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聯(lian)系(xi)電(dian)話(hua):10-62817090
| 品(pin)牌 | NobleRyder/諾博(bo)萊(lai)德 | 貨號(hao) | 40310 |
|---|---|---|---|
| 規(gui)格 | 50次(ci) | 供貨周(zhou)期(qi) | 現(xian)貨(huo) |
| 主要用途 | 適合於從口(kou)腔(qiang)/yan拭子中(zhong)分(fen)離(li)純化基因組(zu)DNA。 | 應用領域 | 環保(bao),化工,生物(wu)產業(ye),農(nong)林(lin)牧(mu)漁(yu),制藥(yao)/生物(wu)制藥(yao) |
諾博(bo)萊(lai)德 口(kou)腔(qiang)/yan拭子基因組(zu)DNA快速(su)提(ti)取試劑盒
yan拭子基因組(zu)DNA快速(su)提(ti)取試劑盒(離(li)心柱型(xing))
目(mu)錄號(hao):40310
目(mu)錄編(bian)號(hao) | 包(bao)裝(zhuang)單(dan)位(wei) |
40310-50 | 50次 |
v 適(shi)用範(fan)圍:
適合於從口(kou)腔(qiang)/yan拭子中(zhong)分(fen)離(li)純化基因組(zu)DNA。
v 試劑盒組(zu)成、儲存(cun)、穩(wen)定性:
試劑盒組(zu)成 | 保(bao)存(cun) | 50次 |
裂(lie)解(jie)液ML | 室溫(wen) | 20 ml |
結合液CB | 室溫(wen) | 20 ml |
抑(yi)制物(wu)去除(chu)液IR | 室溫(wen) | 25 ml |
漂洗(xi)液(ye)WB | 室溫(wen) | 15ml 第壹(yi)次(ci)使(shi)用前按(an)說(shuo)明加指ding量(liang)乙(yi)醇(chun) |
Acryl Carrier | -20℃ | 200μl |
洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液EB | 室溫(wen) | 15 ml |
蛋白酶(mei)K fen(可(ke)選) 20mg/ml | -20℃ | 20 mg |
吸(xi)附柱AC和(he)收集管 | 室溫(wen) | 50套 |
本(ben)試劑盒在室溫(wen)儲存(cun)12個月不(bu)影響(xiang)使(shi)用效(xiao)果
儲存(cun)事(shi)項:
1. 結合液CB或者(zhe)抑(yi)制物(wu)去除(chu)液IR低(di)溫(wen)時(shi)可能(neng)出(chu)現(xian)析(xi)出和(he)沈(chen)澱(dian),可(ke)以(yi)在(zai)37℃水浴幾分(fen)鐘幫助(zhu)重新(xin)溶(rong)解,恢(hui)復澄(cheng)清(qing)透(tou)明後冷卻到室溫(wen)即(ji)可使(shi)用。
2. 為避免降低(di)活性,方便運(yun)輸(shu),提(ti)供蛋白酶(mei)K為(wei)凍(dong)幹(gan)粉(fen)狀(zhuang),收到後,可短暫(zan)離(li)心後,加入(ru)1毫(hao)升滅菌水(shui)溶(rong)解。因(yin)為反復凍(dong)融可(ke)能(neng)會(hui)降低(di)酶(mei)活(huo)性,因(yin)此溶(rong)解後立即(ji)按(an)照每次(ci)使(shi)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)凍(dong)存(cun),-20℃保(bao)存(cun)。
3. 避免試劑長時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)空氣(qi)中發(fa)生揮(hui)發、氧化、pH值(zhi)變化,各(ge)溶(rong)液使(shi)用後應及時(shi)蓋緊蓋子。
具體產品(pin)的參數(shu)以收到產品(pin)說(shuo)明書(shu)的參數(shu)為準(zhun)
v 產品(pin)介紹:
本試劑盒采用特(te)制的進口(kou)DNA吸(xi)附柱和(he)獨(du)tu的緩沖液系(xi)統(tong),特(te)別(bie)適合於從口(kou)腔(qiang)/yan拭子中(zhong)分(fen)離(li)純化基因組(zu)DNA。各(ge)種(zhong)來(lai)源樣品(pin)裂(lie)解(jie)消化處(chu)理(li)後DNA在高離(li)序鹽狀(zhuang)態(tai)下選擇(ze)性吸(xi)附於離(li)心柱內(nei)矽(gui)基質膜(特別(bie)配(pei)備了(le)Acryl Carrier可以從(cong)體系(xi)中(zhong)輕(qing)松(song)捕獲微(wei)量(liang)核(he)酸(suan)),再(zai)通過壹系(xi)列(lie)快(kuai)速(su)的漂洗(xi)-離(li)心的步驟(zhou),將(jiang)鹽、細胞(bao)代謝(xie)物(wu)、蛋白等(deng)雜質去(qu)除(chu),最(zui)後低(di)鹽的洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液將純凈的基因組(zu)DNA從矽(gui)基質膜上(shang)洗(xi)脫(tuo)。純化後的DNA無雜質和(he)PCR抑(yi)制劑,可直(zhi)接適(shi)用於(yu)PCR分(fen)析(xi)。
v產品(pin)特點(dian):
1. 不(bu)需(xu)要使(shi)用有(you)毒的ben酚等試劑,也不(bu)需(xu)要乙(yi)醇(chun)沈(chen)澱(dian)等(deng)步驟(zhou)。
2. 節省時(shi)間(jian),簡捷,單(dan)個樣品(pin)操(cao)作(zuo)壹(yi)般(ban)可在20分鐘內完成(cheng)。
3. 配備了(le)Acryl Carrier用於(yu)充(chong)分(fen)收集特(te)別(bie)微量(liang)DNA。
4. 多次(ci)柱漂(piao)洗(xi)確(que)保(bao)高純度(du),提(ti)取的DNA純度(du)高,質量(liang)穩(wen)定(ding)可(ke)靠(kao),可適(shi)用於(yu)各(ge)種(zhong)常(chang)規(gui)操(cao)作(zuo),包(bao)括(kuo)PCR、酶(mei)切(qie)、測序、Southern 雜交等(deng)。
1. 所(suo)有(you)的離(li)心步驟(zhou)均(jun)在室溫(wen)完(wan)成(cheng),使(shi)用轉(zhuan)速(su)可以(yi)達到13,000rpm的傳(chuan)統(tong)臺式離(li)心機(ji),如(ru)Eppendorf 5415C或者(zhe)類(lei)似(si)離(li)心機(ji)。
2.開始(shi)實驗(yan)前將需(xu)要的水浴先預(yu)熱到特(te)定(ding)溫(wen)度(du)備用。
3.結合液CB 和(he)抑(yi)制物(wu)去除(chu)液IR中含(han)有(you)刺激(ji)性化合物(wu),操(cao)作(zuo)時(shi)戴乳(ru)膠手(shou)套,避免(mian)沾染皮膚、眼睛(jing)和(he)衣服。若(ruo)沾(zhan)染皮膚、眼睛(jing)時(shi),要用大(da)量(liang)清(qing)水(shui)或者(zhe)生(sheng)理(li)鹽水沖(chong)洗(xi)。
4. Acryl Carrier:
1)Acryl Carrier 使(shi)用方法(fa):如(ru)果起(qi)始(shi)處理(li)量(liang)很(hen)少(shao)(口(kou)腔(qiang)yan拭子上(shang)收集到的細胞很少(shao)),我們推薦(jian)使(shi)用Acryl Carrier,如(ru)果預(yu)期(qi)有(you)較(jiao)大量(liang)DNA產量(liang),用戶(hu)可(ke)以根(gen)據需(xu)要選擇(ze)是(shi)否(fou)加入(ru)Acryl Carrier。使(shi)用時(shi)在每(mei)個樣品(pin)提(ti)取所(suo)需(xu)400μl結(jie)合液CB 中加入(ru)4μl Acryl Carrier,將結(jie)合液CB與Acryl Carrier溶(rong)液充(chong)分(fen)顛(dian)倒混勻即(ji)可(結(jie)合液CB容(rong)易(yi)起(qi)泡(pao)沫(mo),請(qing)勿(wu)使(shi)用渦(wo)旋(xuan)振(zhen)蕩混勻)。也可根據樣品(pin)數(shu)量(liang),在(zai)總(zong)共需(xu)要的結合液CB中加入(ru)總(zong)共需(xu)要的Acryl Carrier混勻備用。混合液在室溫(wen)24小時(shi)內穩(wen)定。
提(ti)示(shi):第(di)壹(yi)次(ci)使(shi)用前請先在15ml漂(piao)洗(xi)液(ye)WB中加入(ru)60ml無水(shui)乙(yi)醇(chun),充(chong)分(fen)混勻,加入(ru)後請及時(shi)在方框(kuang)打鉤標記已加入(ru)乙(yi)醇(chun),以(yi)免(mian)多次(ci)加入(ru)!
取樣:取(qu)壹根(gen)醫用消(xiao)毒(du)棉(mian)簽(qian)(手(shou)不(bu)要碰(peng)觸脫(tuo)脂棉(mian)部位(wei)),伸(shen)進口(kou)腔(qiang),緊(jin)靠臉頰(jia)內(nei)側(ce)來(lai)回刮拭20次(ci)(不(bu)時(shi)旋(xuan)轉(zhuan)棉(mian)棒(bang)),需(xu)充(chong)分(fen)接觸口(kou)腔(qiang)粘(zhan)膜。
註(zhu)意(yi)事項(xiang):避免(mian)用手(shou)觸(chu)及棉(mian)簽(qian),采集(ji)前可先用清(qing)水(shui)輕輕漱口(kou)。為防止(zhi)樣本(ben)被(bei)食(shi)物(wu)或者(zhe)飲料(liao)汙染,取樣前30分鐘內應該(gai)避(bi)免(mian)進食(shi)或者(zhe)飲水。
1.用剪(jian)刀(dao)將棉(mian)簽(qian)部分從其桿上(shang)剪(jian)下,放入(ru)2ml 離(li)心管中,加入(ru)400μl裂(lie)解(jie)液ML。
2.再(zai)加入(ru)20μl的蛋白酶(mei)K (20mg/ml)溶(rong)液,立刻渦旋(xuan)振(zhen)蕩充(chong)分(fen)混勻,56℃放置(zhi)1小時(shi),期(qi)間(jian)每10分(fen)鐘渦旋(xuan)混勻10秒(miao)。
3. 加入(ru)400μl結合液CB,立刻渦旋(xuan)振(zhen)蕩充(chong)分(fen)混勻,70℃放置(zhi)10分鐘。
如(ru)果拭子上(shang)細胞(bao)數(shu)量(liang)少(shao),導(dao)致(zhi)提(ti)取的基因組(zu)DNA產量(liang)過低(di),可以(yi)在400μl結合液CB中加入(ru)4μl Acryl Carrier 。
4.冷卻後加200μl無水(shui)乙(yi)醇(chun),立刻渦旋(xuan)振(zhen)蕩充(chong)分(fen)混勻。簡短離(li)心以(yi)除(chu)去管蓋內壁的液滴,收集所(suo)有(you)的液體到管底。
如(ru)果周圍環(huan)境(jing)高於25℃,乙(yi)醇(chun)需(xu)要冰(bing)上(shang)預(yu)冷(leng)後再(zai)加入(ru)。
5. 將(jiang)上(shang)壹步混合物(wu)加入(ru)壹個吸(xi)附柱AC中(zhong),(吸(xi)附柱放入(ru)收集管中)13,000rpm離(li)心30-60秒(miao),倒掉(diao)收集管中的廢(fei)液。
棉(mian)簽(qian)的棉(mian)花可能(neng)還(hai)吸(xi)附壹些(xie)液體,如(ru)果要提(ti)高產量(liang),可(ke)以(yi)用幹(gan)凈(jing)鑷(nie)子夾擠(ji)出(chu)液(ye)體(ti)後棄(qi)棉(mian)花,減(jian)少(shao)棉(mian)花上(shang)液體(ti)殘(can)留(liu)。
6.加入(ru)500μl抑(yi)制物(wu)去除(chu)液IR,12,000rpm 離(li)心30秒(miao),棄(qi)廢(fei)液。
7. 加入(ru)500μl漂洗(xi)液(ye)WB(請先檢查(zha)是(shi)否(fou)已加入(ru)無水(shui)乙(yi)醇(chun)!),12,000rpm離(li)心30秒(miao),棄(qi)掉(diao)廢(fei)液。
8.加入(ru)500μl漂洗(xi)液(ye)WB,12,000rpm 離(li)心30秒(miao),棄(qi)掉(diao)廢(fei)液。
9. 將吸(xi)附柱AC放回(hui)空(kong)收集管中,13,000rpm離(li)心2分(fen)鐘,盡量(liang)除(chu)去(qu)漂(piao)洗(xi)液(ye),以免(mian)漂洗(xi)液(ye)中殘(can)留(liu)乙(yi)醇(chun)抑(yi)制下遊(you)反應。
10.取出(chu)吸(xi)附柱AC,放入(ru)壹個幹凈的離(li)心管中,在吸(xi)附膜的中間(jian)部位(wei)加20-50μl洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液EB(洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液事先在65-70℃水(shui)浴中預(yu)熱效(xiao)果更好(hao)), 室溫(wen)放置(zhi)1分鐘,12,000rpm離(li)心1分(fen)鐘。將得(de)到的溶(rong)液重新(xin)加入(ru)離(li)心吸(xi)附柱中(zhong),室溫(wen)放置(zhi)1分鐘,12,000rpm離(li)心1分(fen)鐘。
洗(xi)脫(tuo)體積(ji)越大(da),洗(xi)脫(tuo)效(xiao)率越高,如(ru)果需(xu)要DNA濃(nong)度(du)較(jiao)高,可以適當減(jian)少(shao)洗(xi)脫(tuo)體積(ji),但是(shi)最(zui)小體(ti)積(ji)不(bu)應少(shao)於(yu)20μl,體(ti)積(ji)過小降低(di)DNA洗(xi)脫(tuo)效(xiao)率,減(jian)少(shao)DNA產量(liang)。
11. DNA可(ke)以(yi)存(cun)放在(zai)2-8℃,如(ru)果要長時(shi)間(jian)存(cun)放,可(ke)以(yi)放置(zhi)在-20℃。
問(wen)題(ti) | 評論與建(jian)議(yi) |
DNA產量(liang)低(di)或者(zhe)洗(xi) 脫液(ye)中無DNA | Acryl Carrier沒有(you)加入(ru)到結(jie)合液CB-建(jian)議(yi):仔(zai)細(xi)閱 讀註意(yi)事項(xiang)4。 *樣品(pin)凍融(rong)超過1次-建(jian)議(yi):盡量(liang)使(shi)用新(xin)鮮(xian)樣品(pin)和(he)凍(dong) 融(rong)不(bu)超過1次的樣品(pin)。 *樣品(pin)在室溫(wen)放置(zhi)過久-建(jian)議(yi):盡快(kuai)處理(li)樣品(pin)或者(zhe)低(di) 溫(wen)適(shi)當方式保(bao)存(cun)。 *裂(lie)解(jie)不(bu)完quan,蛋白酶(mei)K失(shi)效(xiao)了(le)-建(jian)議(yi):收到蛋白酶(mei)K 後,按(an)照每次(ci)使(shi)用量(liang)分(fen)裝(zhuang)凍(dong)存(cun),避(bi)免反復凍(dong)融。 *結(jie)合液CB和(he)Acryl Carrier沒(mei)有(you)充(chong)分(fen)混勻-建(jian)議(yi): 充(chong)分(fen)渦旋(xuan)混勻。 *試劑和(he)樣(yang)品(pin)沒有(you)充(chong)分(fen)混勻-建(jian)議(yi):加入(ru)每個試劑後 都(dou)要充(chong)分(fen)混勻。 *洗(xi)脫(tuo)效(xiao)率不(bu)高-建(jian)議(yi):確(que)保(bao)做(zuo)了(le)步驟(zhou)9,否(fou)則殘(can)留(liu)乙(yi)醇(chun)會(hui)影響(xiang)洗(xi)脫(tuo)效(xiao)率,仔(zai)細(xi)閱讀步驟(zhou)13和(he)只(zhi)使(shi)用洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液EB洗(xi)脫(tuo)。 |
DNA的下遊(you)反應如(ru) PCR效(xiao)果不(bu)佳(jia) | * DNA產量(liang)低(di)或者(zhe)洗(xi)脫(tuo)液中(zhong)無DNA-建(jian)議(yi):在(zai)下遊(you)反 應中增(zeng)加DNA用量(liang)。 * 降低(di)的靈敏度(du)-建(jian)議(yi):確(que)定在下遊(you)PCR應用中(zhong)DNA 洗(xi)脫(tuo)液的最大允許(xu)用量(liang),減(jian)少(shao)或者(zhe)增(zeng)加DNA洗(xi)脫(tuo)液 在PCR反應中的用量(liang),DNA洗(xi)脫(tuo)體積(ji)也可以(yi)相(xiang)應的調 整(zheng)。 |
DNA下遊(you)酶(mei)切(qie) | * 離(li)心柱殘(can)留(liu)有(you)較(jiao)多乙(yi)醇(chun)或者(zhe)底部不(bu)慎(shen)沾有(you)乙(yi)醇(chun) 抑(yi)制了(le)酶(mei)切(qie)反應-建(jian)議(yi):確(que)保(bao)做(zuo)了(le)步驟(zhou)9,然後空氣(qi) 中晾(liang)幾(ji)分鐘,讓殘(can)留(liu)乙(yi)醇(chun)揮(hui)發。 * 壹(yi)些矽(gui)基質膜成分(fen)壹(yi)起(qi)洗(xi)脫(tuo)下來(lai),抑(yi)制了(le)酶(mei)切(qie)反 應-建(jian)議(yi):將(jiang)洗(xi)脫(tuo)的基因組(zu)DNA溶(rong)液13,000rpm再(zai)離(li)心 壹分鐘,小心(xin)取(qu)上(shang)清(qing)使(shi)用。 |
口(kou)腔(qiang)/yan拭子基因組(zu)DNA快速(su)提(ti)取試劑盒