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      1. <dl id="v6BFEW"></dl>

        1. 產(chan)品(pin)中心/ PRODUCTS

          我的(de)位(wei)置:首頁(ye)  >  產品(pin)中心  >  分子(zi)生物(wu)學(xue)試劑(ji)  >  核酸提(ti)取  >  40215微量(liang)/臨床(chuang)基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速提(ti)取試劑(ji)盒
          微(wei)量(liang)/臨床(chuang)基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速提(ti)取試劑(ji)盒
          • 產(chan)品(pin)型(xing)號:40215
          • 廠(chang)商(shang)性(xing)質:生產廠家
          • 更新(xin)時(shi)間:2025-04-22
          • 訪(fang)  問(wen)  量(liang):211
          簡要(yao)描述(shu):

          本(ben)試劑(ji)盒采用特制(zhi)的(de)進(jin)口DNA吸附(fu)柱(zhu)和獨(du)te的(de)緩沖(chong)液系(xi)統,特別(bie)適(shi)合於從微(wei)量(liang)血(xue)液、法醫材料、幹(gan)血(xue)點、藥簽(qian)、口香(xiang)糖、尿液等微量(liang)樣品(pin)中分離(li)純化基因(yin)組(zu)DNA。各種來源(yuan)樣品(pin)裂解(jie)消(xiao)化處(chu)理後(hou)DNA在(zai)高離(li)序鹽(yan)狀態下選(xuan)擇性吸(xi)附(fu)於離心柱(zhu)內(nei)矽基質(zhi)膜(mo)(特別(bie)配備(bei)了Carrier RNA可(ke)以(yi)從體(ti)系(xi)中輕松(song)捕(bu)獲(huo)微(wei)量(liang)核酸),
          微(wei)量(liang)/臨床(chuang)基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速提(ti)取試劑(ji)盒

          在(zai)線咨詢

          聯系(xi)電話:10-62817090

          產(chan)品(pin)詳情
          品(pin)牌NobleRyder/諾(nuo)博萊德貨號(hao)40215
          規格(ge)50次(ci)供(gong)貨(huo)周(zhou)期(qi)現(xian)貨
          主(zhu)要用途適(shi)合於從微(wei)量(liang)血(xue)液、法醫材料、幹(gan)血(xue)點、藥簽(qian)等微量(liang)樣品(pin)中分離(li)純化基因(yin)組(zu)DNA。應用(yong)領域環保,化工,生物(wu)產(chan)業,農林(lin)牧(mu)漁(yu),制(zhi)藥/生物(wu)制(zhi)藥

          諾博(bo)萊(lai)德 微量(liang)/臨床(chuang)基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速提(ti)取試劑(ji)盒


          臨床(chuang)基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速提(ti)取試劑(ji)盒(離(li)心柱(zhu)型(xing))

          目錄(lu)號(hao):40215

          目錄(lu)編(bian)號(hao)

          包(bao)裝(zhuang)單位(wei)

          40215-50

          50次(ci)

            適用(yong)範圍(wei):

          適合於從微(wei)量(liang)血(xue)液、法醫材料、幹(gan)血(xue)點、藥簽(qian)等微量(liang)樣品(pin)中分離(li)純化基因(yin)組(zu)DNA。

          試劑(ji)盒組(zu)成(cheng)、儲(chu)存(cun)、穩定(ding)性(xing):

          試劑(ji)盒組(zu)成(cheng)

          保存(cun)

          50次(ci)

          裂解(jie)液ML

          室溫

          11ml

          結合液CB

          室溫

          15ml

          抑制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液IR

          室溫

          25ml

          漂(piao)洗(xi)液WB

          室溫

          10ml

          第(di)壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)按(an)說(shuo)明(ming)加指ding量(liang)乙(yi)醇

          Carrier RNA

          -20℃

          310μg

          洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液EB

          室溫

          10ml

          蛋白(bai)酶K fen(可選(xuan))

          20mg/ml

          -20℃

          20mg

          吸附(fu)柱(zhu)AC和收(shou)集管

          室溫

          50套(tao)

          本試劑(ji)盒在(zai)室溫儲(chu)存(cun)12個月(yue)不(bu)影響(xiang)使用效果  


          具體(ti)產品(pin)的(de)參數以(yi)收到產品(pin)說明(ming)書的(de)參數為(wei)準


          儲(chu)存(cun)事項(xiang):

          1. 結合液CB或(huo)者(zhe)抑(yi)制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液IR低溫時(shi)可能(neng)出(chu)現(xian)析(xi)出(chu)和沈澱(dian),可以(yi)在(zai)37℃水浴幾(ji)分鐘(zhong)幫(bang)助重(zhong)新溶(rong)解(jie),恢(hui)復澄(cheng)清透明後冷(leng)卻到室溫即可使用。

          2.   為避(bi)免(mian)降低活性,方(fang)便(bian)運(yun)輸(shu),提供(gong)蛋(dan)白(bai)酶K為凍幹(gan)粉(fen)狀,收(shou)到後,可(ke)短(duan)暫離心後,加入1毫(hao)升(sheng)滅(mie)菌水溶解(jie)。因(yin)為(wei)反(fan)復凍融可能(neng)會(hui)降低酶活性,因(yin)此溶解(jie)後(hou)立(li)即(ji)按(an)照每(mei)次(ci)使(shi)用(yong)量(liang)(20微(wei)升)分裝(zhuang)凍存,-20℃保(bao)存(cun)。

          3.   Carrier RNA收到時(shi)為凍幹(gan)粉(fen)狀,使(shi)用(yong)前(qian)按(an)照註(zhu)意事項(xiang)4配制(zhi)和儲(chu)存(cun)。

          4.   避免(mian)試劑(ji)長時(shi)間暴(bao)露(lu)於空(kong)氣中發生揮發、氧化、pH值變(bian)化,各溶(rong)液使用後(hou)應及(ji)時(shi)蓋緊(jin)蓋子(zi)。仔(zai)細閱讀(du)註意事項(xiang)4。

          產品(pin)介紹(shao):

          本試劑(ji)盒采用特制(zhi)的(de)進(jin)口DNA吸附(fu)柱(zhu)和獨(du)te的(de)緩沖(chong)液系(xi)統,特別(bie)適(shi)合於從微(wei)量(liang)血(xue)液、法醫材料、幹(gan)血(xue)點、藥簽(qian)、口香(xiang)糖、尿液等微量(liang)樣品(pin)中分離(li)純化基因(yin)組(zu)DNA。各種來源(yuan)樣品(pin)裂解(jie)消(xiao)化處(chu)理後(hou)DNA在(zai)高離(li)序鹽(yan)狀態下選(xuan)擇性吸(xi)附(fu)於離心柱(zhu)內(nei)矽基質(zhi)膜(mo)(特別(bie)配備(bei)了Carrier RNA可(ke)以(yi)從體(ti)系(xi)中輕松(song)捕(bu)獲(huo)微(wei)量(liang)核酸),再(zai)通(tong)過(guo)壹(yi)系(xi)列(lie)快(kuai)速的(de)漂(piao)洗(xi)-離(li)心的(de)步驟(zhou),將(jiang)鹽(yan)、細胞(bao)代謝(xie)物(wu)、蛋(dan)白等雜質去除(chu),最(zui)後(hou)低鹽(yan)的(de)洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液將(jiang)純凈(jing)的(de)基因(yin)組(zu)DNA從矽基質(zhi)膜(mo)上洗(xi)脫(tuo)。純化後的(de)DNA無(wu)雜質和PCR抑(yi)制(zhi)劑,可(ke)直接(jie)適用於PCR分析(xi)。

          產品(pin)特點:

          1.        不需(xu)要使(shi)用(yong)有毒的(de)ben酚(fen)等(deng)試劑(ji),也不需(xu)要乙(yi)醇沈澱(dian)等步驟(zhou)。

          2.        節省(sheng)時(shi)間,簡捷,單個樣品(pin)操作(zuo)壹(yi)般(ban)可(ke)在(zai)20分鐘(zhong)內(nei)完成(cheng)。

          3.        配備(bei)了Carrier RNA用(yong)於充分收(shou)集特別(bie)微(wei)量(liang)DNA。

          4.        多次(ci)柱(zhu)漂(piao)洗(xi)確(que)保高純度(du),提取(qu)的(de)DNA 純(chun)度(du)高,質(zhi)量(liang)穩定(ding)可(ke)靠(kao),可(ke)適用(yong)於各種常規操(cao)作(zuo),包(bao)括PCR、酶切(qie)、測序、Southern雜交(jiao)等。

          註意事項(xiang):

          1.        所有的(de)離(li)心步驟(zhou)均(jun)在(zai)室溫完成(cheng),使用(yong)轉速(su)可以(yi)達(da)到13,000rpm的(de)傳(chuan)統臺式(shi)離(li)心機,如(ru)Eppendorf 5415C或(huo)者(zhe)類似離(li)心機。

          2.        開始實驗前(qian)將(jiang)需(xu)要的(de)水浴先(xian)預(yu)熱到所需(xu)溫度(du)備(bei)用。部(bu)分樣品(pin)需(xu)要準備(bei)1M DTT。

          3.        結合液CB和抑(yi)制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液IR中含有(you)刺(ci)激(ji)性化合物(wu),操(cao)作時(shi)戴乳膠(jiao)手(shou)套(tao),避免(mian)沾(zhan)染(ran)皮膚(fu)、眼(yan)睛和衣(yi)服(fu)。若(ruo)沾染(ran)皮膚(fu)、眼(yan)睛時(shi),要用大量(liang)清水或(huo)者(zhe)生理鹽(yan)水沖(chong)洗(xi)。

          4.        Carrier RNA :

          1)   Carrier RNA收到時(shi)為凍幹(gan)狀,使(shi)用(yong)時(shi)加入310μl RNase free 水充分溶(rong)解(jie),配制(zhi)成(cheng)1μg/μl 溶液。Carrier RNA溶液應避(bi)免(mian)反(fan)復凍融,凍融次(ci)數不(bu)能(neng)超(chao)過3次(ci)。所以(yi)建(jian)議(yi)在(zai)第(di)壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)時(shi)按(an)自(zi)己(ji)每(mei)次(ci)的(de)用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)在(zai)RNase-free的(de)離(li)心管中後置於-20℃儲(chu)存(cun)。

          2)   Carrier RNA使用(yong)方(fang)法(fa):如(ru)果(guo)起(qi)始處(chu)理量(liang)很(hen)少(例如小於10μl全(quan)血(xue)和法(fa)醫樣品(pin)),我們(men)推薦(jian)使用(yong)Carrier RNA,如果(guo)預期(qi)有較(jiao)大量(liang)DNA產(chan)量(liang),用(yong)戶可(ke)以(yi)根(gen)據(ju)需(xu)要選(xuan)擇是否(fou)加入Carrier RNA。使(shi)用(yong)時(shi)在(zai)每(mei)個樣品(pin)提取(qu)所需(xu)結合液CB中加入1μl Carrier RNA儲(chu)存(cun)溶(rong)液, 將(jiang)結合液CB與(yu)Carrier RNA溶(rong)液充分顛(dian)倒(dao)混(hun)勻(yun)即(ji)可(ke)(結(jie)合液CB容(rong)易起(qi)泡沫,請勿(wu)使用(yong)渦(wo)旋振蕩(dang)混(hun)勻(yun))。也可根(gen)據(ju)樣品(pin)數量(liang),在(zai)總共(gong)需(xu)要的(de)結(jie)合液CB中加入總共(gong)需(xu)要的(de)Carrier RNA混(hun)勻(yun)備(bei)用。混(hun)合液在(zai)室溫24小時(shi)內(nei)穩定(ding)。

          3)   Carrier RNA加入過(guo)多(duo)造(zao)成(cheng)DNA洗(xi)脫(tuo)液中Carrier RNA濃度(du)過高(gao),下遊(you)PCR反(fan)應可(ke)能(neng)受(shou)幹(gan)擾,加入過(guo)少(shao)可(ke)能(neng)並(bing)不能(neng)幫(bang)助提(ti)高(gao)DNA產(chan)量(liang)和PCR敏(min)感度(du),因此加入量(liang)應該(gai)在(zai)具體(ti)試驗中調整(zheng)以(yi)得(de)到優(you)良(liang)效(xiao)果(guo)。

          4)   由於Carrier RNA本身(shen)是小核酸,所以(yi)得(de)到的(de)基因(yin)組(zu)測定(ding)OD260值會(hui)比真實(shi)值(zhi)偏大,建(jian)議(yi)將(jiang)得(de)到的(de)基因(yin)組(zu)直接(jie)用PCR 進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)。

          操作(zuo)步驟(zhou):(實驗前(qian)請(qing)先(xian)閱(yue)讀(du)註意事項(xiang))

          提示(shi):第(di)壹(yi)次(ci)使(shi)用(yong)前(qian)請(qing)先(xian)在(zai)15ml漂(piao)洗(xi)液WB中加入60ml無(wu)水乙醇,充分混(hun)勻(yun),加入後(hou)請(qing)及(ji)時(shi)在(zai)方框(kuang)打(da)鉤(gou)標(biao)記已(yi)加入乙(yi)醇,以(yi)免(mian)多(duo)次(ci)加入!

          1.        血(xue)液樣品(pin)

          a.        取1-100μl血(xue)液到1.5ml 的(de)離(li)心管中。

          b.        如果(guo)不(bu)足(zu)100μl,加入裂解(jie)液ML補足到100μl。

          c.        加入10μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K (20mg/ml)溶液,充分混(hun)勻(yun),再(zai)加入100μl結(jie)合液CB,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun),在(zai)70℃放置10分鐘(zhong)。

          如果(guo)處(chu)理樣品(pin)<10μl,建(jian)議(yi)在(zai)100μl結合液CB 中加入1μlCarrier RNA儲(chu)存(cun)溶(rong)液。

          d.        冷卻後加入50μl無(wu)水乙醇,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun),室溫放置3分鐘(zhong)。

          如果(guo)周(zhou)圍環境(jing)高於25℃,乙醇需(xu)要冰(bing)上(shang)預冷後(hou)再(zai)加入。

          e.        接操(cao)作(zuo)步驟(zhou)項(xiang)下7。

          2.        幹(gan)血(xue)點

          a.        用打(da)孔機打(da)孔的(de)方(fang)法(fa)在(zai)血(xue)卡(ka)(上面有(you)幹(gan)血(xue)點)上沖(chong)取(qu)3mm(1/8英(ying)寸)直(zhi)徑(jing)血(xue)卡(ka)小片(上(shang)面有(you)幹(gan)血(xue)點),最(zui)多(duo)將(jiang)3個直(zhi)徑(jing)3mm血(xue)卡(ka)小片放(fang)入1.5ml的(de)離(li)心管中。

          壹(yi)般(ban)血(xue)液應該(gai)點在(zai)特定(ding)紙(zhi)或(huo)者(zhe)血(xue)卡(ka)上面幹(gan)燥,如(ru)903 paper or IsoCode paper (Schleicher & Schuell), BloodstainCard or FTA Card (Whatman), Guthrie test cards, or comparable blood cards.

          b.       加入180μl裂解(jie)液ML。

          c.       加入20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K (20mg/ml)溶液,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          d.       56℃軌道搖(yao)床(chuang)上面900rpm振搖(yao)1小時(shi)。

          如果(guo)沒(mei)有(you)可加熱軌道搖(yao)床(chuang),可以(yi)在(zai)水浴或(huo)者(zhe)heating block上(shang)面進(jin)行(xing),每(mei)10分鐘渦旋振蕩(dang)10秒幫(bang)助裂解(jie)。

          e.       加入200μl結(jie)合液CB,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          如果(guo)只(zhi)處(chu)理壹(yi)個3mm血(xue)卡(ka)小片,建(jian)議(yi)在(zai)200μl結合液CB中加入1μlCarrier RNA儲(chu)存(cun)溶(rong)液。

          f.      70℃軌道搖(yao)床(chuang)上面900rpm振搖(yao)10分(fen)鐘(zhong)。

          如果(guo)沒(mei)有(you)可加熱軌道搖(yao)床(chuang),可以(yi)在(zai)水浴或(huo)者(zhe)heating block上(shang)面進(jin)行(xing),每(mei)3分鐘渦旋振蕩(dang)10秒幫(bang)助裂解(jie)。

          g.      接操(cao)作(zuo)步驟(zhou)項(xiang)下7。

          3.       組(zu)織樣品(pin)

          a.        新鮮(xian)或(huo)者(zhe)解(jie)凍的(de)組(zu)織在(zai)液氮(dan)中研磨(mo)成(cheng)細粉(fen)後或(huo)者(zhe)用(yong)解(jie)pao刀(dao)切(qie)成(cheng)小碎(sui)塊(kuai)(切(qie)成(cheng)微塊(kuai)可以(yi)提高(gao)產(chan)量(liang))後(hou)取<10mg,轉入裝(zhuang)有(you)180μl裂解(jie)液ML的(de)1.5ml離(li)心管中,用大口徑(jing)槍頭(tou)吹打(da)混(hun)勻(yun)。

          b.       加入20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          c.       將(jiang)裂解(jie)物(wu)放(fang)置在(zai)56℃水浴過(guo)夜或(huo)者(zhe)直(zhi)到組(zu)織消(xiao)化完quan,期(qi)間輕(qing)柔(rou)的(de)振蕩(dang)幾(ji)次(ci)幫(bang)助裂解(jie)。

          對於小量(liang)的(de)組(zu)織,壹(yi)般(ban)4-6小時(shi)即可,但(dan)是過(guo)夜消(xiao)化可以(yi)得(de)到優(you)良(liang)結(jie)果(guo)。

          d.        加入200μl結(jie)合液CB,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          如果(guo)處(chu)理樣品(pin)量(liang)少(shao),建(jian)議(yi)在(zai)200μl結合液CB中加入1μlCarrier RNA儲(chu)存(cun)溶(rong)液。

          e.       冷卻後加200μl無(wu)水乙醇,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun),室溫放置5分鐘(zhong)。

          如果(guo)周(zhou)圍環境(jing)高於25℃,乙醇需(xu)要冰(bing)上(shang)預冷後(hou)再(zai)加入。

          f.        接操(cao)作(zuo)步驟(zhou)項(xiang)下7。

          4.        口香(xiang)糖

          a.        將(jiang)30mg口香(xiang)糖切(qie)成(cheng)小塊(kuai)放入1.5ml離(li)心管,加入280μl裂解(jie)液ML和20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          b.        56℃軌道搖(yao)床(chuang)上面900rpm振搖(yao)至(zhi)少(shao)3小時(shi)。

          如果(guo)沒(mei)有(you)可加熱軌道搖(yao)床(chuang),可以(yi)在(zai)水浴或(huo)者(zhe)heating block上(shang)面進(jin)行(xing),每(mei)10分鐘渦旋振蕩(dang)10秒幫(bang)助裂解(jie)。

          c.        加入200μl結(jie)合液CB(加入1μl Carrier RNA),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          d.        70℃軌道搖(yao)床(chuang)上面900rpm振搖(yao)1小時(shi)。

          如果(guo)沒(mei)有(you)可加熱軌道搖(yao)床(chuang),可以(yi)在(zai)水浴或(huo)者(zhe)heating block上(shang)面進(jin)行(xing),每(mei)10分鐘渦旋振蕩(dang)10秒幫(bang)助裂解(jie)。

          e.        冷卻後加200μl無(wu)水乙醇,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          f.   最(zui)高(gao)速(約14,000rpm)離心1分鐘(zhong),取上(shang)清加入壹(yi)個吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC中,(吸附(fu)柱(zhu)放入收(shou)集管中)13,000rpm離心30-60秒,倒(dao)掉收集管中的(de)廢(fei)液。

          g.        接操(cao)作(zuo)步驟(zhou)項(xiang)下8。

          5.        法醫材料

          a1.      剪下1 cm2煙(yan)頭(tou)或(huo)者(zhe)過(guo)濾(lv)嘴(zui)外(wai)層紙(zhi),切(qie)成(cheng)6小塊(kuai)放入1.5ml離(li)心管,加入300μl裂解(jie)液ML和20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。接(jie)步驟(zhou)b。

          a2.      剪下0.5-2.5 cm2信(xin)封或(huo)者(zhe)郵票,切(qie)成(cheng)小塊(kuai)放入1.5ml離(li)心管,加入300μl裂解(jie)液ML和20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。接(jie)步驟(zhou)b。

          a3.       從毛發根(gen)部(bu)毛囊(nang)處(chu)開始剪下0.5-1 cm長(chang)度(du)毛發放入1.5ml離(li)心管,加入280μl裂解(jie)液ML和20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶(rong)液,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。接(jie)步驟(zhou)b。

          a4.       將(jiang)指甲(jia)剪成(cheng)小塊(kuai)放入1.5ml離(li)心管,加入280μl裂解(jie)液ML和20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml)和20μl 1M DTT溶(rong)液,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。接(jie)步驟(zhou)b。

          a5.       將(jiang)約0.5cm2信封(feng)沾染(ran)了(le)血(xue)液、唾(tuo)液、精液的(de)材料剪成(cheng)小塊(kuai)放入1.5ml離(li)心管,加入300μl裂解(jie)液ML和20μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml) (如果是(shi)精液需(xu)另(ling)加入20μl 1M DTT溶(rong)液),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。接(jie)步驟(zhou)b。

          b.    56℃軌道搖(yao)床(chuang)上面900rpm振搖(yao)1小時(shi)。

          如果(guo)沒(mei)有(you)可加熱軌道搖(yao)床(chuang),可以(yi)在(zai)水浴或(huo)者(zhe)heating block上(shang)面進(jin)行(xing),每(mei)10分鐘渦旋振蕩(dang)10秒幫(bang)助裂解(jie)。

          壹(yi)般(ban)毛發1小時(shi)裂解(jie)可(ke)以(yi)完成(cheng),如果(guo)不完(wan)quan可以(yi)延長(chang)時(shi)間。指甲(jia)等(deng)難裂解(jie)物(wu)建(jian)議(yi)過(guo)夜裂解(jie)。最(zui)後(hou)沒(mei)有(you)裂解(jie)的(de)不(bu)溶(rong)物(wu)在(zai)後續(xu)步驟(zhou)e中會(hui)通過(guo)離(li)心去除(chu)。

          c.    加入200μl結(jie)合液CB(加入1μl Carrier RNA),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          d.    70℃軌道搖(yao)床(chuang)上面900rpm振搖(yao)1小時(shi)。

          e.    最(zui)高(gao)速(約14,000rpm)離心1分鐘(zhong),取上(shang)清加入壹(yi)個吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC中,(吸附(fu)柱(zhu)放入收(shou)集管中)13,000rpm離心30-60秒,倒(dao)掉收集管中的(de)廢(fei)液。

          f.    接操(cao)作(zuo)步驟(zhou)項(xiang)下8。

          6.        微切(qie)割樣品(pin)(包(bao)括福爾馬(ma)林(lin)固(gu)定(ding)的(de)微(wei)切(qie)割樣品(pin))

          a.    加入15μl裂解(jie)液ML 到0.2 ml 離心管中,放入微(wei)切(qie)割樣品(pin)。

          b.    加入10μl的(de)蛋(dan)白(bai)酶K溶液(20mg/ml) ,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          c.  56℃水浴3小時(shi)(福爾馬(ma)林(lin)樣品(pin)16小時(shi))至(zhi)裂解(jie)完(wan)quan,中間不(bu)時(shi)顛(dian)倒(dao)渦旋。

          d.  加入15μl裂解(jie)液ML,再(zai)加入50μl結(jie)合液CB(加入1μl Carrier RNA),立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun)。

          e.冷卻後加入50μl無(wu)水乙醇,立(li)刻(ke)渦旋振蕩(dang)充分混(hun)勻(yun),室溫放置5分鐘(zhong)。

          如果(guo)周(zhou)圍環境(jing)高於25℃,乙醇需(xu)要冰(bing)上(shang)預冷後(hou)再(zai)加入。

          f.接操(cao)作(zuo)步驟(zhou)項(xiang)下7。

          7.       將(jiang)上壹(yi)步混(hun)合物(wu)(包(bao)括可(ke)能(neng)有(you)的(de)沈澱(dian))加入壹(yi)個吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC中,(吸附(fu)柱(zhu)放入收(shou)集管中)13,000rpm離心30-60秒,倒(dao)掉收集管中的(de)廢(fei)液。

          8.        加入500μl抑(yi)制(zhi)物(wu)去(qu)除(chu)液IR,12,000rpm離心30秒,棄(qi)廢液。

          9.        加入500μl漂(piao)洗(xi)液WB(請先檢(jian)查是否(fou)已(yi)加入無(wu)水乙醇!),12,000rpm離心30秒,棄(qi)掉廢液。

          10.    加入500μl漂(piao)洗(xi)液WB,12,000rpm離心30秒,棄(qi)掉廢液。

          11.   將(jiang)吸附(fu)柱(zhu)AC放回空(kong)收集管中,13,000rpm離心2分鐘(zhong),盡(jin)量(liang)除(chu)去(qu)漂(piao)洗(xi)液, 以(yi)免(mian)漂(piao)洗(xi)液中殘留乙醇抑制(zhi)下遊(you)反(fan)應。

          12.  取出(chu)吸(xi)附(fu)柱(zhu)AC,放入壹(yi)個幹(gan)凈(jing)的(de)離(li)心管中,在(zai)吸附(fu)膜(mo)的(de)中間部(bu)位加20-50μl洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液EB(洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液事先在(zai)65-70℃水浴中預熱效果(guo)更好), 室溫放置2-5分鐘(zhong),12,000rpm離(li)心1分鐘(zhong)。將(jiang)得(de)到的(de)溶(rong)液重(zhong)新加入離(li)心吸附(fu)柱(zhu)中,室溫放置2分鐘(zhong),12,000rpm離(li)心1分鐘(zhong)。

          洗(xi)脫(tuo)體(ti)積越大,洗(xi)脫(tuo)效率(lv)越高,如(ru)果需(xu)要DNA濃(nong)度(du)較(jiao)高(gao),可以(yi)適當(dang)減(jian)少洗(xi)脫(tuo)體(ti)積,但(dan)是最(zui)小體(ti)積不(bu)應少(shao)於20μl,體(ti)積過(guo)小降低DNA洗(xi)脫(tuo)效率(lv),減(jian)少(shao)DNA產量(liang)。

          13.DNA可以(yi)存放(fang)在(zai)2-8℃,如果(guo)要長(chang)時(shi)間存(cun)放(fang),可以(yi)放置在(zai)-20℃。

          問(wen)題(ti)與(yu)解(jie)決(jue)方法(fa)

          問(wen)題(ti)

          評論與(yu)建(jian)議(yi)

          DNA產量(liang)低(di)或(huo)者(zhe)洗(xi)脫(tuo)液中無DNA

          *Carrier RNA沒(mei)有(you)加入到結合液CB-建(jian)議(yi):仔(zai)細閱讀(du)註意事項(xiang)4。

          *樣品(pin)凍融超(chao)過1次(ci)-建(jian)議(yi):盡(jin)量(liang)使(shi)用新鮮樣品(pin)和凍融不超(chao)過1次(ci)的(de)樣品(pin)。

          *樣品(pin)在(zai)室溫放置過久(jiu)-建(jian)議(yi):盡(jin)快(kuai)處(chu)理樣品(pin)或(huo)者(zhe)低(di)溫(wen)適(shi)當(dang)方(fang)式(shi)保(bao)存。

          *裂解(jie)不(bu)完(wan)quan,蛋(dan)白酶K失(shi)效(xiao)了(le)-建(jian)議(yi):收(shou)到蛋白(bai)酶K後,按(an)照每(mei)次(ci)使(shi)用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)凍存,避(bi)免(mian)反(fan)復凍融。

          *結合液CB和Carrier RNA沒(mei)有(you)充分混(hun)勻(yun)-建(jian)議(yi):充分顛(dian)倒(dao)混(hun)勻(yun)。

          *試劑(ji)和樣品(pin)沒(mei)有(you)充分混(hun)勻(yun)-建(jian)議(yi):加入每(mei)個試劑(ji)後都(dou)要(yao)充分混(hun)勻(yun)。

          *洗(xi)脫(tuo)效率(lv)不(bu)高(gao)-建(jian)議(yi):確(que)保(bao)做(zuo)了步驟(zhou)11,否(fou)則(ze)殘留乙醇會(hui)影響(xiang)洗(xi)脫(tuo)效率(lv),仔(zai)細閱讀(du)步驟(zhou)12和只(zhi)使用(yong)洗(xi)脫(tuo)緩沖(chong)液EB洗(xi)脫(tuo)。

          DNA的(de)下遊(you)反(fan)應如(ru)PCR效果(guo)不佳(jia)

          * DNA產量(liang)低(di)或(huo)者(zhe)洗(xi)脫(tuo)液中無DNA-建(jian)議(yi):在(zai)下遊(you)反(fan)應中增加DNA用(yong)量(liang)。

          * 洗(xi)脫(tuo)液中太多(duo)或(huo)者(zhe)太(tai)少(shao)的(de)Carrier RNA-建(jian)議(yi):確(que)定(ding)在(zai)下遊(you)應用(yong)中Carrier RNA的(de)最(zui)大允(yun)許量(liang),調(tiao)整(zheng)結合液CB中加入Carrier RNA的(de)用(yong)量(liang)。仔(zai)細閱讀(du)註意事項(xiang)4。

          * 降低的(de)靈(ling)敏(min)度(du)-建(jian)議(yi):確(que)定(ding)在(zai)下遊(you)PCR應用(yong)中DNA洗(xi)脫(tuo)液的(de)最(zui)大允(yun)許用(yong)量(liang),減(jian)少或(huo)者(zhe)增(zeng)加DNA洗(xi)脫(tuo)液在(zai)PCR反應中的(de)用(yong)量(liang),DNA洗(xi)脫(tuo)體(ti)積也可以(yi)相應的(de)調(tiao)整(zheng)。

          DNA下遊(you)酶切(qie)
          不能(neng)切(qie)開或(huo)者(zhe)
          酶切(qie)不完quan

          *離心柱(zhu)殘留有較(jiao)多(duo)乙醇或(huo)者(zhe)底部(bu)不慎(shen)沾有(you)乙醇抑制(zhi)了酶切(qie)反應-建(jian)議(yi):確(que)保(bao)做(zuo)了步驟(zhou)11,然後空(kong)氣中晾幾(ji)分鐘(zhong),讓(rang)殘留乙醇揮發。

          *壹(yi)些(xie)矽基質(zhi)膜(mo)成(cheng)分壹(yi)起(qi)洗(xi)脫(tuo)下來,抑(yi)制(zhi)了酶切(qie)反應-建(jian)議(yi):將(jiang)洗(xi)脫(tuo)的(de)基因(yin)組(zu)DNA溶液13,000rpm再(zai)離(li)心壹(yi)分(fen)鐘(zhong),小心取上(shang)清使用。

          A260吸光(guang)值
          異(yi)常偏高(gao)

          *壹(yi)些(xie)矽基質(zhi)膜(mo)成(cheng)分壹(yi)起(qi)洗(xi)脫(tuo)下來,幹(gan)擾了吸(xi)光(guang)值-建(jian)議(yi):將(jiang)洗(xi)脫(tuo)的(de)基因(yin)組(zu)DNA溶液13,000rpm再(zai)離(li)心壹(yi)分(fen)鐘(zhong),小心取上(shang)清使用。

           

           

          微量(liang)/臨床(chuang)基因(yin)組(zu)DNA快(kuai)速提(ti)取試劑(ji)盒

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