji)盒(he)提(ti)取(qu)的(de)土壤基(ji)因(yin)組DNA由(you)於(yu)常常殘留(liu)有(you)PCR的強(qiang)烈抑制(zhi)物如腐(fu)殖(zhi)酸、棕(zong)黃(huang)酸等(deng)雜(za)質(zhi)造(zao)成實驗(yan)失(shi)敗(bai)，此(ci)外，由於(yu)采(cai)用(yong)了劇(ju)烈(lie)的(de)玻璃珠擊(ji)打來(lai)破裂菌體(ti)，常常造(zao)成(cheng)DNA剪(jian)切(qie)和降(jiang)解(jie)。
超純(chun)土壤基(ji)因(yin)組DNA快速(su)提(ti)qu試劑(ji)盒(he) 核(he)酸(suan)提(ti)取(qu)

諾(nuo)博(bo)萊德(de) 超純(chun)土壤基(ji)因(yin)組DNA快速(su)提(ti)qu試劑(ji)盒(he) 核(he)酸(suan)提(ti)取(qu)

超純(chun)土壤基(ji)因(yin)組DNA快速(su)提(ti)取(qu)試劑(ji)盒(he)

目錄號：40217

v適(shi)用(yong)範圍(wei)：

適(shi)用(yong)於快速(su)提(ti)取(qu)各(ge)種(zhong)土壤基(ji)因(yin)組DNA

v 試劑(ji)盒(he)組成(cheng)、儲存(cun)、穩定性：

本試劑(ji)盒(he)在(zai)室溫(wen)儲存(cun)12個月不(bu)影響使用(yong)效果。

儲存(cun)事項(xiang):

1.   溶液(ye)LYS或(huo)者(zhe)抑制(zhi)物去除液IR低溫(wen)時可(ke)能(neng)出現析出和沈(chen)澱(dian)，可(ke)以(yi)在(zai)37℃水浴幾(ji)分鐘幫助重(zhong)新(xin)溶解(jie)，恢(hui)復澄(cheng)清透(tou)明後(hou)冷卻(que)到室溫(wen)即(ji)可(ke)使用(yong),註(zhu)意不(bu)要劇烈搖晃(huang)，以(yi)免產(chan)生(sheng)大量(liang)氣(qi)泡(pao)。

2.   為避免降(jiang)低活性(xing)，方(fang)便運(yun)輸(shu)，提(ti)供蛋白(bai)酶(mei)K為凍(dong)幹(gan)粉(fen)狀，收(shou)到後(hou)，可(ke)短暫(zan)離心(xin)後(hou)，加(jia)入1毫(hao)升滅(mie)菌水溶解(jie)，因(yin)為反復凍(dong)融(rong)可(ke)能(neng)會(hui)降(jiang)低酶(mei)活性(xing)，因(yin)此溶解(jie)後(hou)立即(ji)按照(zhao)每次使用(yong)量(20微升)分裝(zhuang)凍(dong)存(cun)，－20℃保(bao)存(cun)。

3.   避免(mian)試劑(ji)長(chang)時間暴(bao)露於空(kong)氣(qi)中(zhong)產生(sheng)揮發(fa)、氧(yang)化、pH值(zhi)變化，各溶液(ye)使(shi)用(yong)後(hou)應(ying)及(ji)時蓋緊(jin)蓋子(zi)。

具體(ti)產(chan)品(pin)的參(can)數以(yi)收(shou)到產品(pin)說明(ming)書的參數為準

v產品(pin)介(jie)紹(shao)：

普通的手(shou)提(ti)或者(zhe)試劑(ji)盒(he)提(ti)取(qu)的(de)土壤基(ji)因(yin)組DNA由(you)於(yu)常常殘留(liu)有(you)PCR的強(qiang)烈抑制(zhi)物如腐(fu)殖(zhi)酸、棕(zong)黃(huang)酸等(deng)雜(za)質(zhi)造(zao)成實驗(yan)失(shi)敗(bai)，此(ci)外，由於(yu)采(cai)用(yong)了劇(ju)烈(lie)的(de)玻璃珠擊(ji)打來(lai)破裂菌體(ti)，常常造(zao)成(cheng)DNA剪(jian)切(qie)和降(jiang)解(jie)。本公(gong)司經過長(chang)期(qi)研(yan)發(fa)開發(fa)出了具(ju)有(you)自主(zhu)知識產權(quan)的土壤基(ji)因(yin)組DNA，通過專li配方(fang)的(de)腐(fu)殖(zhi)酸和棕(zong)黃酸去除試劑(ji)配合特殊(shu)處理(li)的純(chun)化柱(zhu)，可(ke)以(yi)最da程du的(de)去除這(zhe)些雜(za)質(zhi)，同(tong)時加(jia)上(shang)多次柱漂(piao)洗，確保(bao)得到的DNA具有(you)極(ji)gao純(chun)度，此(ci)外獨te的(de)抽(chou)提(ti)和裂解體(ti)系可(ke)以(yi)迅速裂解細(xi)胞(bao)（壁(bi)）和滅(mie)活細(xi)胞(bao)內(nei)核(he)酸(suan)酶(mei)，不(bu)需要借(jie)助(zhu)玻璃珠破壁(bi)，有(you)效保證了基(ji)因(yin)組DNA的(de)完(wan)整性(xing)。

v 產品(pin)特點(dian)：

1.本公(gong)司獨you的(de)專li配方(fang)和純(chun)化柱(zhu)能(neng)有(you)效去除腐殖(zhi)酸(suan)等雜(za)質(zhi)。

2.不(bu)需要借(jie)助(zhu)玻璃珠破壁(bi)，有(you)效保證了基(ji)因(yin)組DNA的(de)完(wan)整性(xing)，長(chang)度(du)可(ke)達(da)30kb-50kb，可(ke)直(zhi)接(jie)用(yong)於PCR，Southern-blot和各(ge)種(zhong)酶(mei)切反應(ying)。

3.兼(jian)容(rong)性(xing)強，適(shi)用(yong)於各種(zhong)不(bu)同的土壤包(bao)括(kuo)淤(yu)泥等(deng)提(ti)取(qu)困(kun)難的土壤。

4.多步(bu)驟(zhou)去除各種(zhong)雜(za)質(zhi)和抑制(zhi)物，保證了極(ji)gao純(chun)度，OD260/OD280典型的比值達(da)1.7～1.9。

5. 不(bu)需要使(shi)用(yong)有(you)毒(du)的ben酚(fen)等試劑(ji)，也不(bu)需要乙醇(chun)沈(chen)澱(dian)等步驟(zhou)。

6. 快速(su)，簡捷(jie)，單個樣品(pin)操作(zuo)壹般(ban)可(ke)在(zai)60分鐘(zhong)內完成。

v  註(zhu)意事項(xiang)：

1.所(suo)有(you)的離(li)心(xin)步驟(zhou)均(jun)在(zai)室溫(wen)完(wan)成(cheng)，使(shi)用(yong)轉(zhuan)速(su)可(ke)以(yi)達(da)到13,000rpm的傳統(tong)臺(tai)式(shi)離(li)心(xin)機(ji)，如Eppendorf 5415C 或(huo)者(zhe)類(lei)似(si)離(li)心(xin)機(ji)。

2. 開始(shi)實驗(yan)前根據(ju)需要將(jiang)水浴預熱(re)到37℃或者(zhe)70℃備用(yong)。

3. 溶液(ye)S3和抑制(zhi)物去除液IR中(zhong)含有(you)刺激(ji)性化(hua)合物，操作時要戴(dai)乳膠手(shou)套(tao)，避免沾(zhan)染(ran)皮(pi)膚，眼(yan)睛和衣(yi)服。若(ruo)沾染(ran)皮(pi)膚、眼(yan)睛時，要用(yong)大量(liang)清(qing)水或者(zhe)生(sheng)理(li)鹽水沖洗(xi)。

洗脫(tuo)液(ye)EB不(bu)含有(you)螯合劑(ji)EDTA，不(bu)影響下遊(you)酶(mei)切、連(lian)接(jie)等(deng)反應(ying)。也(ye)可(ke)以(yi)使用(yong)水洗脫，但(dan)應(ying)該(gai)確保(bao)批pH大於(yu)7.5，pH過低影(ying)響洗(xi)脫效率。用(yong)水洗脫DNA應(ying)該(gai)保存(cun)在(zai)－20℃。DNA如果需要長(chang)期(qi)保(bao)存(cun)，可(ke)以(yi)用(yong)TE緩沖液(ye)洗脫(tuo)（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但(dan)是EDTA可(ke)能(neng)影響(xiang)下遊(you)酶(mei)切反應(ying)，使(shi)用(yong)時可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)稀釋。

v  操作(zuo)步(bu)驟(zhou)：（實驗(yan)前請(qing)先閱(yue)讀註(zhu)意事項(xiang)）

提(ti)示(shi)：第壹次(ci)使用(yong)前請(qing)先在(zai)漂洗(xi)液WB和溶液(ye)S3中(zhong)加(jia)入指(zhi)ding量(liang)無水乙醇(chun)，充(chong)分混(hun)勻，加(jia)入後(hou)請(qing)及時在(zai)方(fang)框打鉤(gou)標(biao)記(ji)已(yi)加(jia)入乙醇(chun)，以(yi)免多(duo)次(ci)加(jia)入!

1. 取(qu)0.2克土壤放(fang)入離(li)心(xin)管，用(yong)牙(ya)簽或者(zhe)槍頭搗(dao)碎(sui)後(hou)加(jia)入0.5ml溶液(ye)SUS，用(yong)槍頭攪(jiao)拌後(hou)短暫(zan)渦旋(xuan)幫(bang)助(zhu)重(zhong)懸。

如果預(yu)計土壤裏(li)面(mian)含(han)有(you)較多(duo)難裂解的(de)菌類(lei)如革蘭氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)，可(ke)先在(zai)0.5ml溶液(ye)SUS裏(li)面(mian)加(jia)入10mg的(de)rong菌(jun)酶(mei)，吹(chui)打(da)混(hun)勻後(hou)再(zai)加(jia)入，並(bing)加(jia)做(zuo)步驟(zhou)2。

2.（可(ke)選(xuan)步(bu)驟(zhou)）:37℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)，每10分鐘顛倒(dao)混(hun)勻幾(ji)次。

對(dui)於(yu)難裂解的(de)菌類(lei)如革蘭氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)含(han)量豐富(fu)的(de)土壤，並(bing)在(zai)上壹步(bu)驟(zhou)加(jia)入了rong菌(jun)酶(mei)的樣(yang)品(pin)，需要加(jia)做(zuo)此步驟(zhou)來(lai)幫助(zhu)裂解。

3.加(jia)入20μl蛋白(bai)酶(mei)K (20mg/ml)溶液(ye)，短暫(zan)渦旋(xuan)幫(bang)助(zhu)混(hun)勻。

可(ke)選(xuan)做(zuo)步驟(zhou):為提(ti)高(gao)產(chan)量，可(ke)以(yi)在(zai)37℃振蕩(dang)10分(fen)鐘(zhong)或(huo)者(zhe)渦旋(xuan)振蕩(dang)2分(fen)鐘(zhong)。（註(zhu)意渦旋(xuan)振蕩(dang)可(ke)能(neng)剪(jian)切(qie)DNA）

4. 加(jia)入120μl溶液(ye)LYS，短暫(zan)渦旋(xuan)混(hun)勻，65℃溫(wen)育30分(fen)鐘(zhong)，期間(jian)顛倒(dao)混(hun)勻幾(ji)次。

65℃溫(wen)育時間可(ke)以(yi)根據(ju)具(ju)體(ti)樣(yang)品(pin)種(zhong)類(lei)和產(chan)量進(jin)行(xing)延長(chang)或(huo)者(zhe)縮短以(yi)取(qu)得(de)優良產量(liang)和純(chun)度，可(ke)在(zai)10分鐘(zhong)－2小時範圍(wei)內(nei)調(tiao)整。

5. （可(ke)選(xuan)步(bu)驟(zhou)）:於(yu)－70℃冷(leng)凍(dong)，65℃融(rong)化(hua)，反復3次。

對(dui)於(yu)難裂解的(de)菌類(lei)如革蘭氏(shi)陽(yang)性(xing)菌(jun)含(han)量豐富(fu)的(de)土壤， 可(ke)加(jia)做(zuo)此步驟(zhou)來(lai)幫助(zhu)裂解。

6.  顛倒(dao)混(hun)勻後(hou)，13,000 rpm離心(xin)2分鐘,小(xiao)心(xin)轉(zhuan)移(yi)上清至(zhi)新(xin)的離(li)心(xin)管（記(ji)錄上清體積(ji)）。

7.加(jia)入1/3(三(san)分之壹)體(ti)積的(de)溶液(ye)S1,顛(dian)倒(dao)幾(ji)次，渦旋(xuan)5秒混(hun)勻後(hou)，冰上(shang)放(fang)置5分(fen)鐘(zhong)。

8.13,000 rpm離心(xin)5分鐘,小(xiao)心(xin)轉(zhuan)移(yi)上清至(zhi)新(xin)的離(li)心(xin)管（記(ji)錄上清體積(ji)）。

9.加(jia)入1/3(三(san)分之壹)體(ti)積的(de)溶液(ye)S2,顛(dian)倒(dao)幾(ji)次，短暫(zan)渦旋(xuan)混(hun)勻後(hou)，冰上(shang)放(fang)置5分(fen)鐘(zhong)。

該步(bu)驟(zhou)主(zhu)要(yao)是(shi)進(jin)壹步(bu)去除humic substance等PCR抑制(zhi)物質以(yi)提(ti)高(gao)純(chun)度，但(dan)是會(hui)降(jiang)低壹些產量，如果對(dui)產(chan)量(liang)要(yao)求(qiu)高(gao)或(huo)者(zhe)提(ti)取(qu)的(de)DNA不(bu)用(yong)於PCR，可(ke)以(yi)嘗試略(lve)去此步(bu)驟(zhou)以(yi)提(ti)高(gao)產(chan)量。如果預(yu)計土壤成(cheng)份(fen)復雜(za)PCR抑制(zhi)物質多(duo)，可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)提(ti)高(gao)S2加(jia)入量(liang)(如加(jia)入等(deng)體(ti)積的S2)，可(ke)以(yi)提(ti)高(gao)純(chun)度，但(dan)是註(zhu)意也會(hui)顯著降(jiang)低產(chan)量。

10.13,000 rpm離心(xin)5分鐘,小(xiao)心(xin)轉(zhuan)移(yi)上清至(zhi)新(xin)的離(li)心(xin)管（記(ji)錄上清體積(ji)）。

11.加(jia)入1.5倍體積(ji)的溶液(ye)S3（請(qing)先檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)已加(jia)入無(wu)水乙醇(chun)!）,顛(dian)倒(dao)幾(ji)次，短暫(zan)渦旋(xuan)混(hun)勻。

12.將上(shang)壹步(bu)混(hun)合物700μl（包(bao)括(kuo)可(ke)能(neng)有(you)的沈(chen)澱(dian)）加(jia)入壹個吸(xi)附(fu)柱AC中(zhong)，（吸(xi)附(fu)柱放(fang)入收(shou)集(ji)管中(zhong)），12,000rpm離心(xin)30-60秒，倒(dao)掉收(shou)集(ji)管中(zhong)的廢(fei)液。重(zhong)復直(zhi)到所(suo)有(you)的混(hun)合物都加(jia)完(wan)。

13.加(jia)入500μl抑制(zhi)物去除液IR，12,000 rpm 離(li)心(xin)30秒，棄(qi)廢(fei)液(ye)。

14.加(jia)入700μl漂(piao)洗(xi)液WB（請(qing)先檢(jian)查(zha)是(shi)否(fou)已加(jia)入無(wu)水乙醇(chun)!），12,000 rpm離(li)心(xin)30秒，棄(qi)掉(diao)廢(fei)液(ye)。

15.加(jia)入500μl漂(piao)洗(xi)液WB，12,000 rpm 離心(xin)30秒，棄(qi)掉(diao)廢(fei)液(ye)。

16.將吸(xi)附(fu)柱AC放(fang)回(hui)空(kong)收(shou)集(ji)管中(zhong)，13,000 rpm離心(xin)2分鐘，盡(jin)量(liang)除去漂洗(xi)液(ye)，以(yi)免漂(piao)洗(xi)液(ye)中(zhong)殘留(liu)乙醇(chun)抑制(zhi)下遊(you)反應(ying)。

17.取(qu)出吸(xi)附(fu)柱AC，放(fang)入壹個幹(gan)凈(jing)的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)，在(zai)吸(xi)附(fu)膜(mo)的中(zhong)間部(bu)位加(jia)100μl洗(xi)脫緩沖液(ye)EB（洗脫(tuo)緩沖液(ye)事先(xian)在(zai) 65-70℃水浴中(zhong)預熱(re)效果更(geng)好），室溫(wen)放(fang)置3-5分(fen)鐘(zhong)，12,000rpm離心(xin)1分鐘。將(jiang)得(de)到的溶液(ye)重(zhong)新(xin)加(jia)入離(li)心(xin)吸(xi)附(fu)柱中(zhong)，室溫(wen)放(fang)置2分(fen)鐘(zhong)，12,000rpm離心(xin)1分鐘。

洗脫(tuo)體(ti)積越(yue)大，洗(xi)脫(tuo)效率越(yue)高(gao)，如需要DNA濃度(du)較(jiao)高(gao)，可(ke)以(yi)適(shi)當(dang)減少洗脫(tuo)體積，但(dan)是最小體(ti)積不(bu)應(ying)少於50μl，體(ti)積過小(xiao)降(jiang)低DNA洗(xi)脫效率，減少DNA產量(liang)。

18. DNA可(ke)以(yi)存(cun)放(fang)在(zai)2-8℃,如果要(yao)長(chang)時間存(cun)放(fang)，可(ke)以(yi)放(fang)置在(zai)－20℃。

超純(chun)土壤基(ji)因(yin)組DNA快速(su)提(ti)qu試劑(ji)盒(he) 核(he)酸(suan)提(ti)取(qu)