福(fu)爾(er)馬(ma)林固(gu)定或者(zhe)石(shi)蠟包埋(mai)組(zu)織(zhi)通(tong)過(guo)獨(du)te裂解(jie)液熱(re)處(chu)理和(he)蛋(dan)白酶K共同(tong)作(zuo)用(yong)迅(xun)速裂解(jie)細胞(bao)釋(shi)放出基(ji)因組(zu)DNA，然後基因組(zu)DNA在(zai)高(gao)離(li)序鹽(yan)狀態下(xia)選(xuan)擇性吸(xi)附(fu)於(yu)離(li)心柱(zhu)內(nei)矽(gui)基(ji)質膜， 再(zai)通(tong)過(guo)壹系(xi)列(lie)快(kuai)速的(de)漂(piao)洗(xi)－離(li)心的(de)步驟，抑制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液(ye)和(he)漂(piao)洗(xi)液將(jiang)細胞(bao)代(dai)謝物(wu)、蛋(dan)白(bai)等雜質去(qu)除(chu)，最(zui)後低鹽(yan)的(de)洗(xi)脫緩(huan)沖液將(jiang)純凈(jing)基(ji)因組(zu)DNA從矽(gui)基(ji)質膜上(shang)洗(xi)脫。
固(gu)定(ding)包埋(mai)組(zu)織(zhi)DNA快(kuai)速提取(qu)試劑盒

諾(nuo)博萊(lai)德(de) 固定(ding)包埋(mai)組(zu)織(zhi)DNA快(kuai)速提取(qu)試劑盒

固(gu)定包埋(mai)組(zu)織(zhi)DNA快(kuai)速提取(qu)試劑盒（離(li)心柱(zhu)型）

目(mu)錄號(hao)：40312

v  適(shi)用範(fan)圍(wei)：

適(shi)用於(yu)快(kuai)速提取(qu)各(ge)種(zhong)福爾馬(ma)林固(gu)定和(he)石(shi)蠟包埋(mai)組(zu)織(zhi)DNA

v試劑盒組(zu)成(cheng)、儲(chu)存、穩(wen)定(ding)性：

本(ben)試劑盒在(zai)室(shi)溫(wen)儲(chu)存12個月不(bu)影響使用(yong)效果

具(ju)體(ti)產(chan)品(pin)的(de)參(can)數(shu)以(yi)收(shou)到產品(pin)說(shuo)明書的(de)參(can)數(shu)為(wei)準(zhun)

儲(chu)存事(shi)項:

1.結(jie)合液(ye)CB或者(zhe)抑制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液(ye)IR低溫時(shi)可(ke)能(neng)出現(xian)析(xi)出和(he)沈澱，可(ke)以(yi)在(zai)37℃水(shui)浴(yu)幾(ji)分鐘(zhong)幫助(zhu)重新溶(rong)解(jie)，恢復(fu)澄(cheng)清透明後冷卻(que)到室溫即(ji)可(ke)使用(yong)。

2.為(wei)避(bi)免降(jiang)低活(huo)性、方便(bian)運輸(shu)，提(ti)供(gong)蛋(dan)白酶K為凍(dong)幹(gan)粉狀，收(shou)到後，可(ke)短(duan)暫(zan)離(li)心後，10mg/20mg加(jia)入(ru)0.5ml/1ml滅菌(jun)水(shui)溶(rong)解(jie)，因為(wei)反復(fu)凍(dong)融可(ke)能(neng)會降(jiang)低酶活(huo)性，因此(ci)溶(rong)解(jie)後立即(ji)按(an)照(zhao)每(mei)次使用(yong)量分(fen)裝(zhuang)凍(dong)存，－20℃保(bao)存(cun)。

3.避(bi)免試劑長時(shi)間暴(bao)露於(yu)空(kong)氣中產(chan)生揮(hui)發、氧化、pH值(zhi)變(bian)化，各(ge)溶(rong)液(ye)使用(yong)後應及時(shi)蓋緊蓋子(zi)。

v 產(chan)品(pin)介紹：

福(fu)爾馬(ma)林固(gu)定或者(zhe)石(shi)蠟包埋(mai)組(zu)織(zhi)通(tong)過(guo)獨(du)te裂解(jie)液熱(re)處(chu)理和(he)蛋(dan)白酶K共同(tong)作(zuo)用(yong)迅(xun)速裂解(jie)細胞(bao)釋(shi)放出基(ji)因組(zu)DNA，然後基因組(zu)DNA在(zai)高(gao)離(li)序鹽(yan)狀態下(xia)選(xuan)擇性吸(xi)附(fu)於(yu)離(li)心柱(zhu)內(nei)矽(gui)基(ji)質膜， 再(zai)通(tong)過(guo)壹系(xi)列(lie)快(kuai)速的(de)漂(piao)洗(xi)－離(li)心的(de)步驟，抑制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液(ye)和(he)漂(piao)洗(xi)液將(jiang)細胞(bao)代(dai)謝物(wu)、蛋(dan)白(bai)等雜質去(qu)除(chu)，最(zui)後低鹽(yan)的(de)洗(xi)脫緩(huan)沖液將(jiang)純凈(jing)基(ji)因組(zu)DNA從矽(gui)基(ji)質膜上(shang)洗(xi)脫。

v 產(chan)品(pin)特點：

1.  離(li)心吸(xi)附(fu)柱(zhu)內(nei)矽(gui)基(ji)質膜全(quan)部采(cai)用(yong)進口(kou)世界(jie)著名公(gong)司(si)特制(zhi)吸(xi)附(fu)膜，柱(zhu)與(yu)柱(zhu)之間(jian)吸(xi)附(fu)量(liang)差異(yi)極(ji)小，可(ke)重(zhong)復性好。克服了(le)國(guo)產(chan)試劑盒膜質(zhi)量(liang)不(bu)穩(wen)定的(de)弊(bi)端。

2. 不(bu)需(xu)要(yao)使用(yong)有(you)毒(du)的(de)ben酚等試劑，也不(bu)需(xu)要(yao)乙(yi)醇沈(chen)澱(dian)等步驟。

3. 快(kuai)速，簡捷(jie)，單個樣(yang)品(pin)操作(zuo)壹(yi)般(ban)可(ke)在(zai)30分(fen)鐘(zhong)內完(wan)成。

多(duo)次柱(zhu)漂(piao)洗(xi)確保(bao)高(gao)純(chun)度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典(dian)型的(de)比(bi)值(zhi)達(da)1.7～1.9，長度可(ke)達(da)30kb -50kb，可(ke)直接(jie)用於(yu)PCR，Southern-blot和(he)各(ge)種(zhong)酶切反應。

v 註(zhu)意事(shi)項：

1. 所(suo)有(you)的(de)離(li)心步驟均(jun)在(zai)室(shi)溫(wen)完(wan)成，使用(yong)轉速可(ke)以(yi)達到13,000rpm的(de)傳(chuan)統臺式(shi)離(li)心機，如Eppendorf 5415C 或者(zhe)類(lei)似(si)離(li)心機。

2. 需(xu)要(yao)自(zi)備乙(yi)醇(chun)（需(xu)要(yao)準(zhun)備100%/80%/60%/40%不(bu)同(tong)濃度）或者(zhe)二(er)甲(jia)苯(ben)。

3. 實(shi)驗前(qian)將(jiang)需要(yao)的(de)水(shui)浴(yu)先預熱(re)到37℃備用。

4. 結(jie)合液(ye)CB 和抑制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液(ye)IR中含(han)有(you)刺激(ji)性化合(he)物(wu)，操(cao)作(zuo)時(shi)要(yao)戴(dai)乳(ru)膠(jiao)手(shou)套(tao)，避(bi)免沾(zhan)染皮(pi)膚(fu)，眼睛和(he)衣(yi)服。若沾(zhan)染皮(pi)膚(fu)、眼睛時(shi)，要(yao)用(yong)大量(liang)清(qing)水(shui)或者(zhe)生理鹽(yan)水(shui)沖洗(xi)。

5. 洗(xi)脫液(ye)EB不(bu)含(han)有(you)螯(ao)合劑EDTA，不(bu)影響下(xia)遊(you)酶(mei)切、連接(jie)等反應。也可(ke)以(yi)使用(yong)水(shui)洗(xi)脫，但(dan)應該確保(bao)批pH大(da)於(yu)7.5，pH過(guo)低影響洗(xi)脫效(xiao)率(lv)。用水(shui)洗(xi)脫DNA應該保(bao)存(cun)在(zai)－20℃。DNA如果需(xu)要(yao)長(chang)期保(bao)存(cun)，可(ke)以(yi)用TE緩(huan)沖液洗(xi)脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但(dan)是(shi)EDTA可(ke)能(neng)影響下(xia)遊(you)酶(mei)切反應，使用(yong)時(shi)可(ke)以(yi)適當稀釋(shi)。

v  操(cao)作(zuo)步驟：（實驗前(qian)請(qing)先閱(yue)讀註意(yi)事(shi)項）

提(ti)示：第(di)壹次使用(yong)前請(qing)先在(zai)漂(piao)洗(xi)液WB中加(jia)入(ru)指ding量(liang)無水(shui)乙(yi)醇(chun)，充分(fen)混勻，加(jia)入(ru)後請及(ji)時(shi)在(zai)方(fang)框(kuang)打(da)鉤標(biao)記(ji)已加(jia)入(ru)乙醇，以免多次加(jia)入(ru)!

1. 將(jiang)組(zu)織(zhi)切片放入離(li)心管(guan)子(zi)，浸泡在(zai)二(er)甲(jia)苯(ben)中脫(tuo)蠟約30分(fen)鐘(zhong)（具(ju)體(ti)時(shi)間根(gen)據切片厚度調(tiao)整）。

2. 將(jiang)切片依(yi)次放(fang)入(ru)100%乙醇/80%乙醇(chun)/60%乙(yi)醇/40%乙(yi)醇(chun)/去(qu)離(li)子(zi)水(shui)，每(mei)個液體中浸泡10秒鐘(zhong)重新水(shui)化(hua)切片。

剛(gang)放入(ru)100%乙醇時(shi)，應該見(jian)到切片變白。

3. 顯微(wei)鏡(jing)觀察(cha)下(xia)，用刀片切下(xia)擬(ni)提(ti)取(qu)DNA的(de)目(mu)標(biao)組(zu)織(zhi)，放(fang)入(ru)預(yu)先稱(cheng)重(zhong)的(de)1.5ml離(li)心管(guan)。再(zai)次稱(cheng)重(zhong)，計(ji)算(suan)出切片組(zu)織(zhi)重(zhong)量(liang)。

4. 在(zai)25-50mg組(zu)織(zhi)中加(jia)入(ru)200μl裂解(jie)液FTL,再(zai)加(jia)入(ru)20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶(mei)K溶(rong)液(ye)(20mg/ml)，立即(ji)混(hun)勻混(hun)勻後置37℃水(shui)浴(yu)過(guo)夜。

5. 再(zai)加(jia)入(ru)10μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶(mei)K溶(rong)液(ye)(20mg/ml)，混勻後55℃水(shui)浴(yu)1-2小時(shi)。

此(ci)步驟後，不(bu)應該見(jian)到粗大的(de)組(zu)織(zhi)顆(ke)粒(li)了(le)。

6. 加(jia)入(ru)200μl 結合液CB，立刻(ke)渦旋振蕩20秒充分(fen)混勻後置70℃水(shui)浴(yu)10分(fen)鐘(zhong)。

7. 冷(leng)卻後加(jia)入(ru)100μl 異丙醇，立刻(ke)渦旋振蕩30秒充分(fen)混勻，此(ci)時(shi)可(ke)能(neng)會出現(xian)絮(xu)狀沈澱(dian)。

8. 用(yong)1毫升(sheng)的(de)槍頭吸(xi)取(qu)混合(he)物(wu)，將(jiang)混合(he)物(wu)加(jia)入(ru)壹個吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC中，（吸(xi)附(fu)柱(zhu)放(fang)入(ru)收(shou)集管(guan)中）13,000rpm離(li)心60秒，倒掉(diao)收(shou)集管(guan)中的(de)廢液(ye)。

如果有(you)不(bu)溶(rong)組(zu)織(zhi)物(wu)可(ke)能(neng)堵(du)住(zhu)槍頭，可(ke)將(jiang)槍頭在(zai)吸(xi)水(shui)紙(zhi)上輕(qing)蹭(ceng)去除(chu)不(bu)溶(rong)物(wu)；如果吸(xi)上(shang)來(lai)的(de)混(hun)合(he)物(wu)少(shao)則(ze)可(ke)以(yi)將(jiang)槍頭和不(bu)溶(rong)物(wu)壹(yi)起(qi)棄(qi)去，該(gai)做(zuo)法(fa)是為了(le)去(qu)除(chu)不(bu)溶(rong)物(wu)，以(yi)免堵(du)塞(sai)離(li)心柱(zhu)。。

9. 加(jia)入(ru)500μl抑制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液(ye)IR，12,000rpm 離(li)心30秒，棄(qi)廢液(ye)。

10. 加(jia)入(ru)700μl漂洗(xi)液WB（請(qing)先檢查(zha)是(shi)否已加(jia)入(ru)無水(shui)乙(yi)醇(chun)!），12,000rpm 離(li)心30秒，棄(qi)掉廢液(ye)。

11. 加(jia)入(ru)500μl漂洗(xi)液WB，12,000rpm 離(li)心30秒，棄(qi)掉廢液(ye)。

12. 將(jiang)吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC放(fang)回(hui)空(kong)收(shou)集管(guan)中，13,000rpm離(li)心2分鐘(zhong)，盡量(liang)除(chu)去(qu)漂(piao)洗(xi)液， 以(yi)免漂洗(xi)液中殘(can)留乙醇(chun)抑制(zhi)下(xia)遊(you)反(fan)應。

13.  取(qu)出吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC，放(fang)入(ru)壹個幹(gan)凈的(de)離(li)心管(guan)中，在(zai)吸(xi)附(fu)膜的(de)中間(jian)部位加(jia)100μl洗(xi)脫緩(huan)沖液EB（洗(xi)脫緩(huan)沖液事先在(zai)65-70℃水(shui)浴(yu)中預(yu)熱效果更(geng)好(hao)）， 室(shi)溫(wen)放置3-5分鐘(zhong)，12,000rpm 離(li)心1分鐘(zhong)。將(jiang)得到的(de)溶(rong)液(ye)重新加(jia)入(ru)離(li)心吸(xi)附(fu)柱(zhu)中，室(shi)溫放置(zhi)2分鐘(zhong)，12,000rpm離(li)心1分鐘(zhong)。

洗(xi)脫體(ti)積(ji)越大，洗(xi)脫效(xiao)率(lv)越高(gao)，如果需(xu)要(yao)DNA濃度較(jiao)高(gao)，可(ke)以(yi)適當減少洗(xi)脫體(ti)積(ji)，但是最(zui)小體積不(bu)應少於(yu)50μl，體(ti)積過小降(jiang)低DNA洗(xi)脫效(xiao)率(lv)，減少DNA產量(liang)。

14. DNA可(ke)以(yi)存放在(zai)2-8℃，如果要(yao)長(chang)時(shi)間存(cun)放，可(ke)以(yi)放置在(zai)－20℃。

v 附(fu)錄：另(ling)外(wai)壹(yi)種(zhong)脫(tuo)蠟方(fang)式(shi)

1.將(jiang)目標(biao)組(zu)織(zhi)切片放入離(li)心管(guan)，加(jia)入(ru)1ml 100%二甲(jia)苯(ben)，渦旋振蕩10秒。瞬間(jian)離(li)心把組(zu)織(zhi)全(quan)部浸入(ru)到二甲(jia)苯(ben)。

2. 50℃水(shui)浴(yu)3分(fen)鐘(zhong)熔解(jie)石(shi)蠟，20-25℃最(zui)高(gao)速離(li)心2分鐘(zhong)，收(shou)集組(zu)織(zhi)到管(guan)底(di)。

3. 小心用移液器(qi)吸(xi)棄(qi)上清(qing)二(er)甲(jia)苯(ben)，註意(yi)不(bu)要(yao)吸(xi)到沈澱。

4. 加(jia)入(ru)1ml無水(shui)乙(yi)醇(chun)，渦旋振蕩，最(zui)高(gao)速離(li)心2分鐘(zhong)，小心吸(xi)棄(qi)上清(qing)乙(yi)醇(chun)。

5. 加(jia)入(ru)1ml無水(shui)乙(yi)醇(chun)，重復(fu)步驟6壹遍(bian)，盡可(ke)能(neng)吸(xi)棄(qi)所(suo)有(you)乙(yi)醇(chun)。

6. 室(shi)溫或者(zhe)37℃ 晾(liang)幹(gan)乙醇(chun)10分(fen)鐘(zhong)或直到所(suo)有(you)乙(yi)醇(chun)揮(hui)發幹(gan)。

v  問(wen)題(ti)與(yu)解(jie)決(jue)方(fang)法(fa)：